【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，具体讲，涉及一种纳米囊泡及其制备方法和应用。
技术介绍
1、中枢神经系统疾病通常包括急性脑损伤和慢性神经退行性病变，这些疾病常常伴随着神经元的损伤，影响大脑的神经元结构和功能，因此，积极寻找神经元损伤的有效治疗分子靶点，开发能有效透过血脑屏障、靶向大脑病灶的载药系统具有重要意义。
2、死亡相关蛋白激酶1(dapk1)是一种钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸/苏氨酸激酶，在阿尔茨海默病、癫痫、抑郁症和脑卒中等神经系统疾病中dapk1表达异常上调，而通过dapk1基因表达消融或dapk1活性抑制可缓解脑组织损伤。tc-dapk6分子式为c17h12n2o2，分子量为276.29，结构式如下：
3、
4、tc-dapk6是通过基于结构的虚拟筛选和鉴定得到的最有效的dapk1小分子抑制剂，是以抑制dapk1为靶点来治疗神经细胞损伤的有应用前景的药物分子。然而，dapk1表达于心、肺、脾和脑等多种组织中，参与介导细胞凋亡、自噬、炎症、氧化应激、神经发生、神经元损伤和突触传递等生理或病理过程，如何将tc-dapk6递送到脑内神经炎性病灶是一个亟待解决的问题。
5、tc-dapk6直接给药(例如腹腔注射)具有药物代谢快、血脑屏障透过性差和副作用多等缺点，难以对神经细胞损伤发挥精准治疗作用。
6、将药物分子装载到纳米粒子中可以保护药物不易被酶解，提高药物稳定性，延长血液循环时间。然而，纳米粒子作为生物体的外来材料易被肝脏、肾脏和免疫系统清除，并且对血脑屏障的透过性较低，限
7、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种纳米囊泡及其制备方法和应用，以有效解决tc-dapk6对脑内炎症病灶的靶向递送和治疗用药问题。
2、本专利技术提供了一种纳米囊泡，纳米囊泡的膜为巨噬细胞的细胞膜，纳米囊泡内核为载药纳米颗粒，载药纳米颗粒以中空介孔二氧化硅纳米颗粒为载体，载体负载有死亡相关蛋白激酶1抑制剂tc-dapk6。
3、可选的，载体上还负载有荧光染料，荧光染料选自罗丹明b或荧光异硫氰酸荧光素。
4、可选的，纳米囊泡的直径为60nm～150nm，优选为80nm～100nm；中空介孔二氧化硅颗粒的直径为70nm～90nm。
5、本专利技术提供了该纳米囊泡的制备方法，至少包括以下步骤：
6、s1、将中空介孔二氧化硅纳米颗粒分散于有机溶剂中，加入死亡相关蛋白激酶1抑制剂tc-dapk6，搅拌后经过分离、清洗、干燥，得到载药纳米颗粒；其中，中空介孔二氧化硅纳米颗粒、死亡相关蛋白激酶1抑制剂tc-dapk6的质量比为4～1：1；
7、s2、分离获得巨噬细胞膜；
8、s3、将载药纳米颗粒与巨噬细胞膜在缓冲溶液中混合，得到混合液，利用微型脂质体挤出器将混合液依次通过孔径400nm和200nm的多孔膜挤出12～18次，获得纳米囊泡。
9、可选的，s1中，每mg中空介孔二氧化硅纳米颗粒分散于有机溶剂的体积为2ml～4ml，有机溶剂选自无水乙醇，搅拌的时间为8～14小时，转速为500～700rpm。
10、可选的，s1中，将中空介孔二氧化硅纳米颗粒分散于有机溶剂中，加入死亡相关蛋白激酶1抑制剂tc-dapk6和荧光染料，中空介孔二氧化硅纳米颗粒、死亡相关蛋白激酶1抑制剂tc-dapk6和荧光染料的质量比为2：2：1～1：1：1。
11、可选的，s1中，分离采用离心的方法，清洗采用无水乙醇清洗2～4次，干燥的时间为8～12小时。
12、可选的，s3中，载药纳米颗粒与巨噬细胞膜的质量比为2：1～1：2；载药纳米颗粒的浓度为0.5mg/ml～1mg/ml。
13、本专利技术提供了上述纳米囊泡在用于制备治疗神经细胞损伤的药物中的应用。
14、本专利技术提供了一种脑内靶向制剂，含有上述纳米囊泡。
15、本专利技术所提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：
16、本专利技术提出了一种纳米囊泡，是一种仿生纳米粒子，以载药纳米颗粒为内核，巨噬细胞的细胞膜为膜对药物进行包覆形成核壳结构。具有粒径小、毒性低、可穿透血脑屏障的技术优势，在炎症病灶特异性抑制死亡相关蛋白激酶1(dapk1)，通过缓解炎症反应和减少神经细胞凋亡对神经细胞损伤发挥治疗作用。
17、本专利技术的纳米囊泡为治疗神经细胞损伤提供了一种新型的脑内靶向给药系统，可将tc-dapk6靶向递送到脑内炎症部位。
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1.一种纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的膜为巨噬细胞的细胞膜，所述纳米囊泡的内核为载药纳米颗粒，所述载药纳米颗粒以中空介孔二氧化硅纳米颗粒为载体，所述载体负载有死亡相关蛋白激酶1抑制剂TC-DAPK6。
2.根据权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于，所述载体上还负载有荧光染料，所述荧光染料选自罗丹明B或荧光异硫氰酸荧光素。
3.根据权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的直径为60nm～150nm，优选为80nm～100nm；所述中空介孔二氧化硅颗粒的直径为70nm～90nm。
4.如权利要求1～3任一项所述的纳米囊泡的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S1中，每mg所述中空介孔二氧化硅纳米颗粒分散于所述有机溶剂的体积为2mL～4mL，
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S1中，将所述中空介孔二氧化硅纳米颗粒分散于有机溶剂中，加入死亡相关蛋白激酶1抑制剂TC-DAPK6和荧光染料，所述中空介孔二氧化硅纳米颗粒、死亡相关蛋白激酶1抑制剂TC-
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S1中，所述分离采用离心的方法，所述清洗采用无水乙醇清洗2～4次，所述干燥的时间为8～12小时。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S3中，所述载药纳米颗粒与巨噬细胞膜的质量比为2：1～1：2；
9.如权利要求1～2任一项所述的纳米囊泡在用于制备治疗神经细胞损伤的药物中的应用。
10.一种脑内靶向制剂，其特征在于，含有如权利要求1～3任一项所述的纳米囊泡。
...【技术特征摘要】
1.一种纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的膜为巨噬细胞的细胞膜，所述纳米囊泡的内核为载药纳米颗粒，所述载药纳米颗粒以中空介孔二氧化硅纳米颗粒为载体，所述载体负载有死亡相关蛋白激酶1抑制剂tc-dapk6。
2.根据权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于，所述载体上还负载有荧光染料，所述荧光染料选自罗丹明b或荧光异硫氰酸荧光素。
3.根据权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的直径为60nm～150nm，优选为80nm～100nm；所述中空介孔二氧化硅颗粒的直径为70nm～90nm。
4.如权利要求1～3任一项所述的纳米囊泡的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，s1中，每mg所述中空介孔二氧化硅纳米颗粒分散于所述有机溶剂的体积为2ml～4m...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵国光，李玉皓，李文友，耿超，任兴慧，魏鹏虎，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：
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