【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞生物学，尤其涉及nk细胞在制备治疗免疫相关病症的药物中的用途。
技术介绍
1、nk(自然杀伤)细胞是一类重要的先天性淋巴细胞，在机体的免疫监视和抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用。nk细胞能够直接识别细胞表面异常的分子信号，并释放穿孔素等细胞毒分子杀伤这些异常细胞，包括肿瘤细胞、病毒感染细胞等，显示出强大的抗肿瘤和抗病毒活性。
2、由于nk细胞的这些独特功能，利用nk细胞进行免疫治疗已成为热门领域。目前，nk细胞常见的使用策略是从患者体内采集nk细胞，然后体外扩增后，将nk细胞回输给患者，从而使nk细胞充当抗肿瘤的生物导弹，从而直接攻击残留的肿瘤细胞。这种自体nk细胞回输疗法已被证实可以增强肿瘤患者的免疫力，提高肿瘤的响应率。
3、尽管nk细胞免疫治疗显示出巨大应用潜力，然而，现有的nk细胞回输疗法存在着扩增效率低和杀伤能力差的问题，因此需要进一步解决上述问题来提高nk细胞在免疫相关病症中的应用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高细胞杀伤活性和高增殖能力的nk细胞，从而将其制备成高效的免疫相关病症的治疗药物。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种具有高杀伤活性和高增殖能力的nk细胞，所述nk细胞按照如下的培养方法培养得到：
4、(1)配置含有地衣多糖和天蚕素a的nk细胞培养基；
5、(2)使用nk细胞培养基将外周血单个核细胞重悬为细胞
6、(3)将细胞悬液接种到cd16包被的培养瓶中；
7、(4)置于37℃，5％ co2的细胞培养箱中进行培养，每3天补充nk细胞培养基，培养至13天，收集纯化，得到具有高杀伤活性和高增殖能力的nk细胞。
8、优选地，所述nk细胞培养基的成分为：250iu/ml il-2，20ng/ml il-12，10％自体血清，gt-t551 h3无血清培养基，75μg/ml地衣多糖，75μg/ml天蚕素a；
9、或250iu/ml il-2，20ng/ml il-12，10％自体血清，gt-t551 h3无血清培养基，100μg/ml地衣多糖，50μg/ml天蚕素a；
10、所述细胞悬液的细胞含量为2.5×106/ml；
11、所述培养瓶的cd16包被浓度为10ng/ml。
12、第二方面，本专利技术提供了一种具有免疫增强作用的药物，所述药物由nk细胞和药学上可接受的载体组成；
13、所述nk细胞由如下的培养方法如下：
14、(1)按照如下配方配置nk细胞培养基：250iu/ml il-2，20ng/ml il-12，100μg/ml地衣多糖，50μg/ml天蚕素a，10％自体血清，gt-t551 h3无血清培养基；
15、(2)使用nk细胞培养基将外周血单个核细胞重悬为2.5×106/ml的细胞悬液；
16、(3)将每10ml的细胞悬液接种到10ng/ml cd16包被的培养瓶中；
17、(4)置于37℃，5％ co2的细胞培养箱中进行培养，每3天补充nk细胞培养基，培养至13天，收集纯化，得到nk细胞。
18、第三方面，本专利技术提供了一种培养高杀伤活性和高增殖能力的nk细胞的培养方法，所述nk细胞的培养方法如上述nk细胞的培养方法所示。
19、第四方面，本专利技术提供了一种用于提高nk细胞杀伤活性和nk细胞增殖能力的培养基，所述培养基按照如下配方配置：
20、250iu/ml il-2，20ng/ml il-12，100μg/ml地衣多糖，50μg/ml天蚕素a，10％自体血清，gt-t551 h3无血清培养基。
21、第五方面，本专利技术提供了一种组合物在制备提高nk细胞杀伤活性的培养基中的应用，所述组合物由地衣多糖和天蚕素a组成，所述地衣多糖和天蚕素a的质量比例为2:1或1:1。
22、优选地，每1ml所述组合物中，地衣多糖和天蚕素a的含量为100μg和50μg，或75μg和75μg。
23、优选地，所述nk细胞杀伤活性为nk细胞对于肺癌细胞的杀伤活性。
24、第六方面，本专利技术提供了一种组合物在制备提高nk细胞增殖能力的培养基中的应用，所述组合物由地衣多糖和天蚕素a组成，所述地衣多糖和天蚕素a的质量比例为2:1或1:1。
25、优先地，每1ml所述组合物中，地衣多糖和天蚕素a的含量为100μg和50μg，或75μg和75μg。
26、第七方面，本专利技术提供了一种组合物在制备提高nk细胞穿孔素蛋白表达的培养基中的应用，所述组合物由地衣多糖和天蚕素a组成，所述地衣多糖和天蚕素a的质量比例为2:1或1:1。
27、优先地，每1ml所述组合物中，地衣多糖和天蚕素a的含量为100μg和50μg，或75μg和75μg。
28、本专利技术的有益效果在于：
29、本专利技术将地衣多糖和天蚕素a联合使用培养nk细胞，其能够显著提高nk细胞中穿孔素的表达，增强nk细胞的杀伤活性。实验检测结果显示，相较于单独使用地衣多糖或天蚕素a，联合使用两者培养的nk细胞对于肺癌细胞的杀伤率提高了58.49％；
30、其次，地衣多糖和天蚕素a的联用还可以显著促进nk细胞的增殖能力，实验检测结果显示，联合实验二者培养的nk细胞的增殖率提高了86.23％，明显高于单独使用二者培养的nk细胞；
31、因此，本专利技术为nk细胞的免疫治疗提供了更优异的细胞源，后续可以将地衣多糖和天蚕素a联合培养处理的nk细胞制备成免疫药物，用于有效治疗肿瘤等免疫相关疾病，提高nk细胞的免疫治疗效果。
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1.一种具有高杀伤活性和高增殖能力的NK细胞，其特征在于，所述NK细胞按照如下的培养方法培养得到：
2.根据权利要求1所述的NK细胞，其特征在于，所述NK细胞培养基的成分为：250IU/mLIL-2，20ng/mL IL-12，10％自体血清，GT-T551 H3无血清培养基，75μg/mL地衣多糖，75μg/mL天蚕素A；
3.一种具有免疫增强作用的药物，其特征在于，所述药物由NK细胞和药学上可接受的载体组成；
4.一种培养高杀伤活性和高增殖能力的NK细胞的培养方法，其特征在于，所述NK细胞的培养方法如权利要求3所述的培养方法所示。
5.一种用于提高NK细胞杀伤活性和NK细胞增殖能力的培养基，其特征在于，所述培养基按照如下配方配置：
6.一种组合物在制备提高NK细胞杀伤活性的培养基中的应用，其特征在于，所述组合物由地衣多糖和天蚕素A组成，所述地衣多糖和天蚕素A的质量比例为2:1或1:1。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，每1mL所述组合物中，地衣多糖和天蚕素A的含量为100μg和50μg，或75μ
8.根据权利要求7所述的应用，所述NK细胞杀伤活性为NK细胞对于肺癌细胞的杀伤活性。
9.一种组合物在制备提高NK细胞增殖能力的培养基中的应用，其特征在于，所述组合物由地衣多糖和天蚕素A组成，所述地衣多糖和天蚕素A的质量比例为2:1或1:1。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，每1mL所述组合物中，地衣多糖和天蚕素A的含量为100μg和50μg，或75μg和75μg。
...【技术特征摘要】
1.一种具有高杀伤活性和高增殖能力的nk细胞，其特征在于，所述nk细胞按照如下的培养方法培养得到：
2.根据权利要求1所述的nk细胞，其特征在于，所述nk细胞培养基的成分为：250iu/mlil-2，20ng/ml il-12，10％自体血清，gt-t551 h3无血清培养基，75μg/ml地衣多糖，75μg/ml天蚕素a；
3.一种具有免疫增强作用的药物，其特征在于，所述药物由nk细胞和药学上可接受的载体组成；
4.一种培养高杀伤活性和高增殖能力的nk细胞的培养方法，其特征在于，所述nk细胞的培养方法如权利要求3所述的培养方法所示。
5.一种用于提高nk细胞杀伤活性和nk细胞增殖能力的培养基，其特征在于，所述培养基按照如下配方配置：
6.一种组...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈晓延，曲青梅，相爱玲，
申请(专利权)人：青岛西凯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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