【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物样品保存和检测，具体涉及一种粪便样本采集和保存试剂盒。
技术介绍
1、短链脂肪酸(short-chain fatty acids,scfas)是含有1～5个碳原子的脂肪酸，现也有将含有6个碳原子的脂肪酸(己酸)归入scfas，主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸等。动物体或人体的短链脂肪酸主要来源于膳食纤维和不可以消化糖的发酵。人体内的scfas主要生成部位是结肠。scfas也是肠道微生物发酵产生的最重要的终产物之一。结肠中产生的scfas分为两种类型：直链(如甲酸、乙酸和丙酸)和支链scfas(如异丁酸和异戊酸)。作为关键信号分子，scfas与许多疾病的改善或恶化有关，包括免疫缺陷、结直肠癌、糖尿病和心血管疾病。粪便scfas常被用作生物标志物，对医学诊断和治疗的合理发展至关重要。
2、粪便成分复杂，如含有大量肠道微生物、活性酶等，致使常温下其中的scfas含量是不稳定的。在量化粪便中的scfas之前，如何正确的对粪便进行保存更为重要。目前粪便收集方法主要包括取样后立即液氮冷冻、粪便管收集、粪便收集卡等。在科学研究中，大部分的粪便样本采取，取样后立即冷冻，然后干冰寄送到公司检测。在临床检测试剂盒的使用过程中，立即冷冻对客户来说，条件较为苛刻，因此采用最简单的取样方式以及取样完成后常温寄送，实现量化，并且不影响scfas检测结果的准确可控尤为重要。
3、此外，现有的scfas的检测方法多需要进行衍生化，操作复杂，且需要使用酸、衍生剂等有害试剂，需要更简便、快速，能应用于临
技术实现思路
1、在收集临床粪便样本进行短链脂肪酸的检测过程中，我们发现粪便样本在室温放置较短时间后(如室温放置24h)，与0小时相比，短链脂肪酸的检测结果也会存在显著差异(含量变化超过15％)。为了提高粪便样本的稳定性，我们参考专利技术专利“cn115486439a粪便保存方法、乙醇在制备粪便保存液及短链脂肪酸检测试剂或试剂盒中的应用”的方法使用乙醇水溶液对粪便样本进行保存，发现该方法能提高粪便样本的稳定性，但是稳定性结果并不理想，特别是其中己酸的稳定性不满足稳定性时间要求。
2、针对上述问题，首先，本专利技术提供了一种粪便样本的保存方法，该方法包括：将待保存的粪便样本与保存液混合，所述保存液包括乙醇水溶液，所述乙醇水溶液为碱性。
3、在一些实施方式中，所述乙醇水溶液为50％～90％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为50％～75％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为70％～75％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为75％乙醇水溶液。
4、在一些实施方式中，所述乙醇水溶液的ph值为8及以上；优选地，ph值为8～11；优选地，ph值为8～10；优选地，ph值为8。
5、在一些实施方式中，所述内标为短链脂肪酸检测用内标。
6、优选地，所述内标包括异己酸。
7、优选地，所述内标包括短链脂肪酸的同位素内标。
8、在一些实施方式中，所述短链脂肪酸包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸中的一种或多种。
9、优选地，所述短链脂肪酸包括己酸。
10、在一些实施方式中，所述粪便样本与乙醇水溶液的重量体积比为50mg:0.5ml～2.0ml。
11、优选地，所述粪便样本与保存液的重量体积比为50mg:1.0ml～2.0ml。
12、优选地，所述粪便样本与保存液的重量体积比为50mg:1.0ml～1.5ml。
13、优选地，所述粪便样本与保存液的重量体积比为50mg:1.5ml。
14、在一些实施方式中，所述方法还包括：将粪便样本与保存液的混合体系置于密封环境中保存；优选地，保存温度为室温及以下。
15、第二方面，本专利技术提供了一种粪便样本中短链脂肪酸的检测方法，所述方法用于检测上所述粪便样本中短链脂肪酸的含量。
16、在一些实施方式中，所述方法包括：
17、步骤一：将待保存的粪便样本与保存液混合后或取保存一段时间后地粪便样本及保存液，研磨和/或超声提取，得提取液；
18、步骤二：用酸水溶液对提取液进行稀释；
19、步骤三：用有机溶剂对步骤二稀释后的溶液进行萃取，分层后取有机层；
20、步骤四：取步骤三的有机层进行短链脂肪酸的检测。
21、在一些实施方式中，步骤三中有机溶剂包括甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种。
22、优选地，所述有机溶剂包括甲基叔丁基醚。
23、在一些实施方式中，步骤一中所述保存液为75％乙醇水溶液。
24、在一些实施方式中，步骤二和步骤三中的提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20:5～30:40～80(200μl:50μl～300μl:400μl～800μl)。
25、优选地，提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20:10～30:60～80(200μl:100μl～300μl:600μl～800μl)。
26、优选地，提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20:10:60～70(200μl:100μl:600μl～700μl)。
27、在一些实施方式中，所述酸水溶液为盐酸、硫酸或磷酸中一种或多种的酸的水溶液；优选地，所述酸水溶液为盐酸水溶液。
28、在一些实施方式中，步骤四用gc-ms进行短链脂肪酸的检测。
29、优选地，gc-ms的gc条件包括：使用hp-innowax，30m×0.25mm×0.25μm色谱柱，程序升温程序包括：初始温度90℃，保持0min；然后以30℃/min的速率升温至130℃，保持0min；以5℃/min的速率升温至150℃，保持0min；以25℃/min的速率升温至230℃，保持0min；进样口温度：250℃；
30、优选地，gc-ms的ms条件包括：使用ei电离源，电离能量为70ev，采样sim模式；
31、优选地，乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸的定量离子分别为60、70、72、60、60、60、60；乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸的同位素内标的定量离子分别为63、77、76、63、63、63、63。
32、第三方面，本专利技术提供了一种粪便样本短链脂肪酸的检测试剂盒，该试剂盒包括：保存液、稀释剂、萃取试剂。
33、所述保存液用于保存和提取粪便样本，所述保存液包括碱性乙醇水溶液。这里的保存液即时保存试剂也是提取试剂。
34、所述稀释剂包括酸水溶液，酸水溶液用于酸化以及稀释保存液。
35、所述萃取试剂为有机试剂，优选地，所述有机试剂为甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种，萃取试剂用于将稀释剂酸化和稀释后的保存液中的短链脂肪酸提取出来。
36、在一些实施方式中，所述碱性乙醇水溶液、酸水溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种粪便样本采集和保存试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括保存液，所述保存液包括乙醇水溶液，所述乙醇水溶液为碱性。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乙醇水溶液为50％～90％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为50％～75％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为70％～75％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为75％乙醇水溶液。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乙醇水溶液的pH值为8及以上；优选地，pH值为8～11；优选地，pH值为8～10；优选地，pH值为8。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述保存液包括短链脂肪酸检测用内标；
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述短链脂肪酸包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸中的一种或多种。
6.如权利要求1-5之一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括保存装置，所述保存装置包括：保存腔，用于放置样本和/或保存液；优选地，所述保存腔包括第一开口端，样本和/或保存液通过该第一开口端进入保存腔中。
7.如权利要求6
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述保存装置还包括：密封件，用于密封第一开口端，该密封件位于第一开口端和第一密封盖体之间。
9.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述保存装置还包括检漏元件，使用所述第一密封盖体密封所述第一开口端时，所述检漏元件位于两者的封口处，用于检测是否存在样本和/或保存液泄露；
10.如权利要求6-9之一所述的试剂盒，其特征在于，所述保存装置还包括储液腔，该储液腔用于盛放储存液且所述保存腔位于所述储液腔内部；所述储液腔包括第二开口端，储存液通过该第二开口端进入储液腔；
11.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括粪便采集装置，所述采集装置包括采样杆，该采样杆的一端设置有采样头，所述采样头用于采集粪便样本。
12.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述采样头的另一端为第二密封盖体，所述第二密封盖体能密封所述第一开口端。
...【技术特征摘要】
1.一种粪便样本采集和保存试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括保存液，所述保存液包括乙醇水溶液，所述乙醇水溶液为碱性。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乙醇水溶液为50％～90％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为50％～75％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为70％～75％乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为75％乙醇水溶液。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乙醇水溶液的ph值为8及以上；优选地，ph值为8～11；优选地，ph值为8～10；优选地，ph值为8。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述保存液包括短链脂肪酸检测用内标；
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述短链脂肪酸包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸中的一种或多种。
6.如权利要求1-5之一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括保存装置，所述保存装置包括：保存腔，用于放置样本和/或保存液；优选地，所述保存腔包括第一开口端，样本和/或保存液通过该第一开口端进入保存腔中。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：王三锦，徐英，徐斌，任建洪，
申请(专利权)人：苏州帕诺米克生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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