【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种免疫性血小板减少症骨髓免疫细胞特征图谱的建立方法及其应用。
技术介绍
1、免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia，itp)作为一种获得性自身免疫性出血性疾病，约占出血性疾病总数的1/3，成人的年发病率为5～10/100000。itp患者表现为外周血孤立血小板减少，伴或不伴有出血症状。体液免疫和细胞免疫异常共同参与了itp的发病过程。由于发病机制的复杂性，对免疫细胞特征进行全面系统的分析将为itp患者精细分组和个性化治疗提供重要参考。质谱流式细胞(cytometry of time of flight，cytof)技术是一种新的基于质谱原理的多参数流式细胞检测技术，具有显著高于传统流式细胞技术的高分辨能力。利用cytof技术建立itp骨髓免疫细胞图谱，解析免疫细胞亚群比例及细胞表面重要免疫检查点分子的表达，这对未来itp精准治疗的实现提供支持。
2、共信号受体不具有抗原特异性，通常以辅佐分子的形式分布在tcr和bcr附近。当淋巴细胞与其他免疫细胞发生相互作用时，该辅佐分子向tcr或bcr附近聚集，形成免疫突触，并与相应配体结合，为免疫细胞输送激活或抑制信号。因而此类受体实际上分两类，一类启动激活信号的转导，称协同刺激受体(为t、b细胞激活提供第二信号)，另一类启动抑制信号的转导，为抑制性受体。两者相互对抗，其机制在于受体分子胞内段分别带有免疫受体酪氨酸激活基序(itam)和抑制基序(itim)。因而共信号受体的配体应该是共信号分子(cosignal m
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何获得免疫性血小板减少症患者的骨髓免疫细胞特征图谱和/或如何对免疫性血小板减少症患者进行个性化治疗和/或如何开发或制备对免疫性血小板减少症进行免疫治疗分层的产品。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种获取免疫性血小板减少症患者骨髓免疫细胞特征图谱的方法，其特征在于：所述方法使用免疫分子标记采用免疫染色的方法对通过质谱流式检测系统获得的免疫性血小板减少症患者人群和健康对照人群的骨髓免疫细胞的比例和所述骨髓免疫细胞中共信号分子的含量的比较分析，获得所述免疫性血小板减少症患者的免疫细胞特征图谱的步骤。
3、上述方法可包括如下步骤：
4、a1)骨髓单个核细胞获得：提取免疫性血小板减少症患者和健康对照人群骨髓血样本中的骨髓单个核细胞；
5、a2)胞外染色：对所述骨髓单个核细胞通过免疫染色的方法进行胞外染色，使得所述骨髓单个核细胞中的骨髓免疫细胞和所述骨髓免疫细胞中的共信号分子与其对应的携带有显色剂的特异性抗体结合，获得免疫染色的骨髓单个核细胞；
6、a3)流式质谱检测：对所述免疫染色的骨髓单个核细胞进行流式质谱检测获得质谱流式检测数据；
7、a4)数据分析：对所述免疫性血小板减少症患者人群和所述健康对照人群的所述质谱流式检测数据进行分析，获得在所述免疫性血小板减少症患者人群和所述健康对照人群中比例存在差异的所述骨髓免疫细胞和表达模式存在差异的所述共信号分子，得到免疫性血小板减少症患者骨髓免疫细胞特征图谱。
8、上述表达模式可为表达水平。
9、上述方法中，所述骨髓免疫细胞可为经典1型树突状细胞(cdc1)、经典2型树突状细胞(cdc2)、浆细胞样树突状细胞(pdc)、cd45rb阳性树突状细胞(cd45rb+dc)、经典型单核细胞(classical mono)、非经典型单核细胞(non-classical mono)、中间型单核细胞(intermediate mono)、cd8+t细胞初始t细胞(naive)亚群、cd8+t细胞中央记忆t细胞(cm)亚群、cd8+t细胞效应记忆t细胞(em)亚群、cd8+t细胞效应细胞(ef)亚群、γδt细胞亚群、cd4+t细胞初始t细胞(naive)亚群、cd4+t细胞中央记忆t细胞(cm)亚群、cd4+t细胞效应记忆t细胞(em)亚群、cd4+t细胞效应细胞(ef)亚群、cd4+t细胞tfh辅助t细胞亚群、cd4+t细胞th1辅助t细胞亚群、cd4+t细胞th17辅助t细胞亚群和cd4+t细胞treg辅助t细胞亚群；所述共信号分子可为cd28、icos(可诱导共刺激分子，cd278)、hvem(疱疹病毒进入介质，cd270)、btla(b和t淋巴细胞衰减因子,cd272)、ctla4(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4，cd152)、pd-1(程序性死亡受体1，cd279)、lag3(淋巴细胞激活基因3，cd223)和tim-3(t淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3，cd366)。
10、上述方法中，a2)中所述携带有显色剂的特异性抗体可为携带有金属同位素的特异性抗体。
11、上述方法中，a4)中可使用flowjo软件对所述质谱流式检测数据进行分析。
12、所述分析可包括原始数据标准化的步骤，所述原始数据标准化可为使用校准微球对不同批次样本的原始数据进行矫正。
13、上文所述免疫性血小板减少症患者可为中国人群。
14、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了上文所述的方法在开发或制备治疗、辅助治疗或个性化治疗免疫性血小板减少症患者的药物中的应用。
15、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了上文所述的方法在开发或制备免疫性血小板减少症患者免疫治疗分层产品中的应用。
16、上文所述的方法在开发免疫性血小板减少症患者治疗靶点中的应用也属于本专利技术的保护范围。
17、为了进一步详细解析骨髓固有免疫和适应性免疫细胞亚群及细胞表面重要免疫检查点分子在itp患者中的变化，本专利技术应用质谱流式技术对itp患者骨髓细胞进行了免疫细胞特征图谱绘制。
18、本专利技术对itp患者的骨髓免疫细胞特征图谱进行了描述。本专利技术使用质谱流式方法进行免疫细胞分析，鉴定髓系细胞和t细胞亚群，并聚焦重要免疫检查点分子的表达，如ctla4、icos等。活动性itp患者骨髓免疫细胞亚群比例和免疫检查点分子表达模式的特征性变化为itp患者精准治疗提供依据，可应用于开发或制备治疗免疫性血小板减少症患者的相关药物。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种获取免疫性血小板减少症患者骨髓免疫细胞特征图谱的方法，其特征在于：所述方法使用免疫分子标记采用免疫染色的方法对通过质谱流式检测系统获得的免疫性血小板减少症患者人群和健康对照人群的骨髓免疫细胞的比例和所述骨髓免疫细胞中共信号分子的含量的比较分析，获得所述免疫性血小板减少症患者的免疫细胞特征图谱的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述骨髓免疫细胞为经典1型树突状细胞、经典2型树突状细胞、浆细胞样树突状细胞、CD45RB阳性树突状细胞、经典型单核细胞、非经典型单核细胞、中间型单核细胞、CD8+T细胞初始T细胞亚群、CD8+T细胞中央记忆T细胞亚群、CD8+T细胞效应记忆T细胞亚群、CD8+T细胞效应细胞亚群、γδT细胞亚群、CD4+T细胞初始T细胞亚群、CD4+T细胞中央记忆T细胞亚群、CD4+T细胞效应记忆T细胞亚群、CD4+T细胞效应细胞亚群、CD4+T细胞Tfh辅助T细胞亚群、CD4+T细胞Th1辅助T细胞亚群、CD4+T细胞Th17辅助T细胞亚群和CD4+T细胞
4.根据权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其特征在于：A2)中所述携带有显色剂的特异性抗体为携带有金属同位素的特异性抗体。
5.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：A4)中使用Flowjo软件对所述质谱流式检测数据进行分析。
6.根据权利要求1-5中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述免疫性血小板减少症患者为中国人群。
7.权利要求1-6中任一权利要求所述的方法在开发或制备治疗、辅助治疗或个性化治疗免疫性血小板减少症患者的药物中的应用。
8.权利要求1-6中任一权利要求所述的方法在开发或制备免疫性血小板减少症患者免疫治疗分层产品中的应用。
9.权利要求1-6中任一权利要求所述的方法在开发免疫性血小板减少症患者治疗靶点中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种获取免疫性血小板减少症患者骨髓免疫细胞特征图谱的方法，其特征在于：所述方法使用免疫分子标记采用免疫染色的方法对通过质谱流式检测系统获得的免疫性血小板减少症患者人群和健康对照人群的骨髓免疫细胞的比例和所述骨髓免疫细胞中共信号分子的含量的比较分析，获得所述免疫性血小板减少症患者的免疫细胞特征图谱的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述骨髓免疫细胞为经典1型树突状细胞、经典2型树突状细胞、浆细胞样树突状细胞、cd45rb阳性树突状细胞、经典型单核细胞、非经典型单核细胞、中间型单核细胞、cd8+t细胞初始t细胞亚群、cd8+t细胞中央记忆t细胞亚群、cd8+t细胞效应记忆t细胞亚群、cd8+t细胞效应细胞亚群、γδt细胞亚群、cd4+t细胞初始t细胞亚群、cd4+t细胞中央记忆t细胞亚群、cd4+t细胞效应记忆t细胞亚群、cd4+t细胞效应细胞亚群、cd4+t细胞tfh辅助t细胞亚群、cd4+t细胞th1辅助t细胞亚群、cd4+t细胞th17辅助t细胞亚群和cd4+t细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓辉，刘凤琪，渠清源，黄晓军，付海霞，陈琪，皇秋莎，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：
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