基于RPA-CRISPR/Cas12a检测刚地弓形虫的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测刚地弓形虫的试剂盒及检测方法，属于病原检测技术领域。本发明专利技术提供了基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测刚地弓形虫的B1位点的靶点序列，所述靶点序列为刚地弓形虫的B1基因位点MH744807（反向互补链）的第334 bp～第357 bp位点的核苷酸序列；所述第334 bp～第357 bp位点的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。同时本发明专利技术还提供了基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测刚地弓形虫试剂盒，试剂盒为权利要求2所述上下游引物对及RPA扩增体系的TwistAmp<supgt;TM</supgt; Basic Kit试剂盒及试剂，权利要求3所述的crRNA及CRISPR/Cas12a荧光检测反应体系的试剂及CRISPR/Cas12a试纸条检测反应体系的试剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病原检测。更具体地，涉及基于crispr/cas12a快速精准检测刚地弓形虫的试剂盒及检测方法。

技术介绍

1、常见的刚地弓形虫检测技术有：

2、1、显微镜检查法：该方法通过检查患者体液或者组织中的弓形虫形态来诊断弓形虫病，常用的显微镜检查方法包括血液涂片检查、淋巴液活检和脑脊液检查等，这些方法需要专业的技术人员，耗时耗力，且敏感性较低。

3、2、血清学检查法：血清学检验是弓形虫病诊断的主要方法之一，目前常用的一些血清学检测方法存在一些缺点，elisa检测方法是国内外学者以及实验室检测弓形虫抗体最常用的方法，该种方法对于急性病例检出率较高，但类风湿因子阳性者易出现假阳性反应；染色试验(dye test，dt)需要用到活虫，操作人员有感染风险；间接荧光抗体试验（ifat）如有类风湿因子、抗核抗体阳性时，可引起假阳性反应；间接血凝试验（iha）重复性差和致敏红细胞不稳定；mat反应时需要大量的速殖子，反应时间长等，这些不足限制了其在基层大规模的使用。而且，免疫学现有技术的灵敏度也普遍低于核酸分子检测方法。

4、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于RPA-CRISPR/Cas12a检测刚地弓形虫的B1位点的靶点序列，其特征在于，所述靶点序列为刚地弓形虫的B1基因位点MH744807（反向互补链）的第 334 bp～第 357 bp位点的核苷酸序列；所述第 334 bp～第 357 bp位点的核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示。

2.基于RPA-CRISPR/Cas12a检测扩增DNA的上下游引物对，其特征在于，所述刚地弓形虫的第一组上游引物F104-133的核苷酸序列为SEQ ID NO:2、对应下游引物R304-335为SEQID NO:3、第二组上游引物F101-132的核苷酸序列为SEQ ID NO...

【技术特征摘要】

1.基于rpa-crispr/cas12a检测刚地弓形虫的b1位点的靶点序列，其特征在于，所述靶点序列为刚地弓形虫的b1基因位点mh744807（反向互补链）的第 334 bp～第 357 bp位点的核苷酸序列；所述第 334 bp～第 357 bp位点的核苷酸序列如seq id no：1 所示。

2.基于rpa-crispr/cas12a检测扩增dna的上下游引物对，其特征在于，所述刚地弓形虫的第一组上游引物f104-133的核苷酸序列为seq id no:2、对应下游引物r304-335为seqid no:3、第二组上游引物f101-132的核苷酸序列为seq id no:4、对应下游引物r297-328为seq id no:5、第三组上游引物f105-134的核苷酸序列为seq id no:6、对应下游引物r357-386为seq id no:7、第四组上游引物f91-120的核苷酸序列为seq id no:8、对应下游引物r354-385为seq id no:9、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张龙现，王艺林，杨玉荣，毋亚运，李俊强，张恒，秦子扬，赵金凤，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：