【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及烟草病害防治，更具体的说是涉及一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法和应用。
技术介绍
1、烟草是我国重要的经济作物，但是近年来，烟草病害频繁发生，在高温、高湿条件下极易发病，病害蔓延速度极快，常引起烟草腐烂、萎蔫、斑点等症状，造成烟草产量和品质下降，带来了严重的经济损失。因此，探寻简便、安全、无污染、高效的烟草病害防治方法成为了一大重点研究。
2、在中国专利技术专利cn 113951279 a中，公开了一种烟草青枯病防治的抑菌组合液及制备方法，此方法所述抑菌组合液由保加利亚乳杆菌裂解液和短小芽孢杆菌发酵液按一定比例混合成微生物菌液，再与黄腐酸、芥子碱、硼加硒、葛根素、鞣花酸和壳寡糖混合而成，对所得组合液进行稀释后喷洒整株。但是，该方法所用化学组合物过多，容易对环境造成污染，降低土壤中有益植株生长的菌群密度，且使植株更快产生抗性，不利于长久使用，喷洒后的溶液易于被雨水冲刷，防治效果被削减。
3、在中国专利技术专利cn 115812491 a中，公开了一种兼防烟草角斑病和烟草野火病的生物防治方法，包括在烟草成苗期喷施一次生防菌剂，大田移栽后15-20天第二次喷施生防菌剂；所述生防菌剂包括硅藻土、壳聚糖、蔗糖和生防菌培养液；所述生防菌培养液由多粘类芽孢杆菌发酵液、短小芽孢杆菌发酵液、侧孢短芽孢杆菌发酵液和荧光假单胞菌发酵液混合而得。但是，该菌剂粘附性不好，所用菌种过多，在纯化培养过程中容易染菌及死亡，不利用工业化生产。
4、在中国专利技术专利cn 108293388 a中，公开
5、因此，如何开发一种粘附性强、对土壤环境无污染的烟草病害防治制剂是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法和应用，以解决现有技术中的不足。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，具体包括以下步骤：
4、(1)先将地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis,bl-001)接种到改良lb固体培养基中进行活化，然后接种到改良lb液体培养基中进行震荡培养，得到地衣芽孢杆菌菌液；
5、(2)配制亚硒酸钠(na2seo3)溶液，过滤，灭菌，加入改良lb液体培养基中，然后接种地衣芽孢杆菌菌液进行培养；菌液离心后弃去上清液，沉淀依次用无菌水、nacl溶液和tris-hcl缓冲液洗涤；向洗涤后的沉淀中加入无菌水，冰浴超声破碎，离心后弃去沉淀，上清液离心后弃去上清液，沉淀用sds的tris/hcl缓冲液洗涤，离心，得到纳米硒沉淀；
6、(3)先将纳米硒沉淀重悬于第一份超纯水中，加入正辛醇，震荡，离心，静置，分层后弃去上层溶液，沉淀依次用氯仿、乙醇和无菌水洗涤，得到纳米硒颗粒；最后将纳米硒颗粒重悬于第二份超纯水中，超低温冷冻，真空冷冻干燥，获得纯化纳米硒颗粒(mse nps)；
7、(4)先将链霉素(sm)加入无水乙醇中，超声处理，然后加入纯化纳米硒颗粒，搅拌，离心后弃去上清液，沉淀用蒸馏水洗涤，干燥，得到链霉素-纳米硒固体(sm@mse nps)，备用；
8、(5)配制硫酸钛(ti(s04)2)溶液，搅拌的同时逐滴加入氨水，生成白色沉淀，调节反应体系ph值为7.0，用去离子水洗涤抽滤，用纯水稀释，逐滴加入h2o2溶液，水热反应，得到纳米二氧化钛光半导体溶胶，备用；
9、(6)将低熔点琼脂糖la(lowmeltingpointagarose)粉末加入蒸馏水中，加热搅拌的同时加入链霉素-纳米硒固体和纳米二氧化钛光半导体溶胶进行混合，离心后弃去上清液，沉淀用pbs缓冲液洗涤，干燥，即得用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂(tio2@sm@mse@lanps)。
10、进一步，上述步骤(1)中，以质量百分比计，改良lb固体培养基的配方为：1％蛋白胨、0.5％酵母粉、1％nacl、0.5％可溶性淀粉、2％葡萄糖、0.5％牛肉膏和2％琼脂粉，余量为水；以质量百分比计，改良lb液体培养基的配方为：1％蛋白胨、0.5％酵母粉、1％nacl、0.5％可溶性淀粉、2％葡萄糖和0.5％牛肉膏，余量为水；震荡培养的温度为30℃，转速为150r/min，时间为36h。
11、进一步，上述步骤(2)中，亚硒酸钠溶液的浓度为10g/l；过滤的滤膜孔径为0.22μm；改良lb液体培养基中亚硒酸钠的浓度为120μg/ml；地衣芽孢杆菌菌液的接种量为体积分数2％；培养的温度为30℃，转速为150r/min，时间为60h；菌液离心的转速为12000r/min，时间为10min；nacl溶液的质量浓度为0.9％；tris-hcl缓冲液的浓度为0.1mol/l；洗涤的次数为3次；冰浴超声破碎的时间为30min；离心的转速为3000r/min，时间为10min；上清液离心的转速为12000r/min，时间为10min；sds的tris/hcl缓冲液中，sds的质量浓度为1％，tris/hcl缓冲液的浓度为1.5mol/l，ph值为8.3；洗涤的次数为3次。
12、进一步，上述步骤(3)中，纳米硒沉淀、第一份超纯水、正辛醇、氯仿、乙醇、无菌水和第二份超纯水的质量体积比为2g:10ml:5ml:10ml:10ml:10ml:15ml；震荡的时间为5min；离心的转速为3000r/min，时间为5min；静置的温度为4℃，时间为24h；超低温冷冻的温度为-80℃，时间为12h；真空冷冻干燥的时间为36h。
13、进一步，上述步骤(4)中，硫酸链霉素、无水乙醇和纯化纳米硒颗粒的质量体积比为20mg:10ml:10mg；超声处理的时间为10min；搅拌的温度为室温，转速为800rpm，时间为24h；洗涤的次数为3次。
14、进一步，上述步骤(5)中，硫酸钛溶液的浓度为1.5mol/l；氨水的浓度为3mol/l；硫酸钛与h2o2的摩尔比为1:4；h2o2溶液的质量浓度为30％。
15、进一步，上述步骤(6)中，低熔点琼脂糖粉末、蒸馏水、链霉素-纳米硒固体和纳米二氧化钛光半导体溶胶的质量体积比为20mg:10ml:30mg:10mg；加热搅拌的温度为35℃，时间为2h；混合的温度为35℃，时间为6h；离心的转速为8000rpm，时间为10min；pbs缓冲液的浓度为0.01mol/l，ph为7.4；洗涤的次数为3次；干燥的温度为室温。
16、本专利技术还请求保护一种上述制备方法制得的纳米凝胶制剂在防治烟草病害中的应用。
17、一种上述制备方法制得的纳米凝胶制剂的使用方法，具体包括以下步骤：
18、(1)将纳米本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，以质量百分比计，所述改良LB固体培养基的配方为：1％蛋白胨、0.5％酵母粉、1％NaCl、0.5％可溶性淀粉、2％葡萄糖、0.5％牛肉膏和2％琼脂粉，余量为水；以质量百分比计，所述改良LB液体培养基的配方为：1％蛋白胨、0.5％酵母粉、1％NaCl、0.5％可溶性淀粉、2％葡萄糖和0.5％牛肉膏，余量为水；所述震荡培养的温度为30℃，转速为150r/min，时间为36h。
3.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述亚硒酸钠溶液的浓度为10g/L；所述过滤的滤膜孔径为0.22μm；所述改良LB液体培养基中亚硒酸钠的浓度为120μg/mL；所述地衣芽孢杆菌菌液的接种量为体积分数2％；所述培养的温度为30℃，转速为150r/min，时间为60h；所述菌液离心的转速为12000r/min，时间为10min；所述NaCl溶液的质量浓度
4.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述纳米硒沉淀、第一份超纯水、正辛醇、氯仿、乙醇、无菌水和第二份超纯水的质量体积比为2g:10mL:5mL:10mL:10mL:10mL:15mL；所述震荡的时间为5min；离心的转速为3000r/min，时间为5min；所述静置的温度为4℃，时间为24h；所述超低温冷冻的温度为-80℃，时间为12h；所述真空冷冻干燥的时间为36h。
5.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述硫酸链霉素、无水乙醇和纯化纳米硒颗粒的质量体积比为20mg:10mL:10mg；所述超声处理的时间为10min；所述搅拌的温度为室温，转速为800rpm，时间为24h；所述洗涤的次数为3次。
6.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述硫酸钛溶液的浓度为1.5mol/L；所述氨水的浓度为3mol/L；所述硫酸钛与H2O2的摩尔比为1:4；所述H2O2溶液的质量浓度为30％。
7.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述低熔点琼脂糖粉末、蒸馏水、链霉素-纳米硒固体和纳米二氧化钛光半导体溶胶的质量体积比为20mg:10mL:30mg:10mg；所述加热搅拌的温度为35℃，时间为2h；所述混合的温度为35℃，时间为6h；所述离心的转速为8000rpm，时间为10min；所述PBS缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.4；所述洗涤的次数为3次；所述干燥的温度为室温。
8.一种如权利要求1所述制备方法制得的纳米凝胶制剂在防治烟草病害中的应用。
9.一种如权利要求1所述制备方法制得的纳米凝胶制剂的使用方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的一种纳米凝胶制剂的使用方法，其特征在于，步骤(1)中，所述纳米凝胶制剂溶液的浓度为2-6mg/mL；步骤(2)中，所述喷洒的次数为2-3次，每次间隔15天，每次喷洒纳米凝胶制剂溶液的质量为60-180mL。
...【技术特征摘要】
1.一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，以质量百分比计，所述改良lb固体培养基的配方为：1％蛋白胨、0.5％酵母粉、1％nacl、0.5％可溶性淀粉、2％葡萄糖、0.5％牛肉膏和2％琼脂粉，余量为水；以质量百分比计，所述改良lb液体培养基的配方为：1％蛋白胨、0.5％酵母粉、1％nacl、0.5％可溶性淀粉、2％葡萄糖和0.5％牛肉膏，余量为水；所述震荡培养的温度为30℃，转速为150r/min，时间为36h。
3.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述亚硒酸钠溶液的浓度为10g/l；所述过滤的滤膜孔径为0.22μm；所述改良lb液体培养基中亚硒酸钠的浓度为120μg/ml；所述地衣芽孢杆菌菌液的接种量为体积分数2％；所述培养的温度为30℃，转速为150r/min，时间为60h；所述菌液离心的转速为12000r/min，时间为10min；所述nacl溶液的质量浓度为0.9％；所述tris-hcl缓冲液的浓度为0.1mol/l；所述洗涤的次数为3次；所述冰浴超声破碎的时间为30min；所述离心的转速为3000r/min，时间为10min；所述上清液离心的转速为12000r/min，时间为10min；所述sds的tris/hcl缓冲液中，sds的质量浓度为1％，tris/hcl缓冲液的浓度为1.5mol/l，ph值为8.3；所述洗涤的次数为3次。
4.根据权利要求1所述的一种用于防治烟草病害的纳米凝胶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述纳米硒沉淀、第一份超纯水、正辛醇、氯仿、乙醇、无菌水和第二份超纯水的质量体积比为2g:10ml:5ml:10ml:10ml:10ml:15ml；所述震荡...
【专利技术属性】
技术研发人员：王振华，彭德元，符昌武，汤晓明，汪薇，田金艳，郭世杰，戴曦，刘天波，尹华群，孟德龙，徐正琪，
申请(专利权)人：湖南省烟草公司张家界市公司，
类型：发明
国别省市：
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