【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物物种鉴定和核酸体外扩增检测，具体的说，涉及一种基于内标准基因的快速鉴定三七成分的检测方法及其试剂盒。
技术介绍
1、三七(panax notoginseng)是一种五加科人参属多年生直立草本植物，高可达60厘米，主根肉质，呈纺锤形，茎暗绿色，指状复叶，轮生茎顶，叶柄具条纹，叶片膜质，伞形花序单生于茎顶，有花100朵左右，总花梗有条纹，苞片多数簇生于花梗基部，卵状披针形，花梗纤细，小苞片多数，花小，淡黄绿色，花萼杯形，稍扁，花丝与花瓣等长，子房下位，果扁球状肾形，种子白色，三角状卵形，7-8月开花，8-10月结果。三七主要分布于云南、广西、江西、四川等地。三七营养价值丰富，有止血、破血散瘀、消炎定痛和滋补之功效，是治疗跌打损伤的主要药物，它的花、叶亦有清热之效。三七花是三七全株中三七皂苷含量最高的部分。但由于三七花从外形上与人参花和西洋参花极其相似，所以也会随之产生一些混淆或掺杂等现象。三七花产销量最大，云南苗族、壮族用三七花制作菜肴和茶饮的历史悠久，其价格高于西洋参花和人参花。人参花在东北地区作为特产出售，市场上有少量出售，但明显少于三七花，常被用于冒充或混掺三七花出售。随着经济社会的不断发展和人们对食品药品的质量要求越来越高，改善以上现状，维护消费者的合法权益，建立健全高效、快速的食品药品掺假检测体系就显得尤为重要。
2、鉴定食品生物源性成分掺假的方法有很多种，包括形态学方法、物理化学方法、组学鉴定技术和分子标记技术等。随着现代生物技术的飞速发展，遗传标记已经从传统的形态、细胞学和生化标记转变成了
3、特定物种的内标准基因是区分与其他物种有别的遗传标记，可用于物种及其产物的鉴定和转基因成分的检测等许多领域。内标准基因是指具有拷贝数恒定、物种专一性、不显示等位基因变化的保守dna序列，必须具有种间特异性和种内非特异性，种间特异性是指选择了对该物种具有特异性但在其他物种中同源性较低的基因，而种内非特异性是指同一物种不同栽培品种的内标准基因具有较高的同源性和相似性。在pcr的检测中，最基础的就是针对该物种的内标准基因进行检测，并且在pcr检测时需要对pcr体系的建立是否可靠、提取的基因组dna样品是否适用于pcr反应等问题进行分析。同时，在开发一种物种的内标准基因时，应优先选择同源序列少、序列较完整的基因，以确保物种的特异性。所以当一个新的内标准基因被开发时，应该首先通过ncbi的nucleotide数据库搜索物种的基因信息，并对其进行blast比对分析，从中初步筛选出同源序列少、具有物种特异性的基因。再通过pcr验证引物的物种特异性，最后选择特异性好、灵敏度高的引物作为检测引物。成分来源的鉴别中，使用内标准基因检测就比较方便准确快捷。三七这种高营养价值产品深受大家喜爱，但是掺假现象层出不穷，并且许多的可食用花卉单凭形态特征无法判断其种类或是否有毒，所以通过内标准基因来鉴定就十分精准。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种基于内标准基因的快速鉴定三七成分的检测方法，内标准基因的核苷酸序列如seq id no:1所示，本专利技术方法是以该内标准基因作为鉴定的靶基因。
2、本专利技术鉴定时，可以使用扩增该内标准基因的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4所示，采用定性、定量pcr方法检测；
3、本专利技术方法还可以使用特异性引物seq id no:5和seq id no:6，采用定性、定量rpa方法检测；
4、本专利技术方法可以通过构建检测试剂或试剂盒实现，检测试剂或试剂盒中包含了上述特异性引物以及常规检测试剂。
5、本专利技术确定的用于鉴定三七的内标准基因，设计了用于检测该基因的定性、定量pcr以及定性、定量rpa的引物作为试剂盒，建立了鉴定三七成分的变温pcr方法和等温rpa方法，这两种方法费时少、特异性好、灵敏度高、操作简单、结果易于观察。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种内标准基因在快速鉴定三七中的应用，所述内标准基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：使用扩增权利要求1所述内标准基因的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：使用扩增权利要求1所述内标准基因的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6示。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：三七包括三七花、三七根、三七叶。
5.一种检测试剂盒，其特征在于：包含权利要求2或3所述应用中使用的特异性引物。
【技术特征摘要】
1.一种内标准基因在快速鉴定三七中的应用，所述内标准基因的核苷酸序列如seqidno:1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：使用扩增权利要求1所述内标准基因的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4所示。
3.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：商颖，马彦，易伦朝，任达兵，胡永丹，顾颖，向姝娜，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
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