【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及油田化学品毒性生物检测领域，具体涉及一种利用重组大肠杆菌高通量测试油田化学剂生物毒性的方法。
技术介绍
1、油田开采过程中需要注入大量化学助剂以提高石油的采收率，近年来国内油田化学剂用量逐年增加，《中华人民共和国石油天然气行业标准sy/t6788-2010》即《水溶性油田化学剂环境保护技术评价办法》中规定了油气田使用的水溶性油田化学剂中生物毒性、生物降解性和重金属含量三项环境保护技术要求的评级方法。
2、油田化学剂种类及成分比较复杂，大多含有酸类、醇醚类、聚合物或表面活性剂等，具有一定的毒性及健康危害。油田钻井液等化学剂的生物毒性检测及分级目前尚无统一标准。中国国家标准《海洋石油勘探开发污染物生物毒性检验方法》(gb/t18420.2-2001)使用仔虾或卤虫幼体作为检测生物；而仔虾或卤虫幼体实验周期长，需要96h检测时间。中国石油环境监测总站建立中国石油天然气集团公司企业标准《油田化学剂、钻井液生物毒性分级及检测方法发光细菌法》(q/sy111-2007)使用明亮发光杆菌作为检测生物，但很多油田化学剂酸性或碱性强，并不适用明亮发光杆菌体系，而且明亮发光杆菌为海洋发光菌，需要2％-3％的nacl维持渗透压并调节所有待测样品。专利申请cn 108226493 a和cn109680033 a公开了一种利用基因重组发光菌(escherichia coli hb101 pucd607)作为检测生物检测工业废水等水体综合毒性。该法虽然克服了海洋发光菌对ph和盐的要求，但仍需要0.1m kcl调节渗透压，且菌液od
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的检测油田化学剂周期长，需要添加盐溶液调节渗透压的问题，提供一种利用重组大肠杆菌高通量测试油田化学剂生物毒性的方法，该方法可以快速简便高通量测定油田化学剂的毒性，而且可以采用纯水进行稀释和检测，减少盐度改变对油田化学剂的影响。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供一种利用重组大肠杆菌高通量测试油田化学剂生物毒性的方法，该方法包括：
3、(1)将重组大肠杆菌进行培养，然后进行离心，弃上清液，加水进行重悬，得到重组大肠杆菌悬液；
4、(2)向油田化学剂中加水配制成不同浓度的油田化学剂溶液，然后分别加入步骤(1)得到的重组大肠杆菌悬液，进行反应，然后测定其相对发光单位rlu；
5、(3)以油田化学剂不同浓度为横坐标，以不同浓度对应的相对发光单位rlu为纵坐标，进行logit回归拟合，并计算ic50，油田化学剂的生物毒性大小根据ic50进行判断；
6、其中，所述重组大肠杆菌为escherichia coli dh5αpgen-luxcdabe。
7、优选地，在步骤(1)中，采用amp-lb培养基对重组大肠杆菌进行培养。
8、优选地，在步骤(1)中，所述amp-lb培养基中含有氨苄青霉素。
9、优选地，在步骤(1)中，所述amp-lb培养基中氨苄青霉素的含量为45-60mg/l。
10、优选地，在步骤(1)中，将重组大肠杆菌培养至相对发光单位rlu为3×106-5×106。
11、优选地，在步骤(1)中，所述培养的时间为12-18h。
12、优选地，在步骤(1)中，所述培养的温度为35-38℃。
13、优选地，在步骤(1)中，所述离心的转速为4000-5500rpm，所述离心的时间为4-6min。
14、优选地，在步骤(1)中，所述重组大肠杆菌悬液的相对发光单位rlu为1×105-2×105。
15、优选地，步骤(2)中的具体操作包括：向油田化学剂中加水配制成不同浓度的油田化学剂溶液，然后分别将步骤(1)得到的重组大肠杆菌悬液加入到含有不同浓度的油田化学剂溶液的微孔板中，进行反应，然后测定其相对发光单位rlu。
16、优选地，在步骤(2)中，所述微孔板中实验组每孔重组大肠杆菌悬液的体积不超过每孔总体积的10％，所述微孔板中空白对照组每孔重组大肠杆菌悬液的体积不超过每孔总体积的10％。
17、优选地，在步骤(2)中，所述微孔板中实验组每孔重组大肠杆菌悬液的体积为每孔总体积的0.5-10％，所述微孔板中空白对照组每孔重组大肠杆菌悬液的体积为每孔总体积的0.5-10％。
18、优选地，在步骤(2)中，所述空白对照组中以同等体积的水代替油田化学剂溶液。
19、优选地，在步骤(2)中，所述反应的温度为20-37℃。
20、优选地，在步骤(2)中，所述反应的时间为13-17min。
21、本专利技术所述的方法，可以快速简便高通量测定油田化学剂生物毒性，以及可以采用纯水进行稀释和检测，可以减少盐度改变对油田化学剂的影响。
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1.一种利用重组大肠杆菌高通量测试油田化学剂生物毒性的方法，其特征在于，该方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，采用Amp-LB培养基对重组大肠杆菌进行培养。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述Amp-LB培养基中含有氨苄青霉素。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述Amp-LB培养基中氨苄青霉素的含量为45-60mg/L。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，将重组大肠杆菌培养至相对发光单位RLU为3×106-5×106。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述培养的时间为12-18h。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述培养的温度为35-38℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述离心的转速为4000-5500rpm，所述离心的时间为4-6min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的具体操作包括：向油田化学剂中加水配制成不同浓度的油田化学剂溶液，然后分别将步骤(1)得到的重组大肠杆菌悬液加入到含有不同浓度的油田化学剂溶液的微孔板中，进行反应，然后测定其相对发光单位RLU。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述微孔板中实验组每孔重组大肠杆菌悬液的体积不超过每孔总体积的10％，所述微孔板中空白对照组每孔重组大肠杆菌悬液的体积不超过每孔总体积的10％。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述微孔板中实验组每孔重组大肠杆菌悬液的体积为每孔总体积的0.5-10％，所述微孔板中空白对照组每孔重组大肠杆菌悬液的体积为每孔总体积的0.5-10％。
13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述空白对照组中以同等体积的水代替油田化学剂溶液。
14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述反应的温度为20-37℃。
15.根据权利要求1或14所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述反应的时间为13-17min。
...【技术特征摘要】
1.一种利用重组大肠杆菌高通量测试油田化学剂生物毒性的方法，其特征在于，该方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，采用amp-lb培养基对重组大肠杆菌进行培养。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述amp-lb培养基中含有氨苄青霉素。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述amp-lb培养基中氨苄青霉素的含量为45-60mg/l。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，将重组大肠杆菌培养至相对发光单位rlu为3×106-5×106。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述培养的时间为12-18h。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述培养的温度为35-38℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述离心的转速为4000-5500rpm，所述离心的时间为4-6min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述重组大肠杆菌悬液的相对发光单位rlu为1×105-2×...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈忱，郑璐，李玲玲，于金宁，郭强之，赵盛，王晨，
申请(专利权)人：中国石油化工股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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