【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及外泌体，具体为一种外泌体的分离检测方法。
技术介绍
1、外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
2、外泌体是一种由细胞分泌的纳米级膜泡，包含了多种生物活性分子，如蛋白质、脂质和核酸等。这些分子可以作为细胞间通讯的媒介，传递信息并影响受体细胞的功能。因此，外泌体的分离和检测对于基础研究和临床应用具有重要意义。然而，现有的外泌体分离和检测方法存在操作复杂、效率低下或无法准确定量等问题。因此，开发一种简便、高效且能准确定量外泌体的方法具有重要价值。
技术实现思路
1、鉴于现有技术中所存在的问题，本专利技术公开了一种外泌体的分离检测方法，采用的技术方案是，包括以下步骤：
2、s1：收集待分离的细胞培养外泌体上清液或体液样本，并进行初步离心，去除大型颗
3、s2：将上一步得到的上清液转移至新的离心管中，进行超高速离心，以分离出外泌体；
4、s3：用pbs缓冲液洗涤外泌体，并再次超高速离心以获得纯净的外泌体样品；s4：将分离出的外泌体进行纳米孔测序，以确定其核酸和/或蛋白质组成；
5、s5：对纳米孔测序得到的序列数据进行处理和分析，以获取外泌体的分子组成和定量信息；
6、s6：根据数据处理和分析结果，输出外泌体的分子组成和定量信息。
7、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s1中初步离心为低速离心，离心力为300g-500g，时间10-15分钟。
8、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s2中超速离心的离心力为18000g-20000g，离心时间60分钟-80分钟。
9、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s3中速离心的离心力为10000g-12000，离心时间30分钟-40分钟。
10、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s1、s2和s3中离心温度均为4℃。
11、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s4中纳米孔测序采用生物信息学方法进行数据处理和分析。
12、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s5通过纳米孔测序技术进行分子组成和定量分析。
13、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述s5中通过纳米孔测序技术进行疾病诊断和监测。
14、本专利技术的有益效果：本专利技术结合了超速离心和纳米孔测序技术，实现了外泌体的简便、高效和准确定量分离与检测，本方法不仅适用于基础研究，也可应用于临床诊断和疾病监测等领域。
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1.一种外泌体的分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S1中初步离心为低速离心，离心力为300g-500g，时间10-15分钟。
3.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S2中超速离心的离心力为18000g-20000g，离心时间60分钟-80分钟。
4.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S3中速离心的离心力为10000g-12000g，离心时间30分钟-40分钟。
5.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S1、S2和S3中离心温度均为4℃。
6.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S4中纳米孔测序采用生物信息学方法进行数据处理和分析。
7.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S5通过纳米孔测序技术进行分子组成和定量分析。
8.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述S5中通过
...【技术特征摘要】
1.一种外泌体的分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述s1中初步离心为低速离心，离心力为300g-500g，时间10-15分钟。
3.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述s2中超速离心的离心力为18000g-20000g，离心时间60分钟-80分钟。
4.根据权利要求1所述的一种外泌体的分离检测方法，其特征在于：所述s3中速离心的离心力为10000g-12000g，离心时间30分...
【专利技术属性】
技术研发人员：王端贺，杨程，王开聚，杨怀军，
申请(专利权)人：上海循源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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