【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于探针检测，具体涉及一种比率荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、次氯酸(hclo)是最重要的活性氧(ros)之一，参与着许多生理过程，在生命活动中起着至关重要的作用。内源性hclo可在髓过氧化物酶(mpo) 的催化作用下，由过氧化氢和氯化物反应生成。
2、hclo具有很强的氧化性，可与多种蛋白质侧链和肽键发生反应，在杀菌免疫中起重要作用。另一方面，过量的hclo会使含有硫醇、硫醚、血红素蛋白和氨基的生物分子过氧化，从而引起细胞和组织损伤，进而引发各种心血管疾病、神经变性、关节炎和癌症。因此，开发可在体内实时检测的分析方法，对于了解hclo的生理功能及其在相关疾病的研究中具有重要意义。
3、目前虽然已有比色法、电化学法、化学发光法等分析方法来实现hclo的体外检测，但上述方法难以满足体内实时检测次氯酸的要求。另一方面，hclo的半衰期短，在体内的扩散距离小，体内的h2o2、onoo-、o2 -等强氧化剂会对hclo的检测产生干扰。这些因素使得内源性hclo的特异性检测变得困难。
4、近年来，荧光探针因其特异性强、效率高、灵敏度高、无损检测等优点被广泛应用于hclo检测。荧光探针的设计主要基于hclo对反应基团的选择性氧化。常用的反应基团主要有硫族(硫、硒、碲元素)、碳碳双键、对甲氧基苯酚/胺及其衍生物、羟胺或肟基、肼等。hclo容易氧化上述基团，将反应基团转化为相关的氧化产物，从而改变这些富电子基团在荧光团上的电荷转移(ct)或光致电子转移(pet)效应，进而引起探针的荧光信
5、虽然基于上述反应基团的荧光探针极大地丰富了hclo的检测手段，但需要指出的是，大多数探针仍然存在抗干扰能力差等缺点。
6、许多识别hclo的荧光探针迅速发展起来，其中一些可以识别活细胞中的hclo。然而，线粒体被认为是主要的能量来源，也是产生ros的主要来源。比率荧光探针可以减少由探针浓度、环境温度、环境ph等外部因素变化引起的测量偏差。因此，将线粒体靶向和比率荧光结合在一个分子探针中，将会在分析和检测领域带来突破。
7、现有申请号为“201711118691.5”《一种应用于线粒体内次氯酸检测的比率荧光探针的制备及应用》，通过制备探针实现对次氯酸的检测，但是该方案仍然存在以下问题：1.该探针工作区间小，为0.5-3.5μm，不能满足检测的需求；2.该探针的检测极限较小，同样不能满足检测需求。
技术实现思路
1、基于以上存在的问题，本专利技术设计了一种比率荧光探针。实验证明具有良好的线粒体靶向性，并成功用于活细胞和斑马鱼中外源性和内源性hclo的检测，检测极限为21nm。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、一种比率荧光探针，结构式如下：
4、。
5、一种比率荧光探针的制备方法，包括：
6、步骤1：将10-己基-吩噻嗪-3-乙醛、2,3-二甲基苯并[d]噻唑-3-鎓碘化物、koh和dmso在室温下搅拌并放置12h；
7、步骤2：将步骤1的粗产物从乙醇中过滤并重结晶，得到深红色固体。
8、优选的，所述10-己基-吩噻嗪-3-乙醛的摩尔量为0.64 mmol，2,3-二甲基苯并[d]噻唑-3-鎓碘化物的摩尔量为1.28 mmol。
9、优选的，所述koh以质量分数计的浓度为50%。
10、优选的，所述koh体积为5ml，dmso的体积为10ml。
11、本专利技术制备的比率荧光探针作为细胞中线粒体的靶向定位用途、还可以用作巨噬细胞和斑马鱼体内hclo的检测。
12、一种hclo检测装置，包含有比率荧光探针制备方法。
13、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
14、本专利技术设计并合成了一种用于线粒体中外源性和内源性hclo成像的比率荧光探针。通过激光共聚焦荧光图像证实了对线粒体具有良好的靶向能力，共定位系数为0.99，能够对线粒体和斑马鱼中存在的hclo做出高选择性和高灵敏度的反应(检测限为21 nm)。因此，可以看出，本专利技术制备的比率荧光探针具有生物相容性、靶向性和比率成像能力等优势，在肿瘤临床诊断方面具有重大的潜力。
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1.一种比率荧光探针，其特征在于，结构式如下：
2.一种如权利要求1所述的比率荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：
3.根据权利要求2所述的一种比率荧光探针的制备方法，其特征在于，所述10-己基-吩噻嗪-3-乙醛的摩尔量为0.64mmol，2,3-二甲基苯并[d]噻唑-3-鎓碘化物的摩尔量为1.28mmol。
4.根据权利要求3所述的一种比率荧光探针的制备方法，其特征在于，所述KOH以质量分数计的浓度为50%。
5.根据权利要求4所述的一种比率荧光探针的制备方法，其特征在于，所述KOH体积为5mL，DMSO的体积为10mL。
6.如权利要求1所述的比率荧光探针作为细胞中线粒体的靶向定位用途。
7.如权利要求1所述的比率荧光探针用作巨噬细胞中HClO的检测。
8.如权利要求1所述的比率荧光探针用作斑马鱼体内的HClO的检测。
【技术特征摘要】
1.一种比率荧光探针，其特征在于，结构式如下：
2.一种如权利要求1所述的比率荧光探针的制备方法，其特征在于，包括：
3.根据权利要求2所述的一种比率荧光探针的制备方法，其特征在于，所述10-己基-吩噻嗪-3-乙醛的摩尔量为0.64mmol，2,3-二甲基苯并[d]噻唑-3-鎓碘化物的摩尔量为1.28mmol。
4.根据权利要求3所述的一种比率荧光探针的制备方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，孙婉，张梅，马洪才，张赛，王伟，宋新蕾，董毅卿，李嘉茗，
申请(专利权)人：德州学院，
类型：发明
国别省市：
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