【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水产选育，具体涉及一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法。
技术介绍
1、牡蛎(ostreidae)俗称海蛎子、蚝等，隶属软体动物门。双壳纲，牡蛎目，牡蛎科下的物种统称牡蛎。牡蛎是世界第一大养殖贝类，是人类可利用的重要海洋生物资源之一，为全球性分布种类。牡蛎的种类很多，其中具有商业价值的牡蛎大约有20种，可供人食用的牡蛎品种通常都来自牡蛎属(ostrea)和巨牡蛎属(crassostrea)。
2、巨牡蛎属包括福建牡蛎、长牡蛎、近江牡蛎、熊本牡蛎、香港牡蛎等；其中香港牡蛎原称“近江牡蛎”，是我国广东和广西沿海常见的养殖贝类，也是我国牡蛎养殖的三大主导品种之一，年产量185万吨，占全国牡蛎总产量的31.87％(中国渔业年鉴，2022)，产值170多亿元。其口味鲜甜、肉质脆嫩，深受消费者喜爱，已形成“钦州大蚝”、“北海生蚝”、“湛江生蚝”等原产地理标志。
3、家系育种是经典的动物育种方法，牡蛎由于具有坚硬的外壳，在构建家系的过程中，需要撬开贝壳，获取精子或卵子。在撬开贝壳的过程中，牡蛎亲本被杀死，意味着优良性状传递给下一代只有这一次机会。但牡蛎幼虫规格小(60-70μm)，其培育周期长，培育过程幼虫损失多，常会出现幼虫死亡率达100％。因此导致亲本的优良性状无法有效获得并遗传给下一代。
4、牡蛎怀卵量大，一只10cm的牡蛎怀卵量可达2000万粒，但是在育种过程中，构建1个家系仅需50-100万粒受精率，不需要获取整个牡蛎的性腺组织。鉴于此，本专利技术提供一种保持牡蛎亲本活力的育种家系
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何实现活体条件下取精卵，继续保存亲本在恢复后亲本可进行多次繁育；目的是提供一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，包括如下步骤：
3、(1)亲本一次处理：将性腺成熟的牡蛎放置在湿润环境中，连续放置时间为12-48小时，得到一次处理的亲本；
4、(2)亲本二次处理：将所述一次处理的亲本浸入盐度低于35的盐水中，直到所述一次处理的亲本的闭壳肌放松；得到二次处理的亲本；
5、(3)精卵获取：在所述二次处理的亲本，闭壳肌放松，贝壳微微张开(0.2-0.3cm)，且存活的情况下，吸取所述二次处理的亲本的性腺中的性腺浆液，获得牡蛎的精子、牡蛎的卵子和三次处理的亲本；
6、(4)人工受精：对所述牡蛎的精子和所述牡蛎的卵子进行激活处理，后进行雌雄个体单对单的交配，构建家系。
7、其中，性腺成熟的牡蛎筛选的方法为：在促熟车间或海区，通过随机取样，检查3-5个亲本的性腺发育程度，当发现性腺饱满，且性腺表面有明显纹路，表明牡蛎性腺成熟，此时可开展繁育。
8、闭壳肌放松的典型的状态为：贝壳微微张开0.2-0.3cm，外套膜舒展，且保持柔软；此与死亡个体的区别在于死亡个体外套膜缩紧僵硬，面积变小。
9、需要说明的是：本专利技术可用但不局限于香港牡蛎，在针对不同牡蛎，适当调整处理条件后，也可用于福建牡蛎、长牡蛎、近江牡蛎及熊本牡蛎等巨蛎属牡蛎的家系构建。
10、本专利技术的有益效果是：本专利技术建立了使牡蛎闭壳肌放松、活体取精卵及亲本多次利用的方法，能够在保存亲本生活力的条件下，获得精子及卵子，并成功构建家系，实现活体条件下继续保存亲本，在恢复后亲本可进行多次繁育。
11、在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
12、进一步，步骤(1)中所述湿润环境的温度为25-27℃，湿度为85-95；步骤(2)中，所述盐水的盐度为10-30，温度为29-31℃，所述二次处理的亲本在所述盐水中的密度为1-2个/l。
13、采用上述进一步方案的有益效果是：在上述的条件下牡蛎放松比例和恢复后的存活率较高。
14、进一步，步骤(1)中连续放置时间为24-36小时；步骤(2)中，将所述一次处理的亲本浸入盐水中的时间至少为30分钟。
15、进一步，步骤(2)中的盐水为用mgc l2配制的盐水。氯化镁调整的盐度为10-30，最佳盐度为20。
16、其中，含有mgcl2的盐水的配制方法具体为：在容器内加20l曝气后的淡水(含盐量小于0.5g/l的水)，缓慢加入mgcl2颗粒，边加边搅拌，同时用盐度计(例如折光仪)测量盐度，调整溶液盐度所需的盐度，例如盐度为20。
17、进一步，步骤(3)中，吸取过程为：采用注射器插入所述二次处理的亲本的闭壳肌下部的性腺凸起处，吸取所述二次处理的亲本的性腺浆液300-500μl(约60-100万粒卵子)。步骤(3)吸取过程中，插入所述二次处理的亲本的闭壳肌下部的性腺凸起处的深度约2-3mm。例如，可以采用5ml无菌注射器，每个个体单独吸取，不同个体更换新的注射器。
18、进一步，步骤(4)中，激活处理的具体的过程为：将所述牡蛎的精子、所述牡蛎的卵子分别在盐度为18-20的海水进行激活。
19、进一步，所述海水的温度为29-31℃，卵子激活的时间为30-40分钟，精子激活时间5-10分钟。
20、具体的激活过程为：提前配制盐度为18-20的海水，分装至若干1l烧杯中；将每个注射器吸取的性腺浆液单独溶解于烧杯中激活配子，每个烧杯单独取样用显微镜检查，鉴别雌雄后分别编号。卵子激活约30-40min，期间当观察到90％以上卵子吸水变成圆形时，可进行人工授精。按照制定的选育目标及家系交配表开展人工授精及子代培育。
21、进一步，步骤(3)中，对获得的所述三次处理的亲本进行消毒，后进行促熟处理，促熟后的所述三次处理的亲本再次依次进行步骤(1)至(3)。
22、进一步，对所述三次处理的亲本进行消毒的方法为采用高锰酸钾海水溶液进行消毒，促熟处理具体为在盐度为15-20的海水进行。
23、具体的，吸取后将牡蛎浸泡于20mg/l高锰酸钾海水溶液中消毒5min；将消毒好的牡蛎冲洗干净后，置于池塘或亲本促熟池内恢复15天，恢复期间，池塘内盐度为15-20，池塘内饵料生物以硅藻类为主。如在亲本促熟池内恢复，投喂混合饵料，角毛藻及扁藻，盐度为15。恢复15天后，亲本可按照步骤2-5处理，重复开展家系构建。
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1.一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述湿润环境的温度为25-27℃，湿度为85-95；步骤(2)中，所述盐水的盐度为10-30，温度为29-31℃，所述二次处理的亲本在所述盐水中的密度为1-2个/L。
3.根据权利要求2所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(1)中连续放置时间为24-36小时；步骤(2)中，将所述一次处理的亲本浸入盐水中的时间至少为30分钟。
4.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(2)中的盐水为用MgCl2配制的盐水。
5.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(3)中，吸取过程为：采用注射器插入所述二次处理的亲本的闭壳肌下部的性腺凸起处，吸取所述二次处理的亲本的性腺浆液300-500μL。
6.根据权利要求5所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(3)吸取过程
7.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(4)中，激活处理的具体的过程为：将所述牡蛎的精子、所述牡蛎的卵子分别在盐度为18-20的海水进行激活。
8.根据权利要求7所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，所述海水的温度为29-31℃，卵子激活的时间为30-40分钟，精子激活时间5-10分钟。
9.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(3)中，对获得的所述三次处理的亲本进行消毒，后进行促熟处理，促熟后的所述三次处理的亲本再次依次进行步骤(1)至(3)。
10.根据权利要求9所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，对所述三次处理的亲本进行消毒的方法为采用高锰酸钾海水溶液进行消毒，促熟处理具体为在盐度为15-20的海水进行。
...【技术特征摘要】
1.一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述湿润环境的温度为25-27℃，湿度为85-95；步骤(2)中，所述盐水的盐度为10-30，温度为29-31℃，所述二次处理的亲本在所述盐水中的密度为1-2个/l。
3.根据权利要求2所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(1)中连续放置时间为24-36小时；步骤(2)中，将所述一次处理的亲本浸入盐水中的时间至少为30分钟。
4.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(2)中的盐水为用mgcl2配制的盐水。
5.根据权利要求1所述一种保持牡蛎亲本活力的育种家系构建方法，其特征在于，步骤(3)中，吸取过程为：采用注射器插入所述二次处理的亲本的闭壳肌下部的性腺凸起处，吸取所述二次处理的亲本的性腺浆液300-500μl。
6.根据权利要求5所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：张兴志，彭金霞，白科，官俊良，韦嫔媛，何苹萍，张立，陈泳先，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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