【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体为一种快速筛选多功能乳酸菌的方法。
技术介绍
1、乳酸菌是一种对人体健康至关重要的益生菌，它们在食品和医疗保健领域中具有广泛的应用，近年来，乳酸菌的研究热度持续升温，对于如何更好地开发和利用乳酸菌，推动其产业化发展，有着广泛的社会需求，本研究聚焦于“多功能乳酸菌”，旨在探索和开发具有更多功能的乳酸菌菌种，以满足日益增长的健康需求，在当前的环境背景下，“多功能乳酸菌”的研究具有深远的意义，随着社会的发展，人们的生活节奏日益加快，环境污染问题也日益严重，这使得人们面临的问题不再仅仅局限于饮食不均衡，人们还面临着消化系统紊乱、免疫力下降等一系列健康问题，在这样的情况下，“多功能乳酸菌”的研究显得尤为重要，驼奶作为一种珍贵的营养食品原料，近年来备受关注，然而，关于鲜驼奶的研究尚处于起步阶段，对其营养成分、功能特性、加工工艺等方面的研究还有许多未知领域，因此，开展鲜驼奶研究具有重要意义；
2、因此，我们提出了一种快速筛选多功能乳酸菌的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，解决了
技术介绍
中所提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，包括如下方法步骤：
3、步骤一：初步分离纯化和鉴定，将样品稀释至10-7，分别吸取10-4-10-7三个梯度的稀释液100μl涂布于已经制备好的mrs培养基平板上，37℃静置培养48h，挑出不同形态的菌落，多次离
4、步骤二：菌株pcr扩增，经初步分离纯化的乳酸菌通过试剂盒提取dna，然后按照下列反应条件进行pcr扩增：
5、第一次变性反应，反应温度为95℃，反应时间为5min；
6、30个循环反应，反应温度为95℃，反应时间为30s；
7、退火，温度为58℃，时间为20s；
8、延伸，温度为72℃，时间为6s；
9、未循环，温度为72℃，时间为7min。
10、步骤三：利用电泳设备对步骤三中得到的物质进行电泳测序；
11、步骤四：耐酸、耐胆盐能力测定，通过用1mol/l盐酸调节mrs培养基，对照正常mrs培养基对乳酸菌进行耐酸性筛选，测定乳酸菌在0.05％、0.1％、0.3％的胆盐培养基中的存活率；
12、步骤五：将步骤四中筛选出的乳酸菌模拟肠液胃液测定菌株存活率；
13、步骤六：将步骤五筛选出的乳酸菌测定其自聚率、疏水性、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性、蛋白酶活性、脂肪酶活性和降胆固醇能力的测定，进一步筛选出具有益生特性的乳酸菌。
14、作为本专利技术的一种优选实施方式，所述步骤二中pcr成分如下：
15、
16、
17、作为本专利技术的一种优选实施方式，pcr体系成分表中的所述的一对上下游引物是细菌通用引物27f和1492r。
18、作为本专利技术的一种优选实施方式，所述步骤四中的培养基的ph为3.0。
19、作为本专利技术的一种优选实施方式，所述步骤一中的保存条件为4℃冰箱保存。
20、作为本专利技术的一种优选实施方式，所述步骤四中的耐酸性测定的存活率计算方式为：存活率(％)＝候选菌株不同ph值培养基发酵液中活菌数/候选菌株常规培养基发酵液中活菌数x100％。
21、作为本专利技术的一种优选实施方式，所述步骤四中耐胆盐性测定的存活率计算方式为：存活率(％)＝候选菌株不同胆汁酸盐浓度培养基发酵液中活菌数/候选菌株常规培养基发酵液中活菌数x100％。
22、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
23、1、本专利技术提供了具有耐胃酸和抗胆汁能力强的，自凝聚能力较强、疏水性强、抗氧化性强、降胆固醇能力强的乳酸菌，同时乳酸菌也都通过硝酸盐还原实验和吲哚实验确定其安全性，可用于后续产品研发；
24、2、本专利技术从鲜驼奶中定向筛选出具有多种益生特性的乳酸菌,并通过多种方法对待测菌株进行检测与评价,目的性强,为益生菌的筛选和进一步产品研发提供理论指导。
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1.一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：包括如下方法步骤：
2.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤二中PCR成分如下：
3.根据权利要求2所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：PCR体系成分表中的所述的一对上下游引物是细菌通用引物27F和1492R。
4.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤四中的培养基的pH为2.0。
5.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤一中的保存条件为4℃冰箱保存。
6.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤四中的耐酸性测定的存活率计算方式为：存活率(％)＝候选菌株不同PH值培养基发酵液中活菌数/候选菌株常规培养基发酵液中活菌数X100％。
7.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤四中耐胆盐性测定的存活率计算方式为：存活率(％)＝候选菌株不同胆汁酸盐浓度培养基发酵液中活菌数/候选菌株常规培
...【技术特征摘要】
1.一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：包括如下方法步骤：
2.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤二中pcr成分如下：
3.根据权利要求2所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：pcr体系成分表中的所述的一对上下游引物是细菌通用引物27f和1492r。
4.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌的方法，其特征在于：所述步骤四中的培养基的ph为2.0。
5.根据权利要求1所述的一种快速筛选多功能乳酸菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：范旻，贾震虎，
申请(专利权)人：山西大养堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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