制备胰腺前体细胞的方法技术

本发明专利技术公开一种制备胰腺前体细胞的方法，涉及干细胞分化调控技术领域，该制备胰腺前体细胞的方法包括如下步骤：S1：干细胞扩增培养；S2：诱导干细胞分化为定型内胚层细胞；S3：诱导定型内胚层细胞分化为原始肠管细胞；S4：诱导原始肠管细胞分化为后前肠细胞；S5：诱导后前肠细胞分化为胰腺前体细胞；该步骤S5中诱导后前肠细胞分化为胰腺前体细胞具体包括阶段一、阶段二和阶段三；通过采用本申请提供的制备胰腺前体细胞的方法可稳定高效地制备胰腺前体细胞，为有效获取胰腺前体细胞或胰岛β细胞提供了新的途径；本申请提供的制备胰腺前体细胞的方法得到的胰腺前体细胞纯度好、活率高，有望用于糖尿病的治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及干细胞分化调控领域技术，尤其是指一种制备胰腺前体细胞的方法。

技术介绍

1、糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，长期存在的高血糖会导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。截止于2022年末，全球已检出的成年糖尿病患者人数高达5.5亿，中国有超1.4亿患者，相较于10年前增长了约5千万人。传统治疗糖尿病的手段主要有药物治疗、手术治疗，药物治疗包括服用降糖药和注射胰岛素，但长期地使用药物会增加肾脏负担进而引起一系列的心血管疾病以及产生耐药，严重影响着患者的生活质量。手术治疗包括胰岛移植和代谢手术，胰岛移植存在着供体来源受限以及免疫排斥的风险，而代谢手术也存在手术创面较大，恢复过程缓慢等风险。近十几年来，细胞治疗为糖尿病治疗提供了新的方案，其中干细胞作为具有多种分化潜能且具有无限复制、增殖的能力的种子细胞进入人们视野。由干细胞来源的胰岛β细胞可以较好地解决胰岛移植过程中供体来源不足的问题，同时可以实现自体移植治疗。

2、研究报道，通过在体外添加化学小分子和生长因子可以激活或者抑制某些信号通路从而模拟胰岛在体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述BET溴结构域泛抑制剂为I-BET282E，作用浓度为1μM。

3.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述m6A去甲基化酶ALKBH5的辅因子为dm-αKG，作用浓度为8mM。

4.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述步骤S5中诱导后前肠细胞分化为胰腺前体细胞的阶段一、阶段二和阶段三均在37℃条件下的二氧化碳培养箱内培养。

5.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其...

【技术特征摘要】

1.一种制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述bet溴结构域泛抑制剂为i-bet282e，作用浓度为1μm。

3.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述m6a去甲基化酶alkbh5的辅因子为dm-αkg，作用浓度为8mm。

4.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述步骤s5中诱导后前肠细胞分化为胰腺前体细胞的阶段一、阶段二和阶段三均在37℃条件下的二氧化碳培养箱内培养。

5.根据权利要求1所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述步骤s1中的干细胞为人多能干细胞，该人多能干细胞为人诱导多能干细胞或者是不经过人体内发育的人类胚胎获取的胚胎干细胞。

6.根据权利要求5所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述步骤s1中干细胞扩增培养包括：步骤s11：将人多能干细胞用mtesr1培养基于37℃二氧化碳培养箱至细胞融合度达80％-90％；以及步骤s12：使用accutase消化人多能干细胞至单细胞，接种于铺有稀释比例为1：100的growth factor reduced-matrigel 24孔板中，采用mtesr1培养基培养24h。

7.根据权利要求5所述的制备胰腺前体细胞的方法，其特征在于：所述步骤s...

【专利技术属性】
技术研发人员：高云峰，许静玉，肖丹，程艳红，温俊杰，蔡车国，胡隽源，
申请(专利权)人：深圳市北科源细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：