一种棉花原生质体的制备方法及其应用和转化方法技术

本发明专利技术属于植物分子育种技术领域，具体涉及一种棉花原生质体的制备方法及其应用和转化方法。本发明专利技术通过选择棉花黄化苗子叶或棉花黄化苗愈伤组织作为外植体，消耗了大部分次生成分，并通过实验处理减少干扰条件，在棉花中构建了省时、高效的原生质体制备方法。采用该方法可以进一步建立快速高效的原生质体瞬时转化体系，从外植体到获得成功表达GFP的原生质体只需13小时，可以快速获得高通量高活性的原生质体，获得的高通量高活性原生质体可应用于棉花亚细胞定位、体细胞杂交、遗传转化、植株再生等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物分子育种，具体涉及一种棉花原生质体的制备方法及其应用和转化方法。

技术介绍

1、棉花是一种重要的经济作物，棉花产业也是我国国民经济的重要支柱产业。植物中的原生质体是通过物理或者化学方法除去细胞壁后的植物细胞，由于细胞膜具有亲和性，原生质体可用于细胞融合杂交、瞬时转化、亚细胞定位、蛋白互作、代谢网络研究、再生成愈伤组织或胚状体等领域研究。近些年来，随着棉花各品种基因组序列的陆续发表，大量的棉花功能基因亟待验证。因此，利用基于原生质体的基因瞬时表达体系将加速基因功能鉴定的进程，且有助于快速筛选目标性状的dna片段。

2、目前植物原生质体分离的方法主要有机械法和酶解法，但是机械法分离操作困难、得率低，所以主流方法还是可快速分离出大批量、高活性原生质体的酶解法。瞬时转化技术通过将连接目的基因的质粒转染至特定物种原生质体中，使得细胞内游离的载体可在短时间内转录翻译表达出目标蛋白，其短期内快速表达的优点使得其已在转基因检测、细胞定位、生物制剂合成、蛋白互作分析、植物品种选育等许多领域都有大量应用。然而在棉花领域，由于棉花的细胞质次生代谢物本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种棉花原生质体的制备方法，其特征在于，包括：将棉花材料和酶解液混合，真空渗透后酶解；对所得酶解料液进行分离，得到所述棉花原生质体；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述棉花黄化苗子叶为严格避光、生长至两片子叶刚刚分离的状态。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解液与棉花材料的用量比为10mL：0.3～1g；所述酶解的转速为55rpm，时间为4～5h，温度为20～28℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述真空渗透的条件为避光，压强0.06～...

【技术特征摘要】

1.一种棉花原生质体的制备方法，其特征在于，包括：将棉花材料和酶解液混合，真空渗透后酶解；对所得酶解料液进行分离，得到所述棉花原生质体；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述棉花黄化苗子叶为严格避光、生长至两片子叶刚刚分离的状态。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解液与棉花材料的用量比为10ml：0.3～1g；所述酶解的转速为55rpm，时间为4～5h，温度为20～28℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述真空渗透的条件为避光，压强0.06～0.08mpa，时间为30min；所述分离的方式包括用孔径...

【专利技术属性】
技术研发人员：王茂军，罗宣宣，张献龙，张宇琪，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：