【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于类脑器官应用，具体而言，涉及髓鞘化类脑器官在制备用于检测中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体的制品中的应用。
技术介绍
1、中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病(idiopathic inflammatory demyelinatingdisorders,iidds)是一类以累及中枢神经系统的无菌性炎性反应及其导致的组织损伤为主要特征的疾病，发病与数种自身抗体相关。iidds多为复发-缓解病程，每次发作后往往遗留有神经功能缺损，是中青年人非创伤致残的重要原因之一。神经免疫疾病广泛的疾病谱导致早期精准诊断、疾病进展监测、药物选择与疗效判断很大程度上依赖于不同生物标记物和自身抗体的实验室精准检测。多数神经免疫性疾病，如中枢神经脱髓鞘谱系疾病，主要由b细胞介导、t细胞参与，通过产生特异性抗体，引发后续的补体激活、细胞杀伤或受体抗原交联和内化等过程，从而引起神经细胞损伤或功能缺失。不同疾病具有相对特异性抗体，抗体滴度一般与疾病严重程度相关。
2、临床工作中仍有大量不明原因自身免疫病病人存在，有研究估计约一半自身免疫病患者无法找到对应抗体。一方面可能源于现有自身抗体检测手段灵敏度限制，另一方面也可能源于包括潜在的未知自身抗体在内的未发掘的致病机理及疾病标记物识别。
3、对于已知的神经系统自身抗体的检测方法主要有基于细胞的间接免疫荧光法(cell based assay,cba)、免疫膜条印迹法和酶联免疫法。间接免疫荧光法采用表达重组抗原的细胞爬片为检测基质，检测结果具有高特异性和高灵敏性。免疫膜条印迹法将多种纯化
4、对于已知抗体阴性的但高度怀疑神经抗体介导致病患者，临床上为了进一步明确是否存在自身抗体，最常用的方法是利用动物脑组织切片染色法(tissue-based assay，tba)，通过标本中自身抗体与脑组织免疫组化反应呈现的模式来判断是否存在自身抗体。tba法最常使用的是大鼠脑组织切片，个别研究也使用过猴脑组织切片。tba阳性的患者可进一步利用多种技术来进一步明确其自身抗体识别抗原。自身抗体靶向蛋白的筛选可基于对先验蛋白功能、分布等知识去预测；或者利用自身抗体与细胞或组织裂解液孵育并通过免疫沉淀和蛋白质谱测序对抗体靶向蛋白进行鉴定，也可以采用噬菌体、酵母展示系统进行筛选，对于候选靶点蛋白进行逐个验证。尽管目前人们对于自身抗体/抗原的发现取得很大的进步，对于罕见抗体或者低滴度抗体的发现仍是挑战。
5、即使是与人类最为接近的巨猿，其脑组织的结构和发育特征仍与人类有一定差别。由于人类和动物间的物种差异，所获得的数据难以真实地模拟人类神经发育和疾病机制等。所以应用人类组织进行研究是最理想的实验方法，但使用人类组织进行研究存在着巨大的伦理挑战及组织来源匮乏等严重问题，难以实现。人源化类脑器官是多能干细胞(ipscs/esc)来源的具有与人类大脑组织类似的细胞类型、组织结构和功能的体外三维(3d)神经组织。类脑器官是由多能干细胞在三维培养条件下，通过添加神经发育相关调控信号因子而分化产生的与大脑的细胞组成、解剖结构相似，并可以体现出类似脑的发育进程及生理、病理和药理等特征的细胞培养物，是迄今在体外研究人脑发育与相关疾病，并开展药物筛选的良好模型。但目前尚无人源化髓鞘化类脑器官在检测中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体的应用的相关报道。
技术实现思路
1、本专利技术提供了人源化髓鞘化类脑器官在制备用于检测中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体的制品中的应用。
2、在一些实施方式中，所述中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体可以是髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体(mog抗体)。在另一些实施方式中，所述中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体可以是水通道蛋白-4抗体(aqp4抗体)。
3、在一些实施方式中，所述人源化髓鞘化类脑器官可以是指能够定向分化出成熟的少突胶质细胞，并且能够形成了包裹神经元轴突的致密髓鞘，其实例包括但不限于包含少突胶质细胞的神经球体。
4、在一些实施方式中，所述人源化髓鞘化类脑器官可以通过包括以下步骤的方法得到：
5、s1，使用补充有sb 431542和ldn 193189的oligo1培养基，从二维培养的人诱导性多能干细胞(ipsc)诱导出二维神经外胚层克隆；
6、s2，使用补充有bfgf的oligo2培养基，从诱导的二维神经外胚层克隆生成三维神经外胚层球体；
7、s3，使用oligo3培养基，对三维神经外胚层球体进行少突胶质细胞类脑器官分化和成熟，得到髓鞘化类脑器官。
8、步骤s1
9、在一些实施方式中，s1中，所述oligo1培养基为补充有以下组分的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基:f12(dulbecco's modified eagle medium:f12,dmem/f12)：
10、1％n2添加剂(n2 supplement)；
11、1％mem非必需氨基酸溶液(mem non-essential amino acids solution，neaa)；
12、1％青霉素-链霉素；
13、0.1％β-巯基乙醇。
14、在一些实施方式中，s1包括：
15、s1-1，用基质胶包被多孔板；
16、s1-2，将人ipsc克隆以20％-30％的密度铺在s1-1中得到的基质胶包被的多孔板中，在无血清干细胞培养基中培养1-2天，优选培养1天；
17、s1-3，使用补充有sb 431542和ldn 193189的oligo1培养基对人ipsc进行诱导分化得到二维神经外胚层克隆。
18、在一些实施方式中，基质胶可以为matrigel例如可以从corning得到。
19、在一些实施方式中，无血清干细胞培养基例如可以为stemflex例如可以从gibco得到。
20、在一些实施方式中，s1-3中，使用补充有sb 431542和ldn 193189的oligo1培养基对人ipsc进行诱导分化得到二维神经外胚层克隆的过程进行2-3天，每天更换添加补充有sb 431542和ldn 193189的新鲜oligo1培养基。
21、在一些实施方式中，s1中，sb 431542和ldn 193189构成双重smad抑制剂，在oligo1培养基中，sb 431542的浓度为10μm，ldn 193189的浓度为100nm。
22、步骤s2
23、在一些实施方式中，s2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.人源化髓鞘化类脑器官在制备用于检测中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体的制品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体是髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体(MOG抗体)，或者是水通道蛋白-4抗体(AQP4抗体)。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述人源化髓鞘化类脑器官通过包括以下步骤的方法得到：
4.根据权利要求3所述的应用，其中，步骤S1包括：
5.根据权利要求4所述的应用，其中，
6.根据权利要求1或2所述的应用，其中，步骤S2包括：
7.根据权利要求6所述的应用，其中，
8.根据权利要求1或2所述的应用，其中，步骤S3包括：
9.根据权利要求8所述的应用，其中，步骤S3-2中，在37℃孵育，例如在37℃培养箱中进行孵育，孵育时间优选在20-30min，更优选30min。
10.根据权利要求8所述的应用，其中，步骤S3-3中，
【技术特征摘要】
1.人源化髓鞘化类脑器官在制备用于检测中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体的制品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病相关抗体是髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体(mog抗体)，或者是水通道蛋白-4抗体(aqp4抗体)。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述人源化髓鞘化类脑器官通过包括以下步骤的方法得到：
4.根据权利要求3所述的应用，其中，步骤s1包括：
5...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝峻巍，柴国梁，梁艳，刘亮，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：
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