【技术实现步骤摘要】
一、本专利技术涉及纳米医药，特别是一种级联增强辐射免疫调节剂的制备方法及其应用。
技术介绍
0、二、
技术介绍
1、众所周知，癌症是威胁人类生命健康的第二大病因。尽管近年来在抗肿瘤方面取得了重大进展，传统疗法(如手术、化疗)由于未能完全根除肿瘤导致肿瘤转移，肿瘤转移是癌症患者死亡的主要原因。放射治疗(rt)是临床上应用最广泛的实体瘤一线治疗手段，它应用高能x射线直接损伤dna和电离水产生活性氧(ros)诱导肿瘤细胞凋亡。研究表明，放疗可以通过激活cgas-sting通路诱导先天性免疫，同时放疗诱导基因突变产生的新生抗原可以激活cd8+t细胞介导的适应性免疫，清除未照射的远端转移灶。然而，放疗的介导的远端肿瘤消退在临床中并不常见。
2、这主要是由于rt的治疗效果往往受到肿瘤固有生理障碍的限制，由于低z原子吸收能量的能力较差(肿瘤软组织主要由低z的有机物组成)，肿瘤往往对电离辐射表现出先天的抵抗力，导致放疗后肿瘤细胞凋亡率较低，肿瘤相关抗原释放量少，从而减弱了放疗诱导的免疫反应。而且，即使通过增强放疗疗效诱导肿瘤相关抗原释放量增多，肿瘤相关巨噬细胞(tam)介导的胞葬作用通过降解抗原进一步下调放疗诱导的免疫效应，导致免疫沉默。研究表明，肿瘤相关巨噬细胞溶酶体中存在着高活性的半胱氨酸蛋白酶，升高的酶活性会降解溶酶体中经胞葬作用来源的肿瘤相关抗原，从而阻碍巨噬细胞对cd8+t细胞的抗原交叉呈递，并阻止cd8+t细胞的活化。因此，增强放疗疗效同时逆转肿瘤相关巨噬细胞胞葬作用介导的免疫沉默有利于增强放疗介导的免疫效应，
技术实现思路
0、三、
技术实现思路
1、针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种级联增强辐射免疫调节剂的制备方法及其应用，可有效解决肿瘤治疗的药物问题。
2、本专利技术解决的技术方案是，一种级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，包括修饰肿瘤rgd靶向肽的膜融合脂质体和包覆于膜融合脂质体内的纳米复合材料；所述的纳米复合材料由负载e64的铁蛋白、放疗增敏剂hf离子和单宁酸通过配位自组装形成；具体包括如下步骤：
3、1)制备负载半胱氨酸蛋白酶抑制剂e64的铁蛋白(he)
4、分别将2-4mg铁蛋白(hfn)、0.5-1mg e64溶解在1-2ml去离子水中，超声下混合均匀，置于60℃恒温水浴，100-200rpm磁力搅拌下反应1-3h，反应结束后，500-2000rpm超滤离心5-15min去除游离的e64，用去离子水洗涤2次后收集超滤管中产物，40-60℃干燥10-16h，得到he纳米粒；
5、2)制备纳米复合材料(he@hf)
6、将20-40mg的单宁酸(ta)溶解于1-2ml去离子水中；将3-9mg氯化铪(hfcl4)溶解于1-3ml去离子水中；将步骤1)中所得的1-2mg he溶解于1-2ml去离子水中；将ta与hfcl4、he超声混合2min后转移到50-100ml圆底烧瓶中，300-700rpm磁力搅拌下37℃水浴反应3-6h，反应完成后，8000-12000rpm离心5-10min收集产物，去离子水洗涤3次去除未反应的ta，得到由he、放疗增敏剂hf和单宁酸配位自组装形成的he@hf纳米粒；
7、3)制备膜融合脂质体(mfl)
8、分别称取质量比为7:6:3:4-9:7:5:5，2-二油基酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、鞘磷脂(sm)、胆固醇(ch)成膜材料于50ml茄型瓶中，加入甲醇和氯仿溶解，混合均匀使其充分溶解，当温度升至40℃时进行旋蒸，压力缓慢上调，避免压力过高产生气泡而影响成膜，当压强达到稳定时不再调节压强，待有机溶剂旋蒸完后，降低压强，停止旋蒸，取下茄型瓶，立即加入去离子水，在水浴锅中沿一个方向轻轻晃动茄型瓶，使膜水化下来并转移至离心管中，并依次在800nm、400nm的聚碳酸酯多孔膜微型脂质体挤出器中挤压5-10次，得到膜融合脂质体；
9、4)制备rgd靶向肽修饰的膜融合脂质体(rm)
10、将10-30mg dspe-peg2000-crgd肽溶解于1-3ml n,n-二甲基甲酰胺中，取100-500μl溶解于步骤3)中得到的膜融合脂质体溶液中，混合均匀后，200-700rpm磁力搅拌下，4℃反应6-12h后收集产物，5000-12000rpm离心去除上清，得到rgd靶向肽修饰的膜融合脂质体rm；
11、5)制备级联增强辐射免疫调节剂(rm-he@hf)
12、将步骤2)、步骤4)所得产物在去离子水中混合均匀，质量比为2：1-2：2，在200nm的聚碳酸酯多孔膜微型脂质体挤出器中挤压5-10次，得到级联增强辐射免疫调节剂(rm-he@hf)。
13、所述的步骤1)中he纳米粒的粒径为10-15nm，步骤2)中he@hf纳米复合材料的粒径为50-100nm，步骤5)中级联增强辐射免疫调节剂rm-he@hf的粒径为100-200nm。
14、所述的级联增强辐射免疫调节剂在制备抗肿瘤药物注射剂中的应用。
15、所述的级联增强辐射免疫调节剂在肿瘤精准靶向治疗药物中的应用。
16、所述的级联增强辐射免疫调节剂在肿瘤放疗增敏药物中的应用。
17、所述的级联增强辐射免疫调节剂在提高肿瘤相关巨噬细胞抗原提呈能力中的应用。
18、所述的级联增强辐射免疫调节剂在增强肿瘤放疗-免疫治疗药物中的应用。
19、所述的级联增强辐射免疫调节剂在增敏临床pd-l1免疫检查点阻断治疗药物中的应用。
20、本专利技术方法稳定可靠，所制得的rm-he@hf具有良好的肿瘤靶向性和生物相容性等优点，可作为一种高效的x射线纳米处理器，克服放疗耐受，提高rt疗效，同时逆转肿瘤相关巨噬细胞胞葬作用介导的免疫沉默，有效的增强肿瘤放疗-免疫治疗，是肿瘤放射治疗药物上的创新。
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1. 一种级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括修饰肿瘤RGD靶向肽的膜融合脂质体和包覆于膜融合脂质体内的纳米复合材料；所述的纳米复合材料由负载E64的铁蛋白、放疗增敏剂Hf离子和单宁酸通过配位自组装形成；具体包括如下步骤：
2. 根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3. 根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4. 根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤1）中负载半胱氨酸蛋白酶抑制剂E64的铁蛋白粒径为10-15nm，步骤2）中纳米复合材料的粒径为50-100nm，步骤5）中级联增强辐射免疫调节剂的粒径为100-200nm。
6.权利要求1-5任一项所述的级联增强辐射免疫调节剂在制备抗肿瘤药物注射剂中的应用。
7.权利要求1-5任一项所述的级联增强辐射免疫调节剂在肿瘤精准靶向治疗药物中的
8.权利要求1-5任一项所述的级联增强辐射免疫调节剂在肿瘤放疗增敏药物中的应用。
9.权利要求1-5任一项所述的级联增强辐射免疫调节剂在增强肿瘤放疗-免疫治疗药物中的应用。
10.权利要求1-5任一项所述的级联增强辐射免疫调节剂在增敏临床PD-L1免疫检查点阻断治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1. 一种级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括修饰肿瘤rgd靶向肽的膜融合脂质体和包覆于膜融合脂质体内的纳米复合材料；所述的纳米复合材料由负载e64的铁蛋白、放疗增敏剂hf离子和单宁酸通过配位自组装形成；具体包括如下步骤：
2. 根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3. 根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4. 根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的级联增强辐射免疫调节剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤1）中负载半胱氨酸蛋白酶抑制剂...
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