酮还原酶多肽及多核苷酸制造技术

本申请涉及酮还原酶多肽及多核苷酸。本发明专利技术提供了与天然存在的野生型酮还原酶和亚磷酸脱氢酶相比具有改进的特性的工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶、以及编码工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶的多核苷酸、能够表达工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶的宿主细胞、以及使用工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶来合成用于抗病毒化合物诸如核苷抑制剂的合成的手性催化剂的方法。本发明专利技术还提供了使用工程化酶在一锅多酶系统中使手性醇去外消旋化的方法。

【技术实现步骤摘要】

专利
本专利技术提供了与天然存在的野生型酮还原酶和亚磷酸脱氢酶(phosphitedehydrogenase)相比具有改进的特性的工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶、以及编码工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶的多核苷酸、能够表达工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶的宿主细胞、以及使用工程化酮还原酶和亚磷酸脱氢酶来合成用于抗病毒化合物诸如核苷抑制剂的合成的手性催化剂的方法。本专利技术还提供了使用工程化酶在一锅多酶系统(one-pot,multi-enzyme system)中使手性醇去外消旋化(deracemize)的方法。

技术介绍

0、背景

1、属于酮还原酶(kred)或羰基还原酶类(ec1.1.1.184)的酶可用于从对应的前手性酮底物并通过对应的外消旋醛底物的立体选择性还原合成光学活性醇。kred通常将酮底物和醛底物转化为对应的醇产物，但是也可以催化逆反应，将醇底物氧化为对应的酮/醛产物。酶诸如kred对酮和醛的还原以及对醇的氧化需要辅因子，最常见的是还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nadh)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadph)，以及用于氧化反应本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体与SEQ ID NO:2具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性。

2.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体与SEQ IDNO:2具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且在选自以下位置中的一个或更多个位置处具有至少一个取代或取代集：37、37/211、37/211/229、37/229、45、52、52/57/110/272/296、52/57/272、...

【技术特征摘要】

1.一种工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体与seq id no:2具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性。

2.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体与seq idno:2具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且在选自以下位置中的一个或更多个位置处具有至少一个取代或取代集：37、37/211、37/211/229、37/229、45、52、52/57/110/272/296、52/57/272、52/57/272/274/279/296、52/57/272/279/296、55/57/276、56、57、57/104/114、57/104/114/229、57/286、79/83/275/276、83、83/275/276、83/276、104、110、114、138/146/258/289、211、211/229、228、229、263、268、272、274、275/276、276、279和309，其中所述位置根据seq id no:2来编号。

3.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体包含含有与seq id no:2具有至少90％序列同一性的序列的多肽序列。

4.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体包含含有与seq id no:2具有至少95％序列同一性的序列的多肽序列。

5.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体包含seq idno:2中列出的多肽序列。

6.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，其中所述工程化酮还原酶变体包含编码表5.1中提供的变体的多肽序列。

7.根据权利要求1所述的工程化酮还原酶变体，其中所述工程化酮还原酶变体包含选自seq id no:4至seq id no:110中列出的偶数编号的序列的多肽序列。

8.一种工程化多核苷酸序列，所述工程化多核苷酸序列编码权利要求1所述的工程化酮还原酶变体。

9.根据权利要求8所述的工程化多核苷酸序列，其中所述工程化多核苷酸序列包含与选自seq id no:3至seq id no:109中列出的奇数编号的序列的序列至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多相同的多核苷酸序列。

10.一种载体，所述载体包含权利要求8所述的工程化多核苷酸序列。

11.根据权利要求10所述的载体，所述载体还包含至少一种控制序列。

12.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求10所述的载体。

13.一种用于产生权利要求1所述的工程化酮还原酶变体的方法，所述方法包括在宿主细胞藉以产生所述工程化酮还原酶变体的条件下培养所述宿主细胞。

14.根据权利要求13所述的方法，所述方法还包括回收由所述宿主细胞产生的所述工程化酮还原酶变体的步骤。

15.一种组合物，所述组合物包含至少一种权利要求1中提供的工程化酮还原酶变体。

16.一种工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体与seq id no:112和/或138具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性。

17.一种工程化酮还原酶变体，所述工程化酮还原酶变体与seq id no:112具有至少85％、90％、91％、92％...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰弗里·C·穆尔，杰克·梁，乔纳森·彭菲尔德，约瓦娜·纳佐尔，尼基·德拉斯，韦丝娜·米切尔，段达，伊曼·法拉萨特，阿古斯蒂纳·罗德里格斯格拉尼利奥，格兰特·墨菲，尼古拉斯·马歇尔，
申请(专利权)人：科德克希思公司，
类型：发明
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