彩色马蹄莲微型种球大规模快繁方法技术

本发明专利技术涉及彩色马蹄莲微型种球工厂化大规模生产的快速繁殖方法，即首先对彩色马蹄莲进行试管苗快繁，然后进行种球诱导，从而逾越了移栽环节，使得本发明专利技术繁殖速度快，效益高，可进行大规模工厂化生产，同时，本发明专利技术所得的种球便于贮藏和运输，降低销售过程中的销售成本，种球移栽简单易行，便于推广种植。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及彩色马蹄莲微型种球的繁殖方法，特别是采用工厂化大规模生产的快速繁殖方法。近年来，试管成球技术研究越来越受到重视，但只有马铃薯试管成球技术在规模化生产上应用比较成功。我国目前已有8个单位从事马铃薯种球研究工作。美国、苏联、荷兰、比利时、法国等国都利用这种成球技术生产出大量高质量的试管种球，形成马铃薯微型薯产业，已获得了较高的经济效益。国内外与马铃薯微型薯有关的专利就有近百个，但球根花卉方面，有关种球诱导的专利相当少。而马蹄莲试管成球方面的专利还未见报道。彩色马蹄莲是近几年才兴起的新切花品种，在新西兰、荷兰等国，马蹄莲产业十分发达。传统的马蹄莲繁殖方法是分栽小球茎，这种方法繁殖速度相当慢，目前马蹄莲繁殖的主要方式是组培快繁试管苗，但这种方法费地、费工、费时，远距离运输也极为不便。本专利技术的目的是提供一种方法，能大规模快速低成本进行工厂化彩色马蹄莲微型种球的生产。本专利技术是这样实现的首先对彩色马蹄莲进行试管苗快繁，然后对试管苗进行微型种球诱导。试管苗决繁过程包括A.彩色马蹄莲外植体采集选择生长健壮无病虫害的植株，取其种球，刮去污染或损伤部位，切成0.1-1.5cm2大小芽块，然后流水冲洗。B.外植体消毒、接种消毒采取二次消毒法。第一次依次用75％酒精，0.1％新洁尔灭，0.1％升汞消毒，最后用无菌水冲洗；第二次消毒步骤不变，但时间稍缩短，最后用无菌水冲洗后接种，培养基为MS+BA0.1-10.0ppm+NAA0.01-5.0ppm。C.丛生芽的产生及试管苗继代在MS培养基上接种2-4个月后，产生丛生芽。将丛生芽分单芽转接，芽丛可每月继代1次。微型种球诱导过程包括A.试管诱导成球选择高2cm以上，茎粗0.2cm以上健壮试管苗作为微型种球生产的原材料，将试管苗接入含MS-BA0.1-10.0ppm+多效唑0.0-10.0ppm的液体培养基中，静置培养2-3月，即可形成5-15mm直径的微型种球。B.环境因子胁迫成球将茎粗0.2cm以上试管苗，直接移栽到营养钵中，缓苗20-30天。根据所处的季节选择高温诱导或是低温诱导。在5-10℃低温条件下或26-32℃高温条件下处理2-3月。幼苗的地上部分全部或部分枯萎后，即可将营养钵中的种球挖出进行贮藏。C.激素胁迫成球将茎粗0.2cm以上试管苗，直接移栽到营养钵中，缓苗20天-30天。在25±2℃环境条件下，ABA0.5-10.0ppm每周叶面喷施2次，持续2-3月直至幼苗地上部分全部或部分枯萎，即可将土钵中的种球挖出进行贮藏。上述试管苗快繁过程中，外植体最佳取样时间为4月或12月，培养基最佳配方为MS+BA0.5ppm+NAA0.2ppm，所需环境因子为温度25±2℃，每天光照8-14小时，其中12小时最佳，光照强度为4000LX以上。上述微型种球诱导过程中，试管诱导成球所需的培养基配方为MS+BA0.5ppm+多效唑6.0ppm，PH5.8。所需环境因子为温度28±2℃，适当暗培养，光照强度100-600LX，最佳为200-400LX。上述微型种球诱导过程中，环境胁迫成球所需的胁迫温度为低温胁迫所需最佳温度为5℃；高温胁迫所需最佳温度为29℃。上述微型种球诱导过程中，激素胁迫成球所需的最佳条件为ABA2.0ppm叶面喷施，每周2次。本专利技术首先对彩色马蹄莲进行试管苗快繁，然后进行种球诱导，从而逾越了移栽环节，既节省土地，又省去移栽和成球的田间管理，从而降低成本；本专利技术成球周期2-3月，如果进行周年生产，每年可进行4-6次，每瓶一次转8-12株苗，按90％结球率计算，则每瓶可年产40-60个球，一个占地约0.5平米的五层培养架可年产种球2-3万个，故本专利技术繁殖速度快，效益高，可进行大规模工厂化生产；本专利技术的种球便于储藏和运输，降低销售过程中的销售成本，种球移栽简单易行，便于推广种植；本专利技术种球诱导是在液体培养基中进行的，液体培养不需琼脂，故节省了开支，液体培养还比固体培养结球早，同样面积容纳植株数多，液体培养基还有配制容易、补加营养液方便等特点；本专利技术在简易组织培养条件下就可进行，操作简单，只需一般技术工人就可操作。下面结合实施例对本专利技术作进一步说明第一步彩色马蹄莲试管苗组培快繁体系的建立在4月初，在健壮苗上采集带芽的种球，用刀片刮去污染或损伤部位，切成0.1-1.5cm大小的带芽块，茎尖留0.2-0.5cm，流水冲洗3小时。消毒采取二次消毒法第一次用75％酒精3分钟，0.1％新洁尔灭7分钟，0.1％升汞3分钟，无菌水冲洗3遍。第二次消毒剂不变，但时间长短稍有调整。最后用无菌水冲洗5遍后接种。将消毒后的外植体接种在MS培养基上，培养基组分为1)MS+BA 0.1ppm+NAA0.05ppm，2)MS+BA 0.5ppm+NAA0.2ppm，3)MS+BA 2.0ppm+NAA1.0ppm，这三种培养基中，琼脂6.5g/l，蔗糖3％，PH5.8。每100ml三角瓶倒40ml培养基，每瓶接种5个外植体，外界环境因子为25±2℃，光照每日12小时(6000LX)。结果1号和3号培养基外植体接种6月后出现丛生芽，2号培养基4月后出现丛生芽。(说明2号培养基最适合彩色马蹄莲外植体分化)。将丛生小芽分单芽转接，每月继代1次。此期间必须有充足光照(4000LX)以避免试管苗徒长。此外，在培养基中加入2.0ppm多效唑，壮苗效果非常好，在弱光下也可使试管苗粗增长1倍。第二步微型种球的诱导1.试管诱导成球选择高2cm以上，茎粗0.2cm以上健壮试管苗，接种在液体培养基中，每瓶8-12株苗，确保每株试管苗都直立在液体培养基中。培养基组分为MS+BA0.5ppm+多效唑6.0ppm，蔗糖为6％，PH5.8。培养基液体和固体均可成球，但液体培养基成本低，且成球率和成球大小都明显优于固体培养基。将接种后的三角瓶移入温度28±2℃，适当暗培养条件下，即光照强度400LX，静置培养2周后就可以观察到试管苗茎基有膨大现象。2-3月后就可形成5-15mm直径的微型小球，成球率达90％以上。茎上部则由于养分回流而慢慢枯死。上述其他条件不变，BA浓度改变当BA为2.0ppm时，成球率86.5％； BA为3.0时，成球率为90.6％ppm；当BA为4.0ppm时，成球率为88.3％；当BA为5.0ppm时，成球率为86.5％。假设每培养瓶放10棵苗，按90％成活率，一周期可产9球，一个五层培养架(每层125×45cm2，可放133瓶)可放665瓶，则一个培养架1周期可产约6000个球，年产2-3万个球，且一个培养架只占地1.25×0.45＝0.56cm2。2.环境胁迫成球选择高2cm，茎粗0.2cm以上健壮试管苗，消毒处理后直接移栽到口径10cm的营养钵中，25±2℃条件下缓苗20天。缓苗期注意保持湿度。根据所处的季节选择高温诱导或是低温诱导。在5-10℃低温条件下或28-32℃高温条件下处理2-3个月。幼苗的地上部分完全枯萎后，将营养钵中的种球挖出进行贮藏。3.激素胁迫成球选择苗高2cm以上，茎粗0.2cm以上健壮试管苗，消毒处理后直接移栽到口径10cm的营养钵中，缓苗20天。25±2℃环境条件下，ABA2.0ppm每周叶面喷施2次，持续2-3个月至幼苗地上部分养分完全回流，将营养钵中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
彩色马蹄莲微型种球大规模快繁方法，其特征在于首先对彩色马蹄莲进行试管苗快繁，然后对试管苗进行微型种球诱导。

【技术特征摘要】
1.彩色马蹄莲微型种球大规模快繁方法，其特征在于首先对彩色马蹄莲进行试管苗快繁，然后对试管苗进行微型种球诱导。2.根据权利要求1所述的彩色马蹄莲微型种球大规模快繁方法，其特征在于所述的试管苗快繁过程包括A.彩色马蹄莲外植体采集选择生长健壮无病虫害的植株，取其种球，刮去污染或损伤部位，切成0.1-1.5cm2大小芽块，然后流水冲洗。B.外植体消毒、接种消毒采取二次消毒法。第一次依次用75％酒精，0.1％新洁尔灭，0.1％升汞消毒，最后用无菌水冲洗；第二次消毒步骤不变，但时间稍缩短，最后用无菌水冲洗后接种，培养基为MS+BA0.1-10.0ppm+NAA0.01-5.0ppm。C.丛生芽的产生及试管苗继代在MS培养基上接种2-4个月后，产生丛生芽。将丛生芽分单芽转接，芽丛可每月继代1次。3.根据权利要求1所述的彩色马蹄莲微型种球大规模快繁方法，其特征在于所述的微型种球诱导过程为试管诱导成球过程选择高2cm以上，茎粗0.2cm以上健壮试管苗作为微型种球生产的原材料，将试管苗接入含MS-BA0.1-10.0ppm+多效唑0.0-10.0ppm的液体培养基中，静置培养2-3月，即可形成5-15mm直径的微型种球。4.根据权利要求1所述的彩色马蹄莲微型种球大规模快繁方法，其特征在于所述的微型种球诱导过程为环境因子胁迫成球过程将茎粗0.2cm以上试管苗，直接移栽到营养钵中，缓苗20-30天。根据所处的季节选择高温诱导或是低温诱导。在5-10℃低温条件下或26-32℃高温条件下处理2-3月。幼苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣旗，张天琪，王玉忠，林翔鹰，
申请(专利权)人：北京锦绣大地农业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]