【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别是涉及一种基于氧化锰颗粒的黄曲霉毒素b1的检测方法。
技术介绍
1、真菌毒素是一类由真菌生长而产生的有毒次级代谢产物，它们主要是一些化学性质稳定且热稳定的小分子，难以被传统食品加工手段清除，容易通过受污染的粮食和饲料进入食物链，进而危害人和动物的健康。黄曲霉毒素b1(aflatoxin b1，afb1)是分布广、毒性强、危害大的一种典型真菌毒素，也是最强的致癌物之一，准确检测食物中的黄曲霉毒素b1污染情况对于食品安全至关重要。
2、目前，黄曲霉毒素b1的常规检测方法主要有：色谱法、毛细管电泳法、免疫法和质谱法等。这些方法往往具有需要大型仪器设备、样品前处理过程复杂或检测试剂毒性大等缺点，因此亟需建立一种简单、快速检测黄曲霉毒素b1的技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种基于氧化锰颗粒的黄曲霉毒素b1的检测方法，以解决上述现有技术存在的问题，该检测方法是一种简易的、适用条件广的通用型检测方法，并且具有灵敏度高和特异性强的优势。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种基于氧化锰颗粒的黄曲霉毒素b1的检测方法，包括以下步骤：
4、在包被黄曲霉毒素b1抗原的酶标板中加入待检样品液和黄曲霉毒素b1的识别元件，进行孵育后，再加入生物素-碱性磷酸酶进行抗原竞争结合反应；所述抗原竞争结合反应完成后，再加入l-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐后进行催化水解反应；所述催化水解反应结束后，再
5、所述识别元件具有生物素修饰；
6、所述氧化锰颗粒是利用kmno4和油酸反应而制备得到的；
7、所述标准曲线是利用不同浓度的黄曲霉毒素b1标准品溶液测定其对应的450nm处的吸光度值而构建得到。
8、进一步地，所述识别元件为特异性识别黄曲霉毒素b1的多克隆抗体、单克隆抗体或适配体。
9、进一步地，所述kmno4和油酸的质量体积比为0.5g：5ml。
10、进一步地，所述黄曲霉毒素b1抗原的包被浓度为2μg/ml。
11、进一步地，所述识别元件利用pbs稀释后再与所述待检样品液进行孵育，所述识别元件的稀释倍数为50倍。
12、进一步地，所述催化显色反应的时间为15min。
13、进一步地，所述氧化锰颗粒在所述催化显色反应的反应体系中的浓度为20g/ml。
14、本专利技术公开了以下技术效果：
15、本专利技术利用生物素标记的黄曲霉毒素b1纳米抗体结合链霉亲和素标记的碱性磷酸酶，基于间接竞争策略促进抗坏血酸的生成而抑制氧化锰类酶的催化活性建立了一种基于碱性磷酸酶-氧化锰颗粒级联催化的黄曲霉毒素b1的检测方法，该方法以生物素融合纳米抗体作为特异性识别元件，将链霉亲和素标记的碱性磷酸酶和氧化锰颗粒级联作为级联催化元件，通过控制碱性磷酸酶催化l-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐发生去磷酸化反应生成抗坏血酸，进而调控氧化锰类酶催化活性以及其催化的显色反应。
16、本专利技术通过实验优化了抗原抗体浓度、反应时间和氧化锰颗粒的用量，在最优条件下，所建立的方法能够检测5～20ng/ml浓度范围内的黄曲霉毒素b1，而其他真菌毒素对该方法的干扰性不显著。此外，在实际谷物样品检测实验中，玉米粉和小麦粉的黄曲霉毒素b1加标回收率分别在82.9％～91.4％和91.3％～110.9％，相对标准偏差分别小于14.9％和8.8％。同时，与标准方法液相色谱-质谱联用法进行了比对，检测结果显示玉米粉和小麦粉的黄曲霉毒素b1加标回收率分别在89.9％～95.7％和78.3％～95.2％，相对标准偏差(rsd)分别小于等于3.2％和4.6％。上述研究结果表明该比色分析方法在食品安全检测中具备一定的应用潜力。
17、本专利技术检测方法的碱性磷酸酶-氧化锰类酶级联催化显色反应是一种通用型信号放大手段，其对检测目标物的选择性来源于所用的纳米抗体，通过更换不同的纳米抗体或其他的识别元件(如多抗、单抗、适配体等)，该方法对其他种类的目标物也会有较好的靶标扩展性。
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1.一种基于氧化锰颗粒的黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述识别元件为特异性识别黄曲霉毒素B1的多克隆抗体、单克隆抗体或适配体。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述KMnO4和油酸的质量体积比为0.5g：5mL。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1抗原的包被浓度为2μg/mL。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述识别元件利用PBS稀释后再与所述待检样品液进行孵育，所述识别元件的稀释倍数为50倍。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述催化显色反应的时间为15min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述氧化锰颗粒在所述催化显色反应的反应体系中的浓度为20g/mL。
【技术特征摘要】
1.一种基于氧化锰颗粒的黄曲霉毒素b1的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述识别元件为特异性识别黄曲霉毒素b1的多克隆抗体、单克隆抗体或适配体。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述kmno4和油酸的质量体积比为0.5g：5ml。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述黄曲霉毒素b1抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：苗颖，邓瑞新，闫静坤，刘珊娜，张爱琳，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：
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