【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及一种s2饲养细胞、制备方法及其应用。
技术介绍
1、t细胞免疫治疗是肿瘤免疫治疗的重要组成部分，是通过改变患者体内的免疫系统来攻击癌细胞。在通过t细胞免疫治疗的时候，需要将t细胞进行活化，t细胞活化是指它们从静止状态进入活跃状态，以便执行其免疫功能。
2、t细胞活化目前一般是使用cd3/cd28抗体包被的磁珠与t细胞共培养，刺激t细胞活化和扩增。由于cd3/cd28抗体包被的磁珠价格非常昂贵，扩增t细胞时需要用到大量磁珠，导致t细胞活化的成本高昂。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提出一种s2饲养细胞、制备方法及其应用，将cd3/cd28抗体fab段表达在s2饲养细胞的表面，能够活化和扩增t细胞，旨在解决了目前cd3/cd28抗体包被的磁珠价格非常昂贵，扩增t细胞时需要用到大量磁珠，导致t细胞活化的成本高昂的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提出一种s2饲养细胞，所述s2饲养细胞中含有表达cd3/cd28抗体fab段的基因序列，所述基因序列如seq id no:1所示。
3、本专利技术提供一种所述的s2饲养细胞的制备方法，包括以下步骤：
4、s10、将联合了flag标签的所述的基因序列克隆到表达载体中，得重组载体；
5、s20、将所述重组载体和抗性质粒均转染至昆虫s2细胞中，得s2饲养细胞。
6、可选地，在步骤s10中，所述的表达载体为pac5.1/v5-his a。p>
7、可选地，所述抗性质粒为pcoblast质粒。
8、可选地，在步骤s10中，所述flag标签的基因序列如seq id no:2所示。
9、可选地，步骤s10包括：
10、s11、对原有的联合了flag标签的cd3/cd28抗体fab段的基因序列进行密码子优化，并合成如seq id no:1所示的基因序列；
11、s12、根据seq id no:1所示的基因序列设计引物；
12、s13、通过pcr扩增技术扩增，得cd28/cd3抗体fab段的基因序列；
13、s14、将pcr后的cd28/cd3抗体fab段的基因和所述表达载体通过无缝克隆进行连接，得重组载体。
14、可选地，在步骤s12中，所述引物包括：
15、p1：5'-tccagagaccccggatcggggtaccatgcaggtgcaactagtgcaga g-3'；
16、p2：5'-aggctgatcagcgggtttaaactcacaaatgactcaggaaacaca-3'；
17、p3 5'-tgagtttaaacccgctgatcagcct-3'；
18、p4 5'-ggtaccccgatccggggtctctgga-3'。
19、可选地，所述原有的联合了flag标签的cd3/cd28抗体fab段的基因序列如seq idno:3所示。
20、可选地，步骤s20包括：
21、s21、将所述重组载体转染细菌感受态细胞，得转染细胞；
22、s22、抽提所述转染细胞中的所述重组载体；
23、s23、将步骤s22中抽提获得的所述重组载体与抗性质粒同时转染至昆虫s2中，得s2饲养细胞。
24、本专利技术提供一种所述的s2饲养细胞在制备活化和扩增t细胞制剂中的应用。
25、本专利技术提供的技术方案中，通过密码子优化后得到的cd3/cd28抗体fab段的基因序列如seq id no:1所示，将该目的基因转染至昆虫s2细胞中，昆虫s2细胞将cd3/cd28抗体fab段表达于s2饲养细胞的表面，能够有效活化和扩增t细胞，相较于现有技术，本专利技术的技术方案不需要磁珠包被，不需要纯化等步骤，降低了t细胞活化和扩增的成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种S2饲养细胞，其特征在于，所述S2饲养细胞中含有表达CD3/CD28抗体Fab段的基因序列，所述基因序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述的表达载体为pAc5.1/V5-His A。
4.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，所述抗性质粒为pCoBlast质粒。
5.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述FLAG标签的基因序列如SEQ ID NO:2所示。
6.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，步骤S10包括：
7.如权利要求6所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤S12中，所述引物包括：
8.如权利要求6所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，所述原有的联合了FLAG标签的CD3/CD28抗体Fab段的基因序列如SEQ ID NO:3所示。
9.如权利要
10.如权利要求9所述的S2饲养细胞在制备活化和扩增T细胞制剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种s2饲养细胞，其特征在于，所述s2饲养细胞中含有表达cd3/cd28抗体fab段的基因序列，所述基因序列如seq id no:1所示。
2.一种所述的s2饲养细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的s2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤s10中，所述的表达载体为pac5.1/v5-his a。
4.如权利要求2所述的s2饲养细胞的制备方法，其特征在于，所述抗性质粒为pcoblast质粒。
5.如权利要求2所述的s2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤s10中，所述flag标签的基...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑沛林，周海蓉，仝理想，章志福，徐婷婷，
申请(专利权)人：深圳市龙华区人民医院，
类型：发明
国别省市：
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