【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种能够快速裂解细胞等以提取病毒核酸的无泡裂解组合物。
技术介绍
1、在病毒核酸检测过程中，提取纯化病毒核酸首先需将病毒核酸释放出来，并与其他生物大分子分开。传统的离心柱法或磁珠法提取核酸一般需要裂解、结合、漂洗、洗脱等步骤。第一个关键步骤就是裂解，如果裂解不充分，可提取的目标核酸量便会较低，进而影响后续检测流程。
2、裂解的方式主要有机械作用、酶作用和化学作用。机械作用即通过机械力释放核酸，同时可能会引起核酸链断裂，因此不适于高分子量长链核酸的分离；酶作用主要是使用溶菌酶或蛋白酶；化学作用需要一定的ph和变性条件，变性条件一般为加热、加入表面活性剂(sds、tritonx2100、tween 20、np240、ctab等)或强离子剂(异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍)。基因组核酸提取试剂盒主要用ctab、sds和异硫氰酸胍即裂解试剂进行裂解。
3、目前的裂解试剂中往往含有表面活性剂和强离子剂(胍盐)等成分，表面活性剂的存在极易产生气溶胶，从而造成样本的污染；而胍盐在实际操作中会降低溶液ph值，近中性或偏酸性时胍盐易产生沉淀，影响裂解效果，降低核酸提取得率。此外，这些成分通常对下游反应如聚合酶链式反应(pcr)技术具有较强的抑制作用，需经过多次清洗纯化步骤去除，不仅产生大量的废液和消耗大量的移液枪枪头，同时也大大增加了提取时间，降低了实验人员的工作效率。因此，亟需开发一种可快速裂解释放病毒核酸且不含表面活性剂和胍盐的无泡裂解组合物，在降低样本被污染的同时省去多次清洗纯化步骤，从
技术实现思路
1、本专利技术中提供一种能快速裂解释放病毒等核酸的无泡裂解组合物，呈酸性，不含表面活性剂和胍盐成分，在一定残留量下对下游检测反应几乎无抑制作用，从而无需经多次清洗纯化即可直接进行洗脱而获取核酸。
2、根据本专利技术的一个方面，本专利技术涉及一种裂解组合物，含有如下组分：
3、(1)精氨酸，浓度为0.5-1.5m；
4、(2)无机盐，浓度为0.2-1m；
5、(3)缓冲液；
6、(4)ph为2-6。
7、优选地，裂解组合物中还含有金属螯合剂，浓度为5-10mm。
8、优选地，无机盐选自柠檬酸钠、氯化钠、氯化钾及其任意混合物。
9、优选地，缓冲液为tris缓冲液或mes缓冲液。更优选地，缓冲液的浓度为10-30mm。
10、优选地，本专利技术的裂解组合物还含有ph调节剂。
11、优选地，金属螯合剂为edta和/或edta的盐(例如edta二钠、edta四钠、edta二钠钙等)。
12、优选地，ph调节剂为氢氧化钠水溶液和/或盐酸水溶液，更优选为1m氢氧化钠水溶液和/或1m盐酸水溶液。
13、优选地，将ph值调节至约4。
14、优选地，裂解组合物由以上组分组成。
15、本领域技术人员可以理解，可以通过本领域已知的方法制备本专利技术的上述裂解组合物。
16、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术涉及一种试剂盒，含有本专利技术的裂解组合物。优选地，裂解组合物的体积为1-10ml，更优选2-3ml。
17、本专利技术的裂解组合物和试剂盒可用于裂解释放微生物核酸，进而可用于检测微生物。
18、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术涉及一种裂解释放微生物核酸的方法，其中，使用本专利技术的裂解组合物处理样本。本领域技术人员可以理解，本专利技术的方法并非以疾病的诊断为目的。
19、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术涉及一种检测微生物的方法，其中，使用本专利技术的裂解组合物处理样本裂解释放微生物核酸。本领域技术人员可以理解，本专利技术的方法并非以疾病的诊断为目的。
20、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术涉及本专利技术的裂解组合物在制备用于裂解释放微生物核酸或检测微生物的试剂中的用途。
21、优选地，微生物为病毒、细菌、真菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体或螺旋体。
22、优选地，核酸为dna和/或rna。
23、优选地，所述微生物为病毒，进一步优选为冠状病毒或流感病毒，更优选为新型冠状病毒。
24、优选地，样本为血液、血清、血浆、淋巴液、唾液、脱落细胞或其上清(例如来自于咽拭子或鼻咽拭子等)等，也可以为物品或食品擦拭样本。
25、本专利技术的裂解组合物呈酸性，不含表面活性剂和胍盐成分，在核酸提取过程中大大降低了样本污染的风险；在一定残留量下对下游检测几乎无抑制，从而无需经多次清洗纯化即可直接进行洗脱而获取核酸；可在室温条件下使用，无需加热或蛋白酶处理等额外步骤，无任何有毒成分或有机溶剂，绿色环保，操作简便，且裂解提取效果可与市场上主流裂解试剂产品持平。
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1.一种裂解组合物，其特征在于，含有如下组分：
2.如权利要求1所述的裂解组合物，其特征在于，还含有金属螯合剂，浓度为5-10mM。
3.如权利要求1所述的裂解组合物，其特征在于，还含有pH调节剂。
4.如权利要求1-3中任一项所述的裂解组合物，其特征在于，所述裂解组合物由所述组分组成。
5.一种试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1-4中任一项所述的裂解组合物。
6.一种裂解释放微生物核酸的方法，其特征在于，使用如权利要求1-4中任一项所述的裂解组合物处理样本。
7.一种检测微生物的方法，其特征在于，使用如权利要求1-4中任一项所述的裂解组合物处理样本裂解释放微生物核酸。
8.如权利要求1-4中任一项所述的裂解组合物在制备用于裂解释放微生物核酸或检测微生物的试剂中的用途。
9.如权利要求6-8中任一项所述的方法或用途，其特征在于，所述微生物为病毒、细菌、真菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体或螺旋体。
【技术特征摘要】
1.一种裂解组合物，其特征在于，含有如下组分：
2.如权利要求1所述的裂解组合物，其特征在于，还含有金属螯合剂，浓度为5-10mm。
3.如权利要求1所述的裂解组合物，其特征在于，还含有ph调节剂。
4.如权利要求1-3中任一项所述的裂解组合物，其特征在于，所述裂解组合物由所述组分组成。
5.一种试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1-4中任一项所述的裂解组合物。
6.一种裂解释放微生物核酸的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：王少坤，
申请(专利权)人：友康厚德生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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