【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物造模，具体涉及到一种一种基于冰黄连水煎液形成脾阳虚证动物模型的方法。
技术介绍
1、脾阳虚证是指脾阳虚衰，失于温运，阴寒内生，以食少、腹胀腹痛、便溏等为主要表现的虚寒证候。本证多因脾气虚进一步发展；或因过食生冷、外寒直中、过用苦寒，损伤脾阳；或肾阳不足，命门火衰，火不生土，以致脾阳虚衰，温运失职，寒从内生，水谷失运，水湿不化。脾阳虚证的病因一般为脾阳虚衰，运化失职，故腹胀纳少；阳虚则寒从中生，寒凝气滞，故腹痛喜温喜按；阳虚水湿不化，流注肠中，故大便溏薄清稀；脾阳虚不温四末，故形寒肢冷；中阳不振，水湿内停，膀胱气化失司，故小便不利；流溢肌肤则肢体困重，甚至肢体浮肿，渗注于下则妇女白带量多质稀。舌淡胖苔白滑，脉沉迟无力皆为阳气亏虚、寒湿内停之症。故而临床表现为食少，腹胀，腹痛绵绵，喜温喜按，畏寒怕冷，四肢不温，面白少华或虚浮，口淡不渴，大便稀溏，甚至完谷不化，或肢体浮肿，小便短少，或白带清稀量多，舌质淡胖或有齿痕，舌苔白滑，脉沉迟无力。
2、中医证候模型是利用动物的某些生物体表特征来模拟人体证候特征的一类生物表征模型。脾虚证是中医临床常见的证候之一，为探究脾虚证本质，现代学者建立了一系列各具特色的脾虚证动物模型，这些模型都不同程度地模拟了脾虚证的临床表现和生物学特点。
3、脾阳虚的动物模型建立方法，已经被多个文献公开，从造模机理来看，一般可以将其分为以下几种方法：苦寒泻下法、寒湿困脾法、饮食失节法、西药法、手术法以及复合因素法。
4、文献1：曾梅艳等公开了《脾阳虚证动物模型构建及
5、在脾阳虚证动物模型早期研究中，单因素造模法应用较多。根据脾阳虚证病机及临床表现分析，衍生出苦寒泻下法、寒湿困脾法、饮食失节法、西药法、手术法等。中医单因素造模法包括苦寒泻下法、寒湿困脾法、饮食失节法；西医单因素造模法包括使用利血平以及采用肩胛间棕色脂肪切除手术。具体的造模方法过程如下。
6、苦寒泻下法：苦寒泻下法造模是指用泻下药对大鼠进行灌胃，通过药物性凉、泻下作用致大鼠脾阳虚衰。常用泻下药有大黄、番泻叶等。
7、寒湿困脾法：脾喜燥恶湿，寒湿侵袭，易致脾气湿困，运化失常。此方法通过模拟寒冷潮湿环境复制脾阳虚证模型。将鼠笼铺设厚锯末，采用人工气候箱模拟寒湿环境，温度维持于(6±2)℃，湿度维持在(90±4)％，造模30d，wistar大鼠出现典型脾阳虚表现。
8、饮食失节法：《素问·痹论篇》载：“饮食自倍，肠胃乃伤。”研究者根据此理论采用饮食失节法构造脾阳虚证动物模型。通过喂饲小鼠甘蓝，2d加喂猪脂1次，数量不限，9d后，小鼠出现脾阳虚表现。
9、西医单因素造模法
10、西药造模法：脾阳虚证动物模型可使用现代西医药物构建，其中利血平使用频率较高。利血平通过影响中枢神经系统，消耗体内儿茶酚胺类物质，致使机体交感神经功能低下，出现类脾阳虚表现。郭健等按0.2mg/kg剂量对wistar大鼠腹腔注射利血平，1次/d，连续3d，大鼠出现体重减轻、精神不振、腹泻、皮毛枯槁等症。
11、手术法：肩胛间棕色脂肪是成年动物主要产热物质，采用肩胛间棕色脂肪切除手术，可减少动物产热，衰减阳气。采用肩胛间棕色脂肪组织切除方法构建脾阳虚证模型，前41d普通饲喂，第42天实施肩胛骨棕色脂肪切除术，术后饲喂28d，建立小鼠脾阳虚证模型。
12、复合因素造模法：现代人因偏食生冷、贪凉、作息不规律等，易引起脾阳虚衰，患者所表现的临床症状也更加复杂。故单因素造模法已不能满足脾阳虚证动物模型构建。基于致病因素和临床表现的复杂性，越来越多研究采用复合因素造模法，以下就复合因素造模法建立脾阳虚证动物模型进行总结论述。
13、中医复合因素造模法：
14、中医复合因素造模法大部分先建立脾气虚证模型，再通过苦寒泻下法构造阳虚证模型，其优点在于更贴近临床脾阳虚证发病机制，所造模型较符合脾阳虚证临床综合表现。熊睿等在第1阶段对sd大鼠采用饮食失节加劳倦过度法伤脾气，单日喂饲甘蓝10g/只，双日灌胃猪脂2ml/只，每日下午于4℃水中游泳至力竭；第2阶段采用苦寒泻下法伤脾阳，每日灌胃大鼠1.5ml生药浓度为1g/ml的番泻叶水浸液。当大鼠出现蜷缩、腹泻、不能坚持游泳等现象时，表明造模成功。
15、胡源祥等则采用苦寒泻下+饥饱失常法复制脾阳虚证模型，给予大鼠大黄水煎液10ml/kg，1次/d，单日禁食，双日不禁食，建立脾阳虚证模型。姬爱冬等[14]采用苦寒泻下法合并寒湿困脾法复制脾阳虚证模型，通过灌胃sd大鼠9g/kg的大黄粉溶液，同时在模拟寒湿环境的气候造模箱中培养大鼠9d，从而得到脾阳虚证模型。
16、文献2：尚冰公开的《脾气虚证、脾阴虚证、脾阳虚证模型大鼠mda,sod,gsh-px,t-aoc,8-ohdg,端粒长度变化的实验研究》；文中也公开了大鼠脾阳虚证模型症状的评价标准，其主要包括游泳耐力下降、倦怠懒动、眯眼、弓背、肛温下降、蜷缩聚堆、体重减轻、食量减少、粪便溏泻和皮毛干枯。
17、文献2公开的造模效果评价标准或者内容与大部分公认的造模评价方法基本相同，由此可见，现有技术中对于脾阳虚证的评价方法较为近似，本专利技术可以采用上述评价方式对造模动物进行评价，判断造模效果。
18、文献3：李芹等在《脾阳虚证动物模型造模方法与模型评价的研究进展》对脾阳虚动物造模方法所得到的动物模型的评价方法进行了总结。
19、以上造模方法所致的脾阳虚证动物模型的共性症状主要有进食减少、倦怠少动、大便溏泄、皮毛枯槁、肛温下降、喜聚堆等，但是不同的造模方法所致的脾阳虚模型也具有其独特的个性症状。苦寒泻下法模型多伴有久泻不止、脱肛；寒湿困脾法模型伴有饮水量减少、关节肿大；饮食失节法模型多伴有大便先干后溏；中医病因复合法为多因素共同作用，其病因病机更加贴近临床，个性特征不明显。西药法和手术法均不符合中医病因，西药法模型多伴有抑郁，而手术法重复实验相对少，个性特征暂不明确。
20、脾阳虚模型微观指标一般是从动物的生化指标进行检测对比，具体的微观指标如下所示：
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23、文中还公开了利用苦寒泻下法建立脾阳虚模型属于模拟传统中医病因的造模方法，其操作简单、造模条件易控制、重复性好，但多数文献未报道模型的自然恢复时间，无法得知模型的稳定性。
24、文献4：羊燕群公开的《脾阳虚大鼠复合因素造模法研究》，该文献公开了复合因素造模法复制脾阳大鼠模型大部分症状基本符合脾阳虚证的证候学表现，特别是模型组大鼠尿d-木糖浓度降低、尿量增加是首次发现。但该模型自然恢复时间短，在实验方法学上仍需改进造模方法，使其所形成的模型更符合临床实际和研究需要。
25、文献5：羊燕群等人公开的《脾阳虚大鼠模型建立及理中汤疗效观察》；该本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于冰黄连水煎液形成脾阳虚证动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的造模动物为200g～210g的雄性SD大鼠，获得造模动物后，适应性饲养3天～7天。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中每天每次按照12ml/kg的剂量进行灌喂，灌喂时冰黄连水煎液的温度为4℃。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的寒冷环境为温度为-2℃～2℃的饲养环境，造模动物冷刺激过程中禁止饮水和进食，每个造模动物单独饲养；每次冷刺激的时间为60min。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述冰黄连水煎液的制备方法为：
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述冰黄连水煎液的制备方法为：
【技术特征摘要】
1.一种基于冰黄连水煎液形成脾阳虚证动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的造模动物为200g～210g的雄性sd大鼠，获得造模动物后，适应性饲养3天～7天。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中每天每次按照12ml/kg的剂量进行灌喂，灌喂时冰黄连水煎液的温度为4...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁野，韦婷，何靖柳，章斌，姚永秀，雷娇娇，刘雨欣，何静，
申请(专利权)人：雅安职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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