【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物化学和计算化学领域，具体涉及一种靶向c-maf小分子抑制剂筛选及抗骨髓瘤应用。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤(multiple myeloma, mm)是一种无法治愈的恶性血液肿瘤，可由意义未明的单克隆免疫球蛋白病(mgus)进展为冒烟型骨髓瘤。有研究表明，转录因子c-maf在骨髓瘤中失调，约25%的骨髓瘤细胞和6%的骨髓瘤患者存在t(14;16) c-maf基因易位，50%的骨髓瘤细胞中存在c-maf过表达。c-maf基因重排在骨髓瘤患者中有临床相关性，t(14;16)易位的患者总生存期较短。另一方面，c-maf过表达可促进骨髓瘤耐药，而c-maf沉默可诱导骨髓瘤细胞对蛋白酶体抑制剂的化学敏感性。综上所述，c-maf是一个重要的骨髓瘤驱动基因，其在早期mm进展中起着至关重要的作用。因此，开发新的c-maf抑制剂将有助于揭示多发性骨髓瘤新型分子靶向药物。
2、已有证据表明糖皮质激素、毛花苷c以及usp5抑制剂wp1130均可以通过降低c-maf蛋白水平或抑制c-maf基因的转录活性，进而调控骨髓瘤的发生发展进程。而当前关于直接靶向转录因子c-maf的研究较少。因此，需要利用c-maf的晶体结构进行基于分子对接的虚拟筛选，以开发潜在的靶向c-maf小分子抑制剂。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种索拉非尼或格列美脲在制备抗骨髓瘤药物方面的应用。
2、本专利技术的另一目的是在现有fda批准药物的基础上，通过虚拟筛选、
3、本专利技术的目的可以通过以下措施达到：
4、索拉非尼或格列美脲在制备抗骨髓瘤药物方面的应用。
5、索拉非尼或格列美脲在制备靶向c-maf小分子抑制剂药物方面的应用。
6、一种用于抗骨髓瘤的药物组合物，它以索拉非尼或格列美脲为活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
7、本专利技术的药物组合物，它可以由药学上可接受的方法制成液体制剂、固体制剂、半固体制剂或气体制剂。其中包括液体剂型包括溶液剂、注射剂、洗剂、搽剂等，固体制剂包括散剂、丸剂、片剂、膜剂等，半固体制剂包括软膏剂、凝胶剂、栓剂、糊剂等，气体制剂包括气雾剂、喷雾剂等。
8、本专利技术公开了一种筛选靶向c-maf小分子抑制剂的方法，它包括基于分子对接的虚拟筛选的步骤，包括：
9、（1）以c-maf的晶体结构作为受体蛋白，选择药物筛选文库，使用sybyl-x2.1中的dbtranslate模块对药物分子进行三维结构预处理，再采用surflex分子对接模块sybyl-x2.1用于基于分子对接的虚拟筛选；
10、（2）利用氨基酸arg294、asn298、tyr301、ala302、cys305和arg306在c-maf 晶体结构a链上形成的结合袋所构成的结合位点；在受体制备过程中，通过生物聚合物模块添加c-maf缺失的氢原子，去除所有的水分子；
11、（3）启动对接前后的分子优化，通过对接得分排序和聚类分析选择目标。
12、在步骤（1）中，优选的，选择fda批准的药物作为筛选文库。
13、在步骤（2）中，优选的，利用氨基酸arg294、asn298、tyr301、ala302、ser304、cys305、arg306、lys308和arg309在c-maf 晶体结构a链上形成的结合袋所构成的结合位点。
14、在步骤（2）中，优选的，将对接参数的最大构象数量设置为20，优化后的最大步长为1000步，能量梯度为0.005 kcal/(mol*å)。
15、在步骤（3）之后，还可以进一步通过分子动力学模拟、分子力学及mm/gbsa自由能计算和实验分析进一步筛选靶向c-maf小分子抑制剂，它具体可包括：
16、1）检测不同剂量化合物处理的rpmi-8226的细胞毒性，并计算每种化合物的ic50值，从而确定潜在的靶向c-maf的潜在小分子抑制剂；例如本申请在实施例2中检测了不同剂量化合物处理的rpmi-8226的细胞毒性，并计算了每种化合物的ic50值，进一步使用荧光素酶报告系统检测上述化合物对c-maf转录活性的影响，结果表明，索拉非尼和格列美脲均能明显抑制mare启动子荧光素酶活性，以及格列美脲和索拉非尼降低c-maf蛋白水平的表达。
17、2）检测筛选出的化合物对骨髓瘤细胞功能的影响，来判断其作用效果和机理；例如本申请实施例3中通过流式细胞术检测显示，格列美脲和索拉非尼可通过降低c-maf蛋白表达促进骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡。
18、3）可优化筛选出的化合物的对接预测结合模式，对每种c-maf/配体复合物进行模拟，并计算c-maf的均方根偏差(rmsd)值，以进一步评价c-maf/配体复合物的结合稳定性；例如本申请在实施例4中我们对每种c-maf/配体复合物进行了100 ns md模拟，并计算了c-maf的均方根偏差(rmsd)值(图4a)。rmsd图表明两个体系在很短的时间内达到平衡。此外，还计算了每个残基的均方根波动(rmsf)，以进一步评价c-maf/配体复合物的结合稳定性(图4b)，结果表明，各系统在50 ~ 100 ns的波动更小、更稳定。
19、4）通过mm/gbsa自由能计算，利用已有的公式计算c-maf/配体复合物的结合自由能，并利用amber 12中的mmpbsa模块进行了mm/gbsa自由能分解分析，研究c-maf与抑制剂之间的详细结合作用；可结合自由能可以分布到受体的每个残基上，每个配体-残基对的结合相互作用由三个能量项组成:范德华贡献(δevdw)、静电贡献(δeele)和脱溶项(δedesolvation)，其中包括极性项(δggb)和非极性项(δgsa)；最终判断筛选出的化合物是否能与c-maf的a链强结合，以及判断不同氨基酸对配体的结合所起的作用。例如本申请在实施例5中证实格列美脲和索拉非尼都能与c-maf的a链强结合，并指出在c-maf/glimepiride体系中，贡献最多的氨基酸是arg294、tyr301和arg306。
20、本专利技术还包括在c-maf/sorafenib和c-maf/glimepiride系统中，arg294、asn298、tyr301、ala302、cys305和arg306这6种氨基酸在c-maf 晶体结构a链上形成的结合位点在筛选靶向c-maf小分子抑制剂方面的应用。
21、本专利技术还包括氨基酸arg294、tyr301和arg306在c-maf 晶体结构a链上形成的结合位点在筛选靶向c-maf小分子抑制剂方面的应用。
22、本申请在现有fda批准药物的基础上，通过虚拟筛选、分子动力学(md)模拟、分子力学及mm/gbsa自由能计算和实验分析，发现可抑制c-m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.索拉非尼或格列美脲在制备抗骨髓瘤药物方面的应用。
2.索拉非尼或格列美脲在制备靶向c-Maf小分子抑制剂药物方面的应用。
3.一种用于抗骨髓瘤的药物组合物，其特征在于它以索拉非尼或格列美脲为活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于它由药学上可接受的方法制成液体制剂、固体制剂、半固体制剂或气体制剂。
5.一种筛选靶向c-Maf小分子抑制剂的方法，其特征在于它包括基于分子对接的虚拟筛选的步骤，包括：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在步骤（1）中选择FDA批准的药物作为筛选文库。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在步骤（2）中利用氨基酸Arg294、Asn298、Tyr301、Ala302、Ser304、Cys305、Arg306、Lys308和Arg309在c-Maf 晶体结构A链上形成的结合袋所构成的结合位点。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在步骤（2）中将对接参数的最大构象数量设置为20，优化后的最大步长为1000步，能量梯
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在步骤（3）之后，通过分子动力学模拟、分子力学及MM/GBSA自由能计算进一步筛选靶向c-Maf小分子抑制剂。
10.氨基酸Arg294、Tyr301和Arg306在c-Maf 晶体结构A链上形成的结合位点在筛选靶向c-Maf小分子抑制剂方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.索拉非尼或格列美脲在制备抗骨髓瘤药物方面的应用。
2.索拉非尼或格列美脲在制备靶向c-maf小分子抑制剂药物方面的应用。
3.一种用于抗骨髓瘤的药物组合物，其特征在于它以索拉非尼或格列美脲为活性成分，辅以药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于它由药学上可接受的方法制成液体制剂、固体制剂、半固体制剂或气体制剂。
5.一种筛选靶向c-maf小分子抑制剂的方法，其特征在于它包括基于分子对接的虚拟筛选的步骤，包括：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在步骤（1）中选择fda批准的药物作为筛选文库。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于在步骤（2）中利用氨基酸ar...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚若斯，刘琳琳，曾银娣，张亚欣，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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