孕前开始的维生素Ａ缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法技术

本发明专利技术公开孕前开始的维生素Ａ缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下：第一步，配制基础饲料；其成分的重量百分比为，动物蛋白质２０％、植物脂肪５％、葡萄糖６８．００５％、无机盐组合物６．７５０％、维生素组合物０．２４５％；按照上述配方混匀后，加入视黄醇２００－４００ＩＵ／ｋｇ并充分混匀，再加入蒸馏水制成块状，室温干燥，－２０℃保存，作为维生素Ａ缺乏母鼠实验组的饲料；第二步，选择实验动物；第三步，构建维生素Ａ缺乏母鼠模型；第四步，构建维生素Ａ缺乏仔鼠模型；本发明专利技术构建模型流程简单，成功率高，便于推广应用；为维生素Ａ缺乏机理的研究、寻找最佳补充干预时间及维生素Ａ强化食品的开发和鉴定提供了技术平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物模型的建立方法，尤其是一种孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其 仔鼠动物模型的构建方法。
技术介绍
维生素A (vitamin Α)缺乏在世界范围内广泛存在，并与铁(Fe)缺乏、碘(I)缺乏 一同被WHO、联合国儿童基金会(UNICEF)确定为世界性三大微量营养素缺乏性疾病。流行 病学调查显示目前全球患维生素A缺乏性疾病的学龄前儿童高达2. 5亿，其中300万为临 床型维生素A缺乏。我国本世纪初进行的14省市0-5岁儿童的调查显示，我国属于维生素 A缺乏中度流行地区，其发病率为11. 7 %，并且39. 2 %为可疑边缘型维生素A缺乏。西部及 边远地区尤为严重，农村及小年龄儿童缺乏更为常见，而孕龄期妇女维生素A缺乏状况比 儿童更加突出。因此，降低维生素A缺乏的患病率已纳入“2015年全球战略目标”和“中国 儿童发展规划纲要”。维生素A是全反式视黄醇的一组有活性的β-紫香酮(β-ionone)的衍生物， 包括视黄醇(retinol)、视黄醛(retinal)、视黄酸(retinoic acid)及视黄酯(retinyl ester)。临床上将血清中视黄醇浓度低于0. 7 μ mol/L称为维生素A缺乏症，同时伴有夜盲 症和干眼病等经典维生素A缺乏症状的称为临床型维生素A缺乏症，反之称为亚临床维生 素A缺乏症；当血清中视黄醇浓度在0. 7-1. 05 μ mol/L称为可疑亚临床维生素A缺乏症。 营养界又常将亚临床维生素A缺乏和可疑亚临床维生素A缺乏称为边缘型维生素A缺乏症 或者轻度维生素A缺乏症。维生素A对儿童视觉、免疫功能、生殖系统、生长发育等均有重要作用。目前研究 表明维生素A缺乏对贫血、学习记忆、脑发育，甚至老年期的认知功能等均有影响，所以维 生素A缺乏是一个公共健康问题。经文献检索，国际上有关维生素A缺乏动物模型的研究 文章有204篇，其中孕期维生素A缺乏动物模型有25篇(Dev. Biol 2008 Apr 15 ；316(2) 171-90 ；Ann Otol Rhinol Laryngol 2007 Oct ；116(10) :785_92)，但这些研究文献中维生 素A缺乏多数发生在孕中晚期，或是建立轻度维生素A缺乏的动物模型，而维生素A严重缺 乏动物模型则导致胎盘功能低下、畸形和死胎。因此，从临床前研究方面，建立孕期开始的 维生素A缺乏动物模型，通过动物实验研究维生素A缺乏对机体健康的影响、调节机制及其 补充干预时间的探索是非常必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的 构建方法，便于利用该动物模型在体研究维生素A缺乏对机体生长发育的调节机制，为更 好地应用于临床提供实验工具。本专利技术所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下第一步，配制基础饲料；基础饲料成分的重量百分比为，动物蛋白质20%、植物脂肪5 %、葡萄糖 68. 005%、无机盐组合物6. 750%、维生素组合物0. 245% ；按照上述配方混勻后，再加入视黄醇200-400IU/kg，与其它成分充分混勻，加入蒸 馏水制成块状，室温干燥，_20°C保存，作为维生素A缺乏母鼠实验组的饲料；按照上述配方混勻后，再加入视黄醇6500IU/kg，与其它成分充分混勻，加入蒸馏 水制成块状，室温干燥，-20°C保存，作为维生素A正常母鼠对照组及健康雄性大鼠的饲料。第二步，选择实验动物；选择10-12周龄，体重230_250g的清洁级健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10 只，随机分成实验组和对照组。第三步，构建维生素A缺乏母鼠模型；实验组的雌性大鼠给予维生素A缺乏饲料喂养，在喂养过程中以25g/天/只的进 食量均衡喂养，以维生素A缺乏饲料喂养雌性大鼠21天后，尾静脉采血检测血清中视黄醇 浓度低于0. 7 μ mol/L时，维生素A缺乏母鼠模型构建成功；第四步，构建维生素A缺乏仔鼠模型；将第三步得到的维生素A缺乏母鼠2只与一只健康的雄性大鼠按照2 1雌雄合 笼，使维生素A缺乏母鼠怀孕并产仔，母鼠产仔量一般为6-14只。在怀孕及哺乳期间，均以维生素A缺乏饲料喂养孕鼠和母鼠，直至21天断奶，获得 从孕期开始的维生素A缺乏的仔鼠。所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础 饲料所用的动物蛋白为鸡蛋蛋白，制作方法是将熟鸡蛋去壳和蛋黄，蒸馏水清洗蛋白3次 后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉。所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础 饲料所用的植物脂肪为一级大豆油。所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础 饲料所用的无机盐组合物为碳酸钠18. 000g/kg、三水磷酸氢二钾25. 550g/kg、二水磷酸氢 钙4. 550g/kg、氯化钙10. 080g/kg、七水硫酸铁1. 500g/kg、七水硫酸镁7. 500g/kg、碘化钾 0. 015g/kg、七水硫酸锌0. 252g/kg、五水硫酸铜0. 018g/kg、一水硫酸锰0. 138g/kg。所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其配制基础 饲料所用的维生素组合物为维生素Bl 5.0mg/kg、维生素B2 5. Omg/kg、维生素B6 5. Omg/ kg、维生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、叶酸 0. 5mg/kg、烟酸 50. 0mg/kg、泛酸钙 50. 0mg/kg、肌醇 100. 0mg/kg、氯化胆碱 1000. 0mg/kg、维生素 D (IU) 2176. 0mg/kg、维生素 Kl 0. 6mg/kg、维生素 E 45. 5mg/kg。本专利技术的有益效果(1)本模型的构建可完全模拟目前维生素A缺乏多数集中在孕妇和生后早期婴幼 儿的发病机理，为维生素A缺乏机理的研究、寻找最佳补充干预时间及维生素A强化食品的 开发和鉴定提供了技术平台；(2)构建模型的成功率高，成模效果好，提高了科研经费的使用效率；4(3)构建模型流程简单，价格低廉，便于推广应用。 具体实施例方式下面通过具体实施例对本专利技术做进一步的描述。本专利技术所述的孕前开始的维生素A缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步 骤如下第一步，配制基础饲料；基础饲料成分的重量百分比称取动物蛋白质200. 00g、植物脂肪50. 00g、葡萄糖 680. 05g、无机盐组合物67. 50g、维生素组合物2. 45g ；所用的动物蛋白为鸡蛋蛋白，制作方法是将熟鸡蛋去壳和蛋黄，蒸馏水清洗蛋白3 次后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉；所用的植物脂肪为一级大豆油；所用的无机盐组合 物为碳酸钠18. 000g/kg、三水磷酸氢二钾25. 550g/kg、二水磷酸氢钙4. 550g/kg、氯化钙 10. 080g/kg、七水硫酸铁1. 500g/kg、七水硫酸镁7. 500g/kg、碘化钾0. 015g/kg、七水硫酸 锌 0. 252g/kg、五水硫酸铜 0. 018g/kg、一水硫酸锰 0. 138g/kg ；所用的维生素组合物为维生素Bl 5.0mg/kg、维生素B2 5. 0mg/kg、维生素B6 5. O本文档来自技高网...

【技术保护点】
孕前开始的维生素Ａ缺乏母鼠及其仔鼠动物模型的构建方法，其步骤如下：第一步，配制基础饲料；基础饲料成分的重量百分比为，动物蛋白质２０％、植物脂肪５％、葡萄糖６８．００５％、无机盐组合物６．７５０％、维生素组合物０．２４５％；按照上述配方混匀后，再加入视黄醇２００－４００ＩＵ／ｋｇ，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，－２０℃保存，作为维生素Ａ缺乏母鼠实验组的饲料；按照上述配方混匀后，再加入视黄醇６５００ＩＵ／ｋｇ，与其它成分充分混匀，加入蒸馏水制成块状，室温干燥，－２０℃保存，作为维生素Ａ正常母鼠对照组及健康雄性大鼠的饲料。第二步，选择实验动物；选择１０－１２周龄，体重２３０－２５０ｇ的清洁级健康的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，雌性２０只，雄性１０只，随机分成实验组和对照组。第三步，构建维生素Ａ缺乏母鼠模型；实验组的雌性大鼠给予维生素Ａ缺乏饲料喂养，在喂养过程中以２５ｇ／天／只的进食量均衡喂养，以维生素Ａ缺乏饲料喂养雌性大鼠２１天后，尾静脉采血检测血清中视黄醇浓度低于０．７μｍｏｌ／Ｌ时，维生素Ａ缺乏母鼠模型构建成功；第四步，构建维生素Ａ缺乏仔鼠模型；将第三步得到的维生素Ａ缺乏母鼠２只与一只健康的雄性大鼠按照２∶１雌雄合笼，使维生素Ａ缺乏母鼠怀孕并产仔，母鼠产仔量一般为６－１４只；在怀孕及哺乳期间，均以维生素Ａ缺乏饲料喂养孕鼠和母鼠，直至２１天断奶，获得从孕期开始的维生素Ａ缺乏的仔鼠。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李廷玉，陈洁，刘友学，瞿平，江苇，黄鸿眉，魏华，陈立，张萱，魏小平，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]