本发明专利技术属于体外检测技术领域，具体涉及胰岛素样生长因子I变体的定量检测试剂盒。本发明专利技术的发明专利技术人发现了IGF‑1存在两种变体形式，分别为具有单电荷质荷比7500～7520的des‑R IGF‑1变体和单电荷质荷比7343～7363的des‑RR IGF‑1变体，并且通过采用本发明专利技术的胰岛素样生长因子I的变体的定量检测试剂盒，能够准确检测出des‑R IGF‑1变体和des‑RR IGF‑1变体，从而为IGF‑1的疾病分析提供精细化数据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外检测，具体涉及胰岛素样生长因子i变体的定量检测试剂盒。
技术介绍
1、胰岛素样生长因子i(insulin like growth factor i，igf-1)又名somatomedinc，是肝脏合成并分泌到外周血中的一种分泌蛋白，其成熟蛋白由70个氨基酸组成，其中6个半胱氨酸相互形成了维持其空间结构的3对二硫键，因其结构与胰岛素类似而被命名。igf-1是一种活性蛋白多肽物质，它是人体内肝细胞、肾细胞、脾细胞等十几种细胞自分泌和旁分泌的产物。其具有降血糖、降血脂、舒张血管、促生长、促细胞分化、创伤修复等作用。精准检测igf-1有助于疾病分析和确诊后用药指导。
2、本领域虽然公开了igf-1的变体之一igf-1lr3，但该变体是外源合成的，是由原始的70个氨基酸链在其n端额外添加了13个氨基酸，总共83个氨基酸。该igf-1变体仍对人体组织中的igf-1受体显示其原始活性。但目前极少报道发现igf-1在体内会产生变体，进而也没有意识到个别样本线性关系不好，是由于igf-1被分解成变体导致的。现有检测试剂盒仅能检测出igf-1，不能检测出样本中含有的变体。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种胰岛素样生长因子i的变体的检测试剂盒，利用该试剂盒能够准确检测出des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体，进而为igf-1的疾病分析提供精细化数据，便于临床进一步诊断。
2、在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种胰岛素样生长因子i的变体的检测试剂盒。根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒包括：
3、igf-1特异性抗体；
4、内标igf-1重组蛋白；
5、igf-1蛋白标准品；
6、洗脱溶液；
7、反应缓冲液，
8、其中，所述洗脱溶液中含有用于maldi-tof ms平台的基质和抗原抗体复合物解离试剂，
9、所述胰岛素样生长因子i的变体包括具有单电荷质荷比7500-7520或双电荷质荷比3746-3766或三电荷质荷比2494-2514的des-r igf-1变体；
10、具有单电荷的质荷比7343-7363或双电荷质荷比3667-3687或三电荷质荷比2442-2462的des-rr igf-1变体。
11、目前，igf-1的临床检测方法以化学发光免疫分析技术为主，化学发光免疫分析技术通过测量与待测物特异性结合的二抗上发光物质发出的光强度来间接地实现对待测物的定量，但是该技术的稳定性受到了抗体特异性、非特性吸附、嗜异性抗体、干扰物等多种因素的干扰，导致定量结果的波动性较大。
12、化学发光法检测胰岛素样生长因子i，仅能够检测igf-1的量，不具有区分度，无法识别与igf-1具有不同氨基酸数目的变体。专利技术人利用maldi-tof ms检测胰岛素样生长因子i时，发现含有胰岛素样生长因子i的样品检测结果显示还有单电荷质荷比7500～7520和单电荷质荷比7343～7363的峰，经过进一步的实验验证，确定了这两个峰分别对应胰岛素样生长因子i的des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体。专利技术人通过采用上述的检测试剂盒，特别是创造性的发现进行检测时，将igf-1抗体键合在epoxy磁珠上，使得利用本专利技术的检测试剂盒能够准确检测出des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体，从而为igf-1的疾病分析提供精细化数据。同时专利技术人还发现，采用其他的磁珠键合方式，例如通过生物素-链霉亲和素系统将igf-1内标或胰岛素样生长因子i的变体键合在磁珠上，并不能同时检测des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体两种变体，导致检测结果不准确，无法提供igf-1的疾病分析的精细化数据。
13、采用本专利技术的检测试剂盒，不仅能够准确检测des-r igf-1变体和des-rr igf-1变体的量，同时也能检测igf-1的量，通过将检测到的igf-1、des-r igf-1变体和des-rrigf-1变体的量三者相加，获得igf-1总量，提升igf-1定量的准确度。根据医院的需求，通过提供igf-1的量或者igf-1总量或者igf-1变体的量，获得igf-1的疾病分析的精细化数据。
14、根据本专利技术的实施方案，所述igf-1特异性抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
15、根据本专利技术的实施方案，所述igf-1特异性抗体的亲和力常数kd值为1×10-9-9×10-12。
16、本专利技术提供的igf-1抗体用于富集igf-1变体，能够提高检测的灵敏度。
17、根据本专利技术的实施方案，所述试剂盒进一步包括磁珠，所述磁珠与所述igf-1特异性抗体键合，所述磁珠为epoxy磁珠。
18、根据本专利技术的实施方案，所述epoxy磁珠的粒径为0.1μm～25μm，优选0.5μm～5μm。
19、根据本专利技术的实施方案，所述内标igf-1重组蛋白为同位素标记的igf-1蛋白或者连接标签序列的igf-1蛋白，或者与igf-1蛋白的氨基酸序列一致性超过80％的能够被所述igf-1抗体富集的多肽。
20、内标igf-1重组蛋白可降低样本前处理、仪器分析过程对检测重现性影响，提高检测的精密度。
21、根据本专利技术的实施方案，所述同位素为h2、n15、c13或o18。
22、根据本专利技术的实施方案，所述标签序列包括选自his标签、flag标签、gst标签、mbp标签、c-myc标签、ha标签、fc标签、avi标签、mbp标签、ddddk标签中的至少之一。
23、根据本专利技术的实施方案，所述反应缓冲液包括选自mes缓冲液、pbst缓冲液、tris-hcl缓冲液中的至少之一。
24、根据本专利技术的实施方案，所述反应缓冲液的ph值为6-8。
25、反应缓冲液ph值为6-8能够提供ph值为6-8的目标物富集环境，提高抗体对igf-1变体的富集效率。
26、根据本专利技术的实施方案，所述反应缓冲液为pbst缓冲液，其中含有0.1-0.6％tween 20。
27、根据本专利技术的实施方案，所述基质包括选自芥子酸、α-氰基-4-羟基肉桂酸、2,5-二羟基苯甲酸、2,4,6-三羟基苯乙酮、蒽三酚、3-吲哚丙烯酸中的至少之一。
28、根据本专利技术的实施方案，所述基质为α-氰基-4-羟基肉桂酸。
29、根据本专利技术的实施方案，所述α-氰基-4-羟基肉桂酸的浓度为5-20mg/ml。
30、本专利技术优选采用α-氰基-4-羟基肉桂酸作为maldi-tof ms平台的基质，能够提升质谱图峰值数和强度。
31、根据本专利技术的实施方案，所述抗原抗体复合物解离试剂包括选自有机酸溶液、无机酸溶液、碱溶液中的至少之一，
32、所述有机酸溶液包括选自甲酸溶本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.胰岛素样生长因子I的变体的检测试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述IGF-1特异性抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括磁珠，所述磁珠与所述IGF-1特异性抗体键合，所述磁珠为Epoxy磁珠；
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述内标IGF-1重组蛋白为同位素标记的IGF-1蛋白或者连接标签序列的IGF-1蛋白，或者与IGF-1蛋白的氨基酸序列一致性超过80％的能够被所述IGF-1抗体富集的多肽；
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包括选自MES缓冲液、PBST缓冲液、Tris-HCl缓冲液中的至少之一；
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述基质包括选自芥子酸、α-氰基-4-羟基肉桂酸、2,5-二羟基苯甲酸、2,4,6-三羟基苯乙酮、蒽三酚、3-吲哚丙烯酸中的至少之一；
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括裂解液，所述裂解液用于对血清或者血浆待测样本进行裂解处理；
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括清洗液，所述清洗液用于在洗脱溶液对抗原抗体复合物进行洗脱处理前，对所述抗原抗体复合物进行清洗，所述清洗液包括第一清洗液，所述第一清洗液为含有非离子型表面活性剂的缓冲液；
9.一种用于同时检测胰岛素样生长因子I及其变体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为权利要求1-8任一项所述的试剂盒。
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【技术特征摘要】
1.胰岛素样生长因子i的变体的检测试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述igf-1特异性抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括磁珠，所述磁珠与所述igf-1特异性抗体键合，所述磁珠为epoxy磁珠；
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述内标igf-1重组蛋白为同位素标记的igf-1蛋白或者连接标签序列的igf-1蛋白，或者与igf-1蛋白的氨基酸序列一致性超过80％的能够被所述igf-1抗体富集的多肽；
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包括选自mes缓冲液、pbst缓冲液、tris-hcl缓冲液中的至少之一；
【专利技术属性】
技术研发人员：马雪婷，陈宏敏，黄改荣，周晓光，李运涛，王蕾，
申请(专利权)人：融智生物科技青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：
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