【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种pcr检测方法及其应用。
技术介绍
1、宫颈癌是女性高发的恶性肿瘤，对女性生命安全形成严重影响，相关报道显示，全球每年新发宫颈癌患者逾50万例，致死人数逾27万例。hpv感染是患宫颈癌的主要因素，研究表明99.7%的宫颈癌患者都感染了hpv。男性感染hpv后主要表现为无症状携带者，是hpv病毒的隐匿载体，原因可能与包皮内含大量的包皮垢及分泌物且局部环境有利于hpv生长繁殖有关。
2、b族链球菌（gbs）是最常见的一类病原链球菌，也是危害较大的一种，又称无乳链球菌，是β溶血需氧革兰阳性链球菌。在一般情况下不致病，但孕妇感染时可表现为菌血症、泌尿系统感染。孕妇gbs感染与早产、产褥感染及新生儿败血症等疾病的发生密切相关。孕妇阴道中的酸碱平衡被打破，使阴道出现炎症症状，引起胎膜损伤，最终导致胎膜早破风险。国内2018年发布的《孕前和孕期保健指南》将孕晚期35－37周孕妇gbs筛查作为产前检查的备查项目。gbs感染孕妇经确诊后需要及时进行治疗以减少胎膜早破、宫内感染风险，gbs在分娩过程中可能导致新生儿脑膜炎、心内膜炎、软组织感染或骨髓炎，直接影响新生儿生命健康。
3、性传播疾病（std）是一类以性接触为主要传播方式的泌尿生殖道感染性疾病，淋病奈瑟菌（ng）、沙眼衣原体（ct）、解脲脲原体（uu）是最常见的std病原体（简称性病三项），其感染率高、复发率高，发病率近年来也不断上升。近年来，有关性病三项中的uu在prom患者中感染情况的研究有所增加，对于其他女性生殖道常见感染菌种的研究亦
4、聚合酶链式反应（pcr）技术作为科学研究的一种重要方法已广泛应用于医学、遗传学和考古学等各个领域并显示出广阔的应用前景。pcr是一种用于放大扩增特定的dna片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna复制，pcr的最大特点是能将微量的dna大幅增加。随着耐热菌中耐热dna聚合酶的发现和应用大大提高了pcr的效率并推动了其向pcr自动化技术的发展，pcr是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°c左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至dna聚合酶最适反应温度（72°c左右），dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖的方向合成互补链。基于聚合酶制造的pcr仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。但是在应用pcr实验过程中往往会出现样本内标异常的现象出现。
5、因此，亟需提供一种pcr检测实验的前处理方法，保证pcr实验的准确性和稳定性。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种pcr检测方法及其应用，能够降低实验过程中因不同原因导致的内标被异常的情况，保证了pcr实验的准确性和稳定性。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种pcr检测方法，所述方法包括：使用洗涤液处理待检测样本提取dna，加热离心得到目标dna，pcr扩增目标dna后将扩增产物与微球杂交，杂交进行荧光值检测；所述洗涤液包括nacl溶液和乙醇的组合，所述nacl溶液中nacl的质量百分含量为80%-90%；所述乙醇的质量百分比为70%-75%。
4、本专利技术pcr检测方法能够有效提高样本检出率，保证pcr检测结果的稳定、准确，能够降低实验过程中因不同原因导致的内标被异常情况，可以应用于实验过程中，降低实验室退单率。
5、优选地，所述盐水的质量百分比为80%-90%。
6、上述80%-90%中的具体点值可以选择80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%等。
7、上述70%-75%中的具体点值可以选择70%、71%、72%、73%、74%、75%等。
8、优选地，所述待检测样本包括人乳头状瘤病毒hpv-dna、b族链球菌定性gbs-dna或性病定性样本中的任意一种或至少两种的组合。
9、优选地，所述洗涤液还包括异丙醇；所述洗涤液中乙醇和异丙醇的体积比为(0.5-3):1。
10、上述0.5-3中的具体点值可以选择0.5、0.6、0.7、1.0、1.5、2.0、2.5、2.6、2.7、2.8、3等。
11、优选地，所述洗涤液还包括缓冲液。
12、优选地，所述缓冲液包括kcl溶液或mgcl2溶液；所述缓冲液的ph为4-6。
13、上述4-6中的具体点值可以选择4、5、6等。
14、优选地，所述洗涤液中nacl溶液、醇和缓冲液的体积比为1:(1-3):1。
15、上述1-3中的具体点值可以选择1、2、3等。
16、第二方面，本专利技术提供了第一方面所述的pcr检测方法在ssr-pcr、issr-pcr、race-pcr、降落pcr或实时定量pcr中的应用。
17、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
18、本专利技术pcr检测方法能够有效提高样本检出率，保证pcr检测结果的稳定、准确，能够降低实验过程中因不同原因导致的内标被抑制情况，可以应用于实验过程中，降低实验室退单率。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括：使用洗涤液处理待检测样本提取DNA，加热离心得到目标DNA，PCR扩增目标DNA后将扩增产物与微球杂交，杂交进行荧光值检测；所述洗涤液包括Nacl溶液和乙醇的组合，所述Nacl溶液中Nacl的质量百分含量为80%-90%；所述乙醇的质量百分比为70%-75%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待检测样本包括人乳头状瘤病毒HPV-DNA、B族链球菌定性GBS-DNA或性病定性样本中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗涤液还包括异丙醇；所述洗涤液中乙醇和异丙醇的体积比为(0.5-3):1。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述洗涤液还包括缓冲液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述缓冲液包括KCl溶液或MgCl2溶液；所述缓冲液的PH为4-6。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述洗涤液中Nacl溶液、醇和缓冲液的体积比为1:(1-3):1。
7.权利要求1-6中任一项所述的方
...【技术特征摘要】
1.一种pcr检测方法，其特征在于，所述方法包括：使用洗涤液处理待检测样本提取dna，加热离心得到目标dna，pcr扩增目标dna后将扩增产物与微球杂交，杂交进行荧光值检测；所述洗涤液包括nacl溶液和乙醇的组合，所述nacl溶液中nacl的质量百分含量为80%-90%；所述乙醇的质量百分比为70%-75%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待检测样本包括人乳头状瘤病毒hpv-dna、b族链球菌定性gbs-dna或性病定性样本中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：张馨月，刘丽苹，路放，宋丽影，荣丽平，
申请(专利权)人：吉林金域医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
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