一种酶活提高的酰基转移酶突变体制造技术

本发明专利技术涉及一种酶活提高的酰基转移酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明专利技术对酰基转移酶的第97位、第154位中一个和多个位点进行突变，有效提高了酰基转移酶对反式‑4‑羟脯氨酸的转化率，突变后转化率提高24.4％以上。利用表达本发明专利技术的酰基转移酶突变体的基因工程菌株，以反式‑4‑羟脯氨酸为底物催化合成N‑乙酰基‑反式‑4‑羟基脯氨酸，产量达到312.5mg/L以上。其中，表达突变体K97A/F154A的基因工程菌株全细胞合成N‑乙酰基‑反式‑4‑羟基脯氨酸的产量可达433mg/L，较未突变前产量提高了72.4％。本发明专利技术实用性强，可以用于大规模生产N‑乙酰基‑反式‑4‑羟基脯氨酸，具有极高的经济价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶活提高的酰基转移酶突变体，属于酶工程。

技术介绍

1、n-乙酰基-反式-4-羟基脯氨酸是一种具有广泛应用领域的重要氨基酸衍生物。它在制药工业中具有重要地位，常被用作合成药物和抗生素的中间体。这种化合物不仅在药物合成中有重要作用，还在生物医学研究中备受瞩目。其引人关注的抗氧化和抗炎性活性使其成为疾病治疗和健康维护领域的关键组分。

2、n-乙酰基-反式-4-羟基脯氨酸以及其前体反式-4-羟脯氨酸可通过胶原蛋白的化学合成获得。在这一过程中，反式-4-羟脯氨酸作为底物在酸性条件下通过乙酰化反应得到。然而，这种化学合成方法通常需要使用某些毒性试剂，存在安全性方面的顾虑。

3、近年来，采用生物催化法合成n-乙酰基-反式-4-羟基脯氨酸受到了广泛关注，尤其是通过酶的作用，特别是酰基转移酶。酰基转移酶是一类具有酰基转移催化活性的酶，它们能够在底物分子中转移酰基团。在合成n-乙酰基-反式-4-羟基脯氨酸的过程中，酰基转移酶发挥关键作用，将乙酰基(acetyl group)转移给4-羟基脯氨酸(4-hydroxyproline)，从本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种酰基转移酶突变体，其特征在于，所述酰基转移酶突变体在氨基酸序列如SEQID NO.2所示的酰基转移酶的基础上由第97位、第154位中任一一个或多个位点突变得到。

2.根据权利要求1所述的酰基转移酶突变体，其特征在于，所述第97位的赖氨酸突变为丙氨酸；第154位的苯丙氨酸突变为丙氨酸；在第97位的赖氨酸突变为丙氨酸的基础上进一步将第154位的苯丙氨酸突变为丙氨酸。

3.编码权利要求1或2所述酰基转移酶突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组质粒。

5.根据权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的载体为pET载体。<...

【技术特征摘要】

1.一种酰基转移酶突变体，其特征在于，所述酰基转移酶突变体在氨基酸序列如seqid no.2所示的酰基转移酶的基础上由第97位、第154位中任一一个或多个位点突变得到。

2.根据权利要求1所述的酰基转移酶突变体，其特征在于，所述第97位的赖氨酸突变为丙氨酸；第154位的苯丙氨酸突变为丙氨酸；在第97位的赖氨酸突变为丙氨酸的基础上进一步将第154位的苯丙氨酸突变为丙氨酸。

3.编码权利要求1或2所述酰基转移酶突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组质粒。

5.根据权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的载体为pet载体。

6.携带...

【专利技术属性】
技术研发人员：程景方，薛儒康，孙付保，魏川翔，孙驰贺，胡芸，
申请(专利权)人：可莱尼化妆品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：