一种抗原蛋白的制备、纯化及其多克隆抗体制作制造技术

本发明专利技术公开一种抗原蛋白的制备、纯化及其多克隆抗体制作，属于生物医学技术领域，通过改进诱导条件分别能够在沉淀及上清大量产生，而后进行上清蛋白的纯化以及短时间内成功产生多克隆抗体的方法。特征是类似于HER2的抗原蛋白经诱导后大多于沉淀当中以包涵体形式表达，因沉淀当中包涵体蛋白的结构相应改变，上清可溶性蛋白的结构保持相对较完整，且免疫原性和稳定性较高，因此改进条件后使之在上清当中大量产生，后主要针对上清蛋白进行纯化，使用纯化后的融合抗原蛋白GST‑HER2融合蛋白作为免疫原免疫Ba l b/c小鼠，并在短时间内成功产生多克隆抗体并进行验证。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学，具体涉及一种抗原蛋白的制备、纯化及其多克隆抗体制作。

技术介绍

1、肿瘤特异性抗体对肿瘤的治疗提供了巨大临床价值，但实体瘤中合适的肿瘤相关抗原的可用性有限，导致肿瘤的治疗一直被视为世界难题。理想情况下的肿瘤特异性或者肿瘤相关性抗原，在恶性细胞上均匀过表达，但在健康细胞上的表达水平最小或没有表达水平，从而避免肿瘤外脱靶毒性。her家族(其包括4种酪氨酸激酶受体(egfr/her1、her2、her3和her4))激活参与细胞增殖的多重部分冗余互联下游信号级联反应(例如mapk和pi3k/akt途径)。已经在大量实体肿瘤(卵巢癌、胃癌、胰腺癌等)中观察到her异常信号传导。her2是细胞表面受体酪氨酸激酶(tk)，其通过与her家族受体的同源二聚化和异源二聚化来转导生长信号，抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞增殖及肿瘤血管和淋巴管新生，从而发挥促癌作用，间皮素(msln)，一种糖蛋白，抗原在卵巢癌中过表达，是最常见的肿瘤靶向抗原之一。msln在卵巢癌以外的几种实体瘤上过度表达，包括恶性胸膜间皮瘤(mpm)和胰腺导管腺癌，在正常间皮组织(胸膜本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，所述重组菌的获得方法包括以下步骤：取出500ul感受态细胞悬液冰上解冻，加入重组质粒10ul溶液，冰上放置30min后，42℃热击90s，后迅速置于冰上冷却3-5min，向管中加入1ml LB液体培养基，混匀后37℃培养一小时，将上述菌液摇匀后取100ul涂匀在含有Amp的LB板上，正面向上放置30min后倒置培养皿，37℃培养24h。

3.根据权利要求1所述的一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，所述原核表达载体为大肠杆菌表达载体，所述大...

【技术特征摘要】

1.一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，所述重组菌的获得方法包括以下步骤：取出500ul感受态细胞悬液冰上解冻，加入重组质粒10ul溶液，冰上放置30min后，42℃热击90s，后迅速置于冰上冷却3-5min，向管中加入1ml lb液体培养基，混匀后37℃培养一小时，将上述菌液摇匀后取100ul涂匀在含有amp的lb板上，正面向上放置30min后倒置培养皿，37℃培养24h。

3.根据权利要求1所述的一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，所述原核表达载体为大肠杆菌表达载体，所述大肠杆菌表达载体为pgex-6p-1。

4.根据权利要求1所述的一种人卵巢癌抗原的制备方法，其特征在于，所述重组质粒为pgex-6p-1-he...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈杨，许祎，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：