【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子检测领域，具体涉及一种dm20及plp1/dm20表达检测方法。
技术介绍
1、proteolipid protein 1(plp1)是构成中枢神经系统中髓鞘结构的跨膜脂蛋白，维持正常髓鞘结构以及轴突完整性。plp1基因经过可变剪接，可产生两种主要蛋白剪切体plp1和dm20，其中dm20与plp1(276个氨基酸)相比，胞内结构区缺少35个氨基酸。plp1可变剪接在中枢神经系统发育过程中受到严谨调控。plp1基因缺陷会导致伴x-染色体的神经紊乱相关的疾病，如佩梅病(pelizaeus–merzbacher disease，pmd)、x连锁痉挛性截瘫2型(x-linked spastic paraplegia type 2，spg2)。plp1基因点突变导致大约20％的pmd/spg2疾病，基因缺失可导致轻微的pmd/spg2疾病，而基因拷贝数变异是最常见的基因缺陷类型，导致大约60％-70％pmd疾病的发生。除此之外，也有研究者发现携带plp1基因重复突变的病人，其体内plp1两种剪切体的比例也发生了改变，这提示plp1/dm20表达调控与疾病的发生有着密切关联。plp1点突变会导致plp1特异性表达量改变而不影响dm20的表达，或者导致两种异构体表达水平均被改变，因此，通过特异性定量plp1和dm20表达水平，跟踪疾病的发展进程，有助于疾病的预测、诊断等。
2、plp1/dm20生物学功能还没有完全阐释清楚，研究发现plp1主要集中在少突胶质细胞中表达，其中dm20在胚胎期表达量较高，成年后少突
3、目前plp1/dm20表达检测方法主要是通过q-pcr的方法定量plp1特异的剪切体(plp1_s，plp1 specific)和总的plp1(同时检测plp1和dm20两种剪切体),而针对dm20剪切体特异性(dm20_s，dm20 specific)检测的方法很少，文献中多数是通过plp1_s/plp1_t比值间接反映dm20_s表达情况；当然也有文献设计了探针的方法直接检测dm20，但探针方法设计繁琐，价格昂贵。
技术实现思路
1、针对以上诸多不足，本专利技术提供dm20及plp1/dm20表达检测方法，通过直接检测dm20_s表达的普通pcr,能够大幅度降低成本，适用于大规模dm20检测，对于相关疾病诊断、预防以及治疗有重要意义。
2、本专利技术的技术方案通过如下方式实现：提供一种dm20的表达检测方法，所述dm20的表达框包括反映dm20特异性的表达框dm20_s，使用q-pcr检测所述表达框dm20_s的表达情况，所述表达框dm20_s跨越plp1基因可变剪接的位置。
3、优选的，在本专利技术的一个实施例中，所述dm20的表达框由区段1和区段2组成，所述q-pcr检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物和所述下游引物的扩增区域跨越所述区段1和所述区段2的连接处；其中，所述区段1为如图1所示斜线填充的矩形框处，为plp1与dm20上游相同序列，所述区段2为如图1所示点状图案填充的矩形框处，为plp1与dm20下游相同系列。
4、优选的，在本专利技术的一个实施例中，使用的所述上游引物为：
5、gcctgagcgcaacgtttg
6、使用的所述下游引物为：
7、acaccatacattctggcatcag。
8、优选的，在本专利技术的一个实施例中，所述q-pcr检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物或者所述下游引物跨越所述区段1和所述区段2的连接处。
9、优选的，在本专利技术的一个实施例中，所述上游引物跨越所述区段1和所述区段2的连接处；
10、使用的所述上游引物为：
11、gcctgagcgcaacgtttg
12、使用的所述下游引物为：
13、acaccatacattctggcatcag。
14、本专利技术还提供一种plp1/dm20的表达检测方法，使用q-pcr同时检测待检样本中plp1和dm20的表达情况共用同一对上下游引物,qpcr扩增片段优选为plp1_t。
15、优选的，在本专利技术的一个实施例中，使用的所述上游引物为：
16、aactgcctctttcttcttcct
17、使用的所述下游引物为：
18、cagatggtggtcttgtagtcg
19、此外，本专利技术还提供一种plp1特异性表达检测方法，使用q-pcr仅检测待检样本中plp1的表达情况。
20、优选的，在本专利技术的一个实施例中，使用q-pcr仅检测待检样本中plp1的表达情况，针对不同物种选择对应的上下游引物，其中引物对1可用来检测小鼠plp1，引物对2可以用来检测人类plp1。
21、使用的所述上游引物1为：
22、gttccagaggccaacatcaagctc
23、使用的所述下游引物1为：agccatacaacagtcagggcatag。
24、使用的所述上游引物2为：
25、aatggctaggacatcccga
26、使用的所述下游引物2为：
27、ggtccaggtgttgaagtaaatg。
28、有益效果如下：
29、本专利技术提供了一种可以分别针对总的plp1(两种剪切体可同时检测，plp1_t)、dm20特异性的剪切体(dm20_s)以及plp1特异性的剪切体(plp1_s)进行定量检测，用于分析plp1不同剪切体的表达关系在神经发育障碍性疾病中指示作用。
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1.一种DM20的表达检测方法，其特征在于，所述DM20的表达框包括反映DM20特异性的表达框DM20_S，使用Q-PCR检测所述表达框DM20_S的表达情况，所述表达框DM20_S跨越PLP1基因可变剪接的位置。
2.根据权利要求1所述的DM20的表达检测方法，其特征在于，所述DM20的表达框由区段1和区段2组成，所述Q-PCR检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物和所述下游引物的扩增区域跨越所述区段1和所述区段2的连接处；其中，所述区段1为PLP1与DM20上游相同序列，所述区段2为PLP1与DM20下游相同系列。
3.根据权利要求1所述的DM20的表达检测方法，其特征在于，使用的所述上游引物为：
4.根据权利要求1所述的DM20的表达检测方法，其特征在于，所述Q-PCR检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物或者所述下游引物跨越所述区段1和所述区段2的连接处。
5.根据权利要求4所述的DM20的表达检测方法，其特征在于，所述上游引物跨越所述区段1和所述区段2的连接处；
6.一种PLP1
7.根据权利要求6所述的PLP1/DM20的表达检测方法，其特征在于，使用的所述上游引物为：
8.一种PLP1特异性表达检测方法，其特征在于，使用Q-PCR仅检测待检样本中PLP1的表达情况，所述Q-PCR检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物和所述下游引物至少一条引物在区段3，所述PLP1的表达框由区段1、区段2和区段3组成，扩增片段为PLP1_S；其中，所述区段1为PLP1与DM20上游相同序列，所述区段2为PLP1与DM20下游相同系列，所述区段3为PLP1与DM20差异序列。
9.根据权利要求8所述的PLP1的表达检测方法，其特征在于，使用的所述上游引物1为：
...【技术特征摘要】
1.一种dm20的表达检测方法，其特征在于，所述dm20的表达框包括反映dm20特异性的表达框dm20_s，使用q-pcr检测所述表达框dm20_s的表达情况，所述表达框dm20_s跨越plp1基因可变剪接的位置。
2.根据权利要求1所述的dm20的表达检测方法，其特征在于，所述dm20的表达框由区段1和区段2组成，所述q-pcr检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物和所述下游引物的扩增区域跨越所述区段1和所述区段2的连接处；其中，所述区段1为plp1与dm20上游相同序列，所述区段2为plp1与dm20下游相同系列。
3.根据权利要求1所述的dm20的表达检测方法，其特征在于，使用的所述上游引物为：
4.根据权利要求1所述的dm20的表达检测方法，其特征在于，所述q-pcr检测使用的扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物或者所述下游引物跨越所述区段1和所述区段2的连接处。
5.根据权利要求4所述的dm20的表达检测方法，其特征在于，所述上游引物跨越所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈岳文，马双双，陈宇，易婉盈，原琳，
申请(专利权)人：香港科技大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：
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