【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于ce&mn@cds纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，属于食品检测。
技术介绍
1、氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate，ec)又称尿烷(urethane)，是一种可能的人类致癌物(2a类)，在发酵和储存过程中自然形成，普遍存在于发酵食品和酒类产品中。我国是白酒生产大国，酒的发酵、贮存过程中都会产生一定量的ec。近年来，随着我国白酒市场日益增大，酒的安全问题备受关注，我国在2015年发布了《食品安全国家标准食品中氨基甲酸一致的测定》(gb 5009.223-2014)，规定了各类酒中ec的测定方法。因此，建立快速有效的酒中ec的分析方法对于判断酒中ec的残留水平、制定残留限量以及研究预防和控制具有参考价值。同时，通过对酒生产过程中ec的生成机制和控制方法的研究，可以有效预防和控制酒中ec的残留，确保酒产品的质量和安全。
2、目前，常用的酒中ec检测方法包括气相色谱-质谱联用(gc-ms)和高效液相色谱-紫外检测器(hplc-uv)方法。gc-ms方法通过气相色谱将ec分离，并使用质谱仪进行检测和定量分析，具有高灵敏度和高选择性。hplc-uv方法则使用高效液相色谱柱分离ec，并通过紫外检测器进行检测和测量。这些方法可以准确测定酒类中ec的含量，尤其适用于测量低浓度的ec。尽管gc-ms和hplc-uv方法在ec测定中表现出色，但它们在样品预处理复杂、仪器昂贵、测试人员要求高以及后期维护成本高等方面存在一些缺点。除了这些传统的方法，还有其他一些新兴的ec检测方法，如酶联免
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基于ce&mn@cds纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种ce&mn@cds纳米酶，所述ce&mn@cds纳米酶的制备方法包括下列步骤：
3、s1：将柠檬酸、mncl2·4h2o、ce(no3)3和乙二胺溶解在含有1％冰醋酸的去离子水中；超声反应25.0-35.0min后，将混合物转移到反应釜中，密闭，在175-185℃条件下反应5.0-7.0h；
4、s2：将步骤1得到的产物吸出，加入去离子水后混合均匀；在10000-14000rpm下离心8.0-12.0min，取出上清液；随后在分子量500-1000kda的透析袋中，在去离子水中透析20.0-30.0h；
5、s3：将透析纯化后的溶液置于真空冷冻干燥机中冻干，收集冻干粉末得到ce&mn@cds纳米酶。
6、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种基于ce&mn@cds纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，包括下列步骤：
7、步骤1：测定样品反应结束后的紫外光谱信号及其颜色信号rgb值：
8、在室温下，将乙酰胆碱酯酶溶液、乙酰硫代胆碱溶液、邻苯二胺溶液、权利要求1所述的ce&mn@cds纳米酶与不同浓度的被br2-naoh处理的标准品氨基甲酸乙酯溶液在hac-naac缓冲液中反应；反应结束后得到完全反应液，用紫外分光光度计测其435nm处吸光度信号，然后将其滴在滤纸条上，使用安装了color picker app的智能手机收集颜色信号；
9、步骤2：测定样品反应结束后的比率荧光信号及其颜色信号rgb值：
10、将步骤1中完全反应液用荧光分光光度计测其440nm和550nm处吸光度信号，接着滴在滤纸条上用365nm紫外灯照射后，使用安装了color picker app的智能手机收集荧光信号；
11、步骤3：构建氨基甲酸乙酯与比色信号和荧光信号的线性方程
12、根据系列浓度的标准品测试获得比色信号吸光度a和g/b，构建线性方程，a＝xcec+y和g/b＝xcec+y，其中cec为标准品浓度；
13、根据系列浓度的标准品测试获得荧光信号吸光度f550/440和g/b，构建线性方程，f550/440＝xcec+y和g/b＝xcec+y，其中cec为标准品浓度；
14、步骤4：取待测样品，重复步骤1和步骤2获得比色信号和荧光信号，分别代入相应的线性方程，获得待测样品中的氨基甲酸乙酯的浓度。
15、优选的技术方案为：步骤1中，hac-naac缓冲液的ph值为5.0；ce&mn@cds纳米酶的浓度为50.0μg/ml；邻苯二胺溶液的浓度为10.0mmol/l；乙酰胆碱酯酶溶液浓度为20.0mu/ml；乙酰硫代胆碱溶液的浓度为10.0mmol/l；br2：naoh的体积比为5：1；br2-naoh和氨基甲酸乙酯标准品的体积比为1：200；br2-naoh处理ec标准品的时间为13.0-17.0min；混合溶液的总量为200.0μl；反应温度为37.0-43.0℃；反应时间为17.0-23.0min。
16、优选的技术方案为：步骤3中，比色信号a回归方程为a＝0.00295cec+0.37948，g/b回归方程为g/b＝0.00228cec+1.07925；荧光信号f550/440回归方程为f550/440＝0.00644cec+0.37312，g/b回归方程为g/b＝0.00353cec+1.09484。
17、优选的技术方案为：酒类中氨基甲酸乙酯的限量标准按照以下方法进行参考判别：根据2002年联合国粮农组织制定的国际标准可知酒类中氨基甲酸乙酯限量不得超过20.0μg/l。
18、由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有的优点是：
19、1、本专利技术设计并合成的ce&mn@cds纳米酶具有优异的类氧化酶活性，操作简便。
20、2、本专利技术检测时间较短，仅需35.0min即可通过肉眼观察到试剂颜色的变化，实现氨基甲酸乙酯的检测。
21、3、本专利技术采用比色-荧光双模态检测，双模态的检测方法提高了检测的可靠性。
22、4、本专利技术不需要复杂仪器，仅需装有color picker app的智能手机和就可收集比色和荧光信号。
23、5、本专利技术实现了酒类中氨基甲酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Ce&Mn@CDs纳米酶，其特征在于：所述Ce&Mn@CDs纳米酶的制备方法包括下列步骤：
2.一种基于Ce&Mn@CDs纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：包括下列步骤：
3.根据权利要求2所述的基于Ce&Mn@CDs纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：步骤1中，HAc-NaAc缓冲液的pH值为5.0；Ce&Mn@CDs纳米酶的浓度为50.0μg/mL；邻苯二胺溶液的浓度为10.0mmol/L；乙酰胆碱酯酶溶液浓度为20.0mU/mL；乙酰硫代胆碱溶液的浓度为10.0mmol/L；Br2：NaOH的体积比为5：1；Br2-NaOH和氨基甲酸乙酯标准品的体积比为1：200；Br2-NaOH处理EC标准品的时间为13.0-17.0min；混合溶液的总量为200.0μL；反应温度为37.0-43.0℃；反应时间为17.0-23.0min。
4.根据权利要求2所述的基于Ce&Mn@CDs纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：步骤3中
5.根据权利要求2所述的基于Ce&Mn@CDs纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：酒类中氨基甲酸乙酯的限量标准按照以下方法进行参考判别：根据2002年联合国粮农组织制定的国际标准可知酒类中氨基甲酸乙酯限量不得超过20.0μg/L。
...【技术特征摘要】
1.一种ce&mn@cds纳米酶，其特征在于：所述ce&mn@cds纳米酶的制备方法包括下列步骤：
2.一种基于ce&mn@cds纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：包括下列步骤：
3.根据权利要求2所述的基于ce&mn@cds纳米酶的双模定量检测酒类中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：步骤1中，hac-naac缓冲液的ph值为5.0；ce&mn@cds纳米酶的浓度为50.0μg/ml；邻苯二胺溶液的浓度为10.0mmol/l；乙酰胆碱酯酶溶液浓度为20.0mu/ml；乙酰硫代胆碱溶液的浓度为10.0mmol/l；br2：naoh的体积比为5：1；br2-naoh和氨基甲酸乙酯标准品的体积比为1：200；br2-naoh处理ec标准品的时间为13.0-17.0min；混合溶液的总量...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈益忠，吴国建，郑志，仇慧敏，聂鹏，张洋，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：
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