【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种pcsk9单克隆抗体电荷异质性检测方法。
技术介绍
1、pcsk9，中文全称前蛋白转化酶枯草溶菌素9型，是他汀类药物之后最可靠的降脂药靶点，作用机制是pcsk9能够与低密度脂蛋白受体(ldlr)结合，降低肝脏从血液中清除低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c，也称坏胆固醇)的能力。以repatha为代表的pcsk9抑制剂，通过抑制pcsk9与ldlr的结合，提高肝脏清除ldl-c的能力，降低血液中ldc-c的水平，适应症为纯合子家族性高胆固醇血症、杂合子家族性高胆固醇血症、高胆固醇血症。
2、由于pcsk9单克隆抗体具有较为复杂的电荷异质性，因此需要组合多种理化分析技术对其进行检测。成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectricfocusing,icief)是一种将毛细管等电聚焦电泳与全柱成像技术相结合的新型电泳系统，当样品进行等电聚焦时，高性能的紫外光信号检测镜头可以对整个聚焦分离通道、聚焦过程进行实时监控和记录，整个过程不移动毛细管柱，也无须移动样品，提高了样品等电点测定的准确度和重复性，且能在几分钟内完成分析测定，为电荷异质性分析提供了一个快速、灵敏、高分离度的选择，对保证单抗类药物生产工艺的稳定性及质量控制具有重要意义。pcsk9单克隆抗体常呈现微观不均一性，即“异质性”，包括电荷、疏水、形态等相关的异构体。其中，由于蛋白分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷异构体，产生原因主要与翻译后修饰有关，可能来自于pcsk9单克隆抗体分子复杂的生物合成途径，如细
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种pcsk9单克隆抗体的电荷异质性检测方法，用于蛋白的电荷异质性的定性及定量分析检测。
2、本专利技术提供如下技术方案：
3、1.检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，包括以下步骤：
4、将抗pcsk9单克隆抗体与储备液混合，采用icief方法进行电荷异质性检测，其中icief的分离条件为：聚焦电压1500v、聚焦时间1min；聚焦电压3000v、聚焦时间9min以上；检测波长：280nm，其中所述储备液包括以下组分：ph为5-8的两性电解质，ph为3-10的两性电解质，0.5％的pi marker 5.12，0.5％的pi marker 8.18，0.35％的甲基纤维素和10％-40％的助溶剂，其中各组分的浓度为添加所述抗pcsk9单克隆抗体后的终浓度，其中两种两性电解质的比例为1:1-3:1。
5、2.项目1所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述助溶剂的终浓度为10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％或40％。
6、3.项目1或2所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述助溶剂是simplesol蛋白助溶剂。
7、4.项目1-3任一项所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述抗pcsk9单克隆抗体与所述储备液按1:4(v/v)的比例进行混合。
8、5.项目1-4任一项所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述两性电解质为pharmalyte ph 5-8和pharmalyte ph 3-10，或者所述两性电解质为aeslyteph 3-10和aeslyte ph 5-8。
9、6.项目5所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述pharmalyte ph 5-8和pharmalyte ph 3-10的浓度为2％，或者所述aeslyte ph 3-10和aeslyte ph 5-8的浓度为2％。
10、7.项目1-6任一项所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述抗pcsk9单克隆抗体的重链序列如seq id no:1所示，轻链序列如seq id no:2所示。
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1.检测抗PCSK9单克隆抗体的电荷异质性的方法，包括以下步骤：
2.权利要求1所述的检测抗PCSK9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述助溶剂的浓度为10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％或40％。
3.权利要求1或2所述的检测抗PCSK9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述助溶剂是SimpleSol蛋白助溶剂。
4.权利要求1-3任一项所述的检测抗PCSK9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述抗PCSK9单克隆抗体与所述储备液按1:4(v/v)的比例进行混合。
5.权利要求1-4任一项所述的检测抗PCSK9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述两性电解质为Pharmalyte pH 5-8和Pharmalyte pH 3-10，或者所述两性电解质为AESlytepH 3-10和AESlyte pH 5-8。
6.权
7.权利要求1-6任一项所述的检测抗PCSK9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述抗PCSK9单克隆抗体的重链序列如SEQ ID NO:1所示，轻链序列如SEQ ID NO:2所示。
...【技术特征摘要】
1.检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，包括以下步骤：
2.权利要求1所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述助溶剂的浓度为10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，21％，22％，23％，24％，25％，26％，27％，28％，29％，30％，31％，32％，33％，34％，35％，36％，37％，38％，39％或40％。
3.权利要求1或2所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述助溶剂是simplesol蛋白助溶剂。
4.权利要求1-3任一项所述的检测抗pcsk9单克隆抗体的电荷异质性的方法，其中所述抗pcsk9单克隆抗体与所述储备液按1:4(v/v)的比例进行混合。
【专利技术属性】
技术研发人员：李百勇，郭秋菊，马顺，
申请(专利权)人：康融东方广东医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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