【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外检测，尤其涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒及其非诊断性检测方法和制备方法。
技术介绍
1、环瓜氨酸肽(ccp)是一种聚角蛋白微丝蛋白(filaggrin)，其自身抗体为抗环瓜氨酸肽(ccp)抗体，是类风湿关节炎诊断中具有较高敏感性和特异性的自身抗体之一。
2、目前，主要的抗环瓜氨酸肽抗体检测方法包括放射免疫分析、酶联免疫吸附、化学发光免疫分析法等。其中，放射免疫分析方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但是使用放射性示踪剂会增加安全隐患；酶联免疫法虽然成本较低，但对于不同组织类型中的环瓜氨酸抗体可能表现出差异，双抗夹心法则具有高灵敏度、特异性和准确性等优点，但是实验时间较长，操作过程较复杂。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其能解决现有试剂盒无法定量，准确度低、精密度低以及信噪比低的问题。
2、本专利技术的第二个目的在于提供一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的非诊断性检测方法，其能解决现有试剂盒检测方法复杂，检测时间长的问题。
3、本专利技术的第三个目的在于提供一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的制备方法，其能解决现有试剂盒制备工艺稳定性低，难操作，生产成本高的问题。
4、本专利技术的第一个目的采用以下技术方案实现：
5、一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，包括r1链霉亲和素磁珠包被物工作液、r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液、r3羊抗人igg抗体碱
6、进一步地，所述r1链酶亲和素磁珠包被物工作液中链酶亲和素磁珠包被物浓度为0.1-0.3mg/ml。
7、进一步地，所述r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液含有生物素化环瓜氨酸肽抗原，浓度为0.1-0.4μg/ml。
8、进一步地，所述r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液中含有羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物，浓度为0.5-2.0μg/ml。
9、进一步地，所述抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒还包括校准品、校准品复融液和化学发光底物液；所述校准品复融液中包括以质量百分比计的0.1-2％ tween 20、0.01-0.1％ proclin 300，余量为水。
10、本专利技术的第二个目的采用以下技术方案实现：
11、一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的非诊断性检测方法，包括以下步骤：
12、步骤1、稀释待测样本，将稀释后的待测样本与r1链酶亲和素磁珠包被物工作液、r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液进行孵育后第一次洗涤，然后加入r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液进行标记结合，分离并第二次洗涤，获得抗环瓜氨酸肽抗体免疫复合物；
13、步骤2、将所述抗环瓜氨酸肽抗体免疫复合物加入化学发光底物液中反应，在470nm下检测得到样本发光值；
14、步骤3、将样本发光值与校准品构建的发光值标准曲线进行匹配，得到待测样本中的抗环瓜氨酸肽抗体的含量。
15、进一步地，所述待测样本的稀释倍数为10-60倍；所述稀释后的待测样本、r1链酶亲和素磁珠包被物工作液、r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液和r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液的加入体积比为(20-70)：(20-70)：(20-70)：(20-100)。
16、进一步地，所述步骤1中样本与r1链酶亲和素磁珠包被物工作液、r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液的孵育的时间为3-15min；第一次洗涤的次数为1-5次；所述步骤1中加入r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液的标记结合时间为1-15min；第二次洗涤的次数为1-5次；所述步骤2中加入化学发光底物液的反应时间为2～10min。
17、本专利技术的第三个目的采用以下技术方案实现：
18、一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
19、s1、将磁珠和链酶亲和素进行包被结合，封闭清洗后得到链酶亲和素磁珠包被物，再加入磁珠包被物稀释液，稀释得到r1链酶亲和素磁珠包被物工作液；
20、s2、将生物素和环瓜氨酸肽抗原进行孵育结合，清洗后得到生物素-环瓜氨酸肽抗原，再加入ccp反应缓冲液，稀释得到r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液；
21、s3、将碱性磷酸酶和羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记结合并超滤纯化，得到羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物，然后加入碱性磷酸酶标记物稀释液进行稀释，得到r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液；
22、s4、将抗环瓜氨酸肽抗体校准品、r1链霉亲和素磁珠包被物工作液、r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液、r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液、化学发光底物液和校准品复融液进行组装，得到抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒。
23、进一步地，步骤s2中，所述ccp反应缓冲液为pbs溶液、hepes溶液和tris溶液中的一种，且所述ccp反应缓冲液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％ bsa、0.08-0.15％ tween20、0.3-0.8％ proclin 300，所述ccp反应缓冲液的浓度为0.03-0.08m，ph值为7.2-7.4。
24、相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
25、1.本专利技术的试剂盒中r1链酶亲和素磁珠工作液中和r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液的比例，令磁珠在同等比例下可以结合更多的抗原，因此对待测样品中的抗体的捕获效果更佳，再与r3相结合，从而显著提高检测的信噪比和灵敏度，并且能够定量的检测样品中的抗ccp抗体浓度。
26、2.本专利技术的试剂盒的非诊断性检测方法，通过磁珠对目标分子的选择性捕获，操作流程简单、快速，并且易于自动化，在30min内即可获得均一性和准确度高的结果，大幅提高了样品的处理效率，同时稀释倍数在10-100，降低了使用成本，同时扩大了可报告区间
27、3.本专利技术的试剂盒的制备方法，工艺流程简单，制备的产品的具有良好的精密度、准确度和稳定性。
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1.一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，包括R1链霉亲和素磁珠包被物工作液、R2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液、R3羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物工作液；所述R1链霉亲和素磁珠包被物工作液中包括链酶亲和素磁珠包被物，所述R2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液中包括生物素-环瓜氨酸肽抗原；所述R1中链酶亲和素磁珠包被物和R2中生物素-环瓜氨酸肽抗原的质量比为(0.25-3)mg：1μg。
2.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R1链酶亲和素磁珠包被物工作液中链酶亲和素磁珠包被物浓度为0.1-0.3mg/mL。
3.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液中生物素-环瓜氨酸肽抗原浓度为0.1-0.4μg/mL。
4.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R3羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物工作液中含有羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物，浓度为0.5-2.0μg/mL。
5.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒
6.权利要求1-5任一项所述的一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的非诊断性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的非诊断性检测方法，其特征在于，所述待测样本的稀释倍数为10-60倍；所述稀释后的待测样本、R1链酶亲和素磁珠包被物工作液、R2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液和R3羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物工作液的加入体积比为(20-70)：(20-70)：(20-70)：(20-100)。
8.根据权利要求6所述的一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的非诊断性检测方法，其特征在于，所述步骤1中样本与R1链酶亲和素磁珠包被物工作液、R2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液的孵育的时间为3-15min；第一次洗涤的次数为1-5次；所述步骤1中加入R3羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物工作液的标记结合时间为1-15min；第二次洗涤的次数为1-5次；所述步骤2中加入化学发光底物液的反应时间为2～10min。
9.权利要求1-5任一项所述的一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.如权利要求9所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述CCP反应缓冲液为PBS溶液、Hepes溶液和Tris溶液中的一种，且所述CCP反应缓冲液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween 20、0.3-0.8％Proclin300，所述CCP反应缓冲液的浓度为0.03-0.08M，pH值为7.2-7.4。
...【技术特征摘要】
1.一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，包括r1链霉亲和素磁珠包被物工作液、r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液、r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液；所述r1链霉亲和素磁珠包被物工作液中包括链酶亲和素磁珠包被物，所述r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液中包括生物素-环瓜氨酸肽抗原；所述r1中链酶亲和素磁珠包被物和r2中生物素-环瓜氨酸肽抗原的质量比为(0.25-3)mg：1μg。
2.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述r1链酶亲和素磁珠包被物工作液中链酶亲和素磁珠包被物浓度为0.1-0.3mg/ml。
3.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述r2生物素-环瓜氨酸肽抗原工作液中生物素-环瓜氨酸肽抗原浓度为0.1-0.4μg/ml。
4.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述r3羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物工作液中含有羊抗人igg抗体碱性磷酸酶标记物，浓度为0.5-2.0μg/ml。
5.根据权利要求1所述一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，其特征在于，所述抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒还包括校准品、校准品复融液和化学发光底物液；所述校准品复融液中包括以质量百分比计的0.1-2％tween 20、0.01-0.1％proclin 300，余量为水。
6.权利要求1-5任一项所述的一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒的非诊断性检测方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：周强，陈顺俊，冯俊博，周子明，
申请(专利权)人：广东埃纳生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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