【技术实现步骤摘要】
本申请涉及植物组织培养，特别涉及一种以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法。
技术介绍
1、枸杞(wolfberry)是茄科(solanaceae)枸杞属(lycium)多年生落叶多棘刺灌木，也是传统的“药食两用”植物，人工栽培历史悠久。枸杞主要分布于南美洲、北美洲到澳洲、欧洲亚洲等地，在中国有7个种3个变种现已发展成为西北地区重要的经济林产业。
2、近年来，科研工作者通过常规选择育种和杂交育种培育出一系列枸杞新品种(系)，极大地丰富了枸杞种质资源，推动了枸杞的综合开发利用。目前，枸杞已形成三业并举(果用、叶用和茎用)的综合性育种体系，其研究成果已在包括食品、饮品和药品等许多产业链条进行了延伸。其中，叶用枸杞因茎叶营养价值较高，富含蛋白质、甜菜碱、氨基酸且优于果用枸杞而受到广泛关注。枸杞叶可制作枸杞叶茶、枸杞叶蔬菜、枸杞叶挂面、枸杞叶面包等功能食品，具有良好的市场前景，急需繁育大量的叶用枸杞苗。
3、目前，针对枸杞属植物，黑果枸杞不定芽诱导分化及植株再生体系比较成熟，而叶用枸杞繁育技术体系仍不完善，尤其是不定芽诱导及植株再生技术体系仍然缺乏，存在易染菌、增殖系数低、再生效率低及培养周期长的问题。
技术实现思路
1、本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，通过建立叶用枸杞组织培养体系，增加枸杞不定芽诱导率，又能实现一步法直接诱导愈伤组织和不定芽分化，取材简单、可缩短获得再生植株的时间，提高
2、本申请提供了一种以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，包括：
3、获取叶用枸杞苗的当年生嫩枝，对所述嫩枝进行叶片去除处理和茎秆截短处理，得到目标茎秆；
4、将所述目标茎秆置于空组培瓶中，通过纱布对所述空组培瓶进行纱布包裹，并对经过所述纱布包裹的所述空组培瓶进行流动水冲洗至预设冲洗时间，得到第一外植体；
5、对所述第一外植体进行消毒处理，并将经过所述消毒处理的所述第一外植体接种至启动培养基上，得到枸杞无菌苗；
6、选取所述枸杞无菌苗的叶柄作为诱导分化的目标外植体，并将所述目标外植体接种至不定芽诱导培养基上进行暗培养，得到第一枸杞不定芽；
7、将所述第一枸杞不定芽中经过诱导获得的不定芽切除后，得到第二枸杞不定芽；
8、将所述第二枸杞不定芽接种至生根培养基上进行诱导生根，得到目标再生植株。
9、根据本申请的一些实施例，所述空组培瓶中加入有洗洁精溶液。
10、根据本申请的一些实施例，所述启动培养基包括：
11、4.43g/lms培养基+0.05mg/l6-ba+0.05mg/lnaa+25g/l蔗糖+7g/l琼脂。
12、根据本申请的一些实施例，所述启动培养基的启动培养条件为：温度在24℃至26℃之间，光照强度在8000lx至9000lx之间，光照时间为16h/d。
13、根据本申请的一些实施例，所述对所述第一外植体进行消毒处理，包括：
14、将所述第一外植体依次进行如下处理：置于浓度为75％的乙醇溶液浸泡15秒、蒸馏水冲洗三次、浓度为75％的乙醇溶液浸泡15秒、蒸馏水冲洗三次、浓度为38％的84消毒溶液浸泡20分钟、蒸馏水冲洗四次。
15、根据本申请的一些实施例，所述不定芽诱导培养基包括：
16、4.43g/lms培养基+0.5mg/l6-ba+0.05mg/lnaa+25g/l蔗糖+7g/l琼脂。
17、根据本申请的一些实施例，所述不定芽诱导培养基中诱导不定芽形成的条件为：温度在24℃至26℃之间，光照强度在8000lx至9000lx之间，黑暗环境下培养，不定芽诱导时间为36-42d。
18、根据本申请的一些实施例，所述生根培养基包括：
19、4.43g/l1/2ms培养基+0.05mg/lnaa+25g/l蔗糖+7g/l琼脂。
20、根据本申请的一些实施例，在所述将所述第二枸杞不定芽接种至生根培养基上进行诱导生根，得到目标再生植株之前，包括：
21、对所述第二枸杞不定芽进行生根培养，所述生根培养的条件为：温度在24℃至26℃之间，光照强度在8000lx至9000lx之间，光照时间为16h/d，培养时间为21d。
22、本专利技术的有益效果体现在，获取叶用枸杞苗的当年生嫩枝，对嫩枝进行叶片去除处理和茎秆截短处理，得到目标茎秆；将目标茎秆置于空组培瓶中，通过纱布对空组培瓶进行纱布包裹，并对经过纱布包裹的空组培瓶进行流动水冲洗至预设冲洗时间，得到第一外植体；对第一外植体进行消毒处理，并将经过消毒处理的第一外植体接种至启动培养基上，得到枸杞无菌苗；选取枸杞无菌苗的叶柄作为诱导分化的目标外植体，并将目标外植体接种至不定芽诱导培养基上进行暗培养，得到第一枸杞不定芽；将第一枸杞不定芽中经过诱导获得的不定芽切除后，得到第二枸杞不定芽；将第二枸杞不定芽接种至生根培养基上进行诱导生根，得到目标再生植株。这种以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，建立叶用枸杞组织培养体系，取材简单，同时能够有效解决枸杞组培外植体易污染的问题，实现了一步诱导愈伤和不定芽分化，缩短了诱导愈伤后再进行不定芽分化的时间，提高了枸杞植株再生效率和实验效率。
23、本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
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1.一种以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述空组培瓶中加入有洗洁精溶液。
3.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述启动培养基包括：
4.根据权利要求3所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述启动培养基的启动培养条件为：温度在24℃至26℃之间，光照强度在8000Lx至9000Lx之间，光照时间为16h/d。
5.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述对所述第一外植体进行消毒处理，包括：
6.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基包括：
7.根据权利要求6所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基中诱导不定芽形成的条件为：温度在24℃至26℃之间，光照强度在8000Lx至9000Lx之间，黑暗环境下培养，不定
8.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述生根培养基包括：
9.根据权利要求8所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，在所述将所述第二枸杞不定芽接种至生根培养基上进行诱导生根，得到目标再生植株之前，包括：
...【技术特征摘要】
1.一种以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述空组培瓶中加入有洗洁精溶液。
3.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述启动培养基包括：
4.根据权利要求3所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述启动培养基的启动培养条件为：温度在24℃至26℃之间，光照强度在8000lx至9000lx之间，光照时间为16h/d。
5.根据权利要求1所述的以叶用枸杞叶柄为外植体的高效一步再生方法，其特征在于，所述对所述第一外植体进行消毒处理，包括：
【专利技术属性】
技术研发人员：李翔，马西梅，许恒，姚文孔，尹晓，王嘉栋，赵佳慧，张瑾萱，马蓉蓉，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：
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