【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，具体涉及检测hiv-1 p24抗原的杂交瘤细胞，还涉及由该杂交瘤细胞分泌的单抗和在制备检测试剂中的应用。
技术介绍
1、艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，hiv)感染引起的以t细胞功能缺陷为主的一种混合免疫缺陷病，是一种病死率很高的严重传染病。自1981年美国发现第一例hiv感染患者以来，迄今已有30多年，发病率急剧上升。目前全球大约有3600多万人感染hiv，由于该病尚无有效的治愈方法和预防性疫苗，每年新增的感染人数约为200万。目前我国hiv感染者已有100多万，主要是hiv-1型感染，每年新增人数呈逐年上升的趋势。根据中国疾病预防控制中心公布的《2021全国法定传染病疫情情况》统计分析，2021年全年全国艾滋病新发病例数为60154例，发病率为4.2669/10万，报告死亡病例数为19623人，死亡率为1.3919/10万。最近几年hiv感染呈现逐步上升的趋势，因此我国的艾滋病防控工作十分艰巨。而对hiv感染者早期及时诊断和治疗是控制hiv传播的最有效的途径，及时准确的早期诊断能让感染者及早接受治疗，避免向健康人群进一步传播。
2、hiv诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分，建立敏感实用的检测方法对于监测、诊断或血液筛查，控制艾滋病的流行显得尤为重要。目前hiv检测方法较多，总体可分为抗体检测和病毒检测两大类，病毒检测包括细胞培养(病毒分离)、抗原检测和病毒核酸检测等。抗体通常是在感染后3-8周能够被检测出来，检测hiv抗体的血清学诊
3、hiv抗原能够在个体感染后先于血清转化2-18天检测到，其中hiv-1 p24蛋白是这些抗原物质最出众的一个靶抗原。p24抗原是病毒颗粒的主要核心蛋白，是病毒颗粒在成熟过程中由蛋白酶裂解hiv-1gag蛋白而生成。p24蛋白序列高度保守，且性质稳定，在hiv-1感染早期就可以在血清中检测到，因此通过检测血清转化期hiv-1 p24抗原有着很大的优势，可作为早期辅助诊断hiv-1感染的一种方法，能够将检测窗口期缩短至感染后2-3周。目前临床普遍采用的第四代hiv诊断试剂就是在hiv抗体检测的基础上增加了hiv-1 p24抗原检测，第四代hiv检测方法同时检测hiv p24抗原和抗体，因此能够大大提高检测的灵敏度，同时可以缩短诊断“窗口期”。但是在临床诊断中，hiv第四代诊断试剂，特别是国产试剂，较容易出现假阳性的结果，其主要原因可能是第四代诊断试剂均采用在固相载体上同时包被抗p24的单克隆抗体和hiv抗原，而载体的表面积是固定不变的，因此在制备试剂的过程中，吸附到载体上的抗原和抗体的量均受到了限制，导致检测的过程中出现了相互干扰的现象。同时基于elisa、电化学发光等方法开发的第四代hiv抗原抗体检测试剂，还存在成本较高，需要特殊的仪器设备和专业技术人员来操作，故不适合作为一线医疗机构或者家庭自测的hiv初筛检测。因此尝试开发一种更经济、更快速，且灵敏准确的hiv-1 p24抗原检测方法就十分重要，对艾滋病的防控意义重大。为了灵敏特异的检出hiv-1 p24抗原，就需要优质的hiv-1 p24单克隆抗体，但目前市面上还缺乏优质的p24单克隆抗体，这对hiv-1 p24抗原的免疫快速诊断试剂开发带来一定困难。因此，开发优质的hiv-1 p24单克隆抗体具有重要的市场价值和临床意义。
4、胶体金免疫层析法是一种经济快速，应用场景广泛的检测方法。因其操作便捷、不需要特殊设备和场地，是目前最适合在基层医疗机构和家庭自测中推广使用的方法。但目前免疫结合胶体金层析法普遍存在一定缺陷，如对样本的敏感度低，质量控制能力不够，批间、批内和不同试剂间变异系数过大等。因此，提高抗单克隆抗体对的敏感度和特异性，是弥补免疫结合胶体金层析法缺陷的重要手段。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术采用杂交瘤单克隆抗体制备技术，获取特异分泌hiv-1p24单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并从中筛选到高特异、高灵敏的hiv-1 p24抗体对。基于筛选的hiv-1 p24单克隆抗体对，采用胶体金标记技术与免疫层技术相结合的方式，研发高灵敏hiv-1 p24抗原检测试纸条，从而达到早期诊断hiv感染的目的。该专利技术试纸基于双抗体夹心法，将特异性的hiv-1 p24单克隆抗体包被固定在nc膜上作为检测线t，羊抗鼠igg包被固定在nc膜上作为质控线c，胶体金标记的hiv-1 p24单克隆抗体作为检测试剂吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，形成抗原抗体-胶体金复合物，该复合物再移动至nc膜固定有捕获抗体的区域，复合物又与固定的抗体发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，形成肉眼可见的红色条带，从而判定是否是hiv-1 p24阳性，结合hiv抗体检测，判断是否是hiv早期感染。整个检测过程只需要5-10分钟，且结果判读方便准确。该hiv-1 p24抗原检测试纸能有效的检出hiv早期感染，且操作简单、成本低廉、结果判读方便准确，故适合在各级医疗机构推广应用，特别适合献血员初筛检测，床旁快速检测以及家庭自测使用。因此，本专利技术的目的之一在于提供一种检测hiv-1 p24抗原的杂交瘤细胞gc4；本专利技术的目的之二在于提供所述杂交瘤细胞gc4分泌的单克隆抗体gc4；本专利技术的目的之三在于提供所述单克隆抗体gc4在制备检测hiv-1 p24抗原的检测试纸中的应用；本专利技术的目的之四在于提供含有所述单克隆抗体gc4的检测试纸。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、检测hiv-1 p24抗原的杂交瘤细胞gc4，所述杂交瘤细胞gc4保藏编号为gdmccno：63838，保藏日期为2023年09月26日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心。
4、2、所述杂交瘤细胞gc4分泌的单克隆抗体gc4。
5、3、所述单克隆抗体gc4在制备检测hiv-1 p24抗原的检测试剂中的应用。
6、本专利技术优选的，所述检测试剂的检测原理为胶体金法、免疫荧光层析法、酶联免疫法或化学发光法。
7、4、含有所述单克隆抗体gc4的检测试剂。
8、本专利技术优选的，所述检测试剂的检测原理为胶体金法。
9、本专利技术优选的，所述检测试剂含有胶体金试纸条，所述胶体金试纸条包括样品垫、胶体金垫、包被了检测t线和质控c线的硝酸纤维素膜，吸收垫互相衔接粘贴在衬底板；所述检测t线包被抗体gc4，所述胶体金垫上结合抗体hb3，所述抗体hb3由杂交瘤细胞hb3分泌。
10、本专利技术优选的，所述检测试剂含有胶体金试纸条，所述胶体金试纸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测HIV-1p24抗原的杂交瘤细胞GC4，其特征在于：所述杂交瘤细胞GC4保藏编号为GDMCC No：63838，保藏日期为2023年09月26日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞GC4分泌的单克隆抗体GC4。
3.权利要求2所述单克隆抗体GC4在制备检测HIV-1p24抗原的检测试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法、免疫荧光层析法、酶联免疫法或化学发光法。
5.含有权利要求2所述单克隆抗体GC4的检测试剂。
6.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法。
7.根据权利要求6所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂含有胶体金试纸条，所述胶体金试纸条包括样品垫、胶体金垫、包被了检测T线和质控C线的硝酸纤维素膜，吸收垫互相衔接粘贴在衬底板；所述检测T线包被抗体GC4，所述胶体金垫上标记抗体HB3，所述抗体HB3由杂交瘤细胞HB3分泌。
8.根据权利要求7所述的检测试剂，其特征
9.根据权利要求7所述的检测试剂，其特征在于：所述胶体金垫上的胶体金颗粒采用柠檬酸三钠还原法制备。
10.根据权利要求9所述的检测试剂，其特征在于：所述质控C线包被羊抗鼠IgG。
...【技术特征摘要】
1.检测hiv-1p24抗原的杂交瘤细胞gc4，其特征在于：所述杂交瘤细胞gc4保藏编号为gdmcc no：63838，保藏日期为2023年09月26日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞gc4分泌的单克隆抗体gc4。
3.权利要求2所述单克隆抗体gc4在制备检测hiv-1p24抗原的检测试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法、免疫荧光层析法、酶联免疫法或化学发光法。
5.含有权利要求2所述单克隆抗体gc4的检测试剂。
6.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂的检测原理为胶体金法。
7.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁作为，王永红，叶杨敏，李杰，
申请(专利权)人：重庆市中医院，
类型：发明
国别省市：
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