【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物传染病检测，具体涉及到检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、牛结节皮肤病(lumpy skin disease，lsd)是由牛结节皮肤病病毒(lumpy skin
2、disease virus，lsdv)引起牛的一种急性、亚急性、慢性的高度接触性传染病。该病可以导致感染的怀孕母牛不孕、流产、公牛暂时性失去孕育能力，产奶母牛产奶量下降，造成感染牛机体消瘦，因皮肤上布满结节而导致皮革利用率低。该病可感染不限品种和年龄的牛，感染任何年龄阶段的牛，其中犊牛死亡率可达100％，成年牛的死亡率在3％-10％。
3、目前，针对该病的主要预防措施是接种弱毒疫苗，尚无有效的治疗性药物。近年来，弱毒疫苗使用中呈现局部皮肤性反应，体温升高等不良反应，同时，弱毒疫苗的安全性存在风险，特别是由异源弱毒疫苗接种导致的宿主特异性，存在潜在感染山羊、绵羊的安全性风险。
4、由于临床上，lsd感染的增加和弱毒疫苗接种的扩大，相应的检测和评价lsdv抗体的检测方法成为必须。目前，商品化的lsdv抗体检测试剂盒仅有1家进口试剂盒，国内还没见商品化试剂盒，临床上常已有的检测羊痘抗体的elisa试剂盒进行对lsdv抗体的检测。由于羊痘病毒抗原性与lsdv的差异，及试剂盒酶标抗体的不同，因此，造成临床上对lsdv抗体检测结果不理想。因此，研制诊断lsdv抗体的特异性检测试剂盒对应临床检测具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有检测产品在技
2、本专利技术是通过如下技术方案实现的：
3、第一方面，本专利技术提供了一种用于特异性检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物，包括抗原1和抗原2，所述抗原1的氨基酸序列包括氨基酸序列如seq id no.1所示序列，或与seq id no.1所示序列的氨基酸同源性在85％-99％及其以上，其空间结构和功能与seq idno.1所示序列相同或相近的序列；所述抗原2的氨基酸序列包括seq id no.2所示序列，或与seq id no.2所示序列的氨基酸同源性在85％-99％及其以上，其空间结构和功能与seqid no.2所示序列相同或相近的序列。
4、优选的，重组抗原聚合物由抗原1和抗原2按质量比进行配组、共价聚合形成，抗原1和抗原2的质量比为1∶1-20。
5、优选的，抗原1和抗原2的质量比为1∶1-10。
6、优选的，抗原1和抗原2的质量比为1∶4-6。
7、第二方面，本专利技术提供了一种编码氨基酸的cdna序列，能够编码抗原1的多核苷酸序列包括seq id no.3所示序列，或与seq id no.3所示序列的同源性在80％-99％及其以上的序列，或以上cdna序列的互补序列；能够编码抗原2的多核苷酸序列包括seq id no.4所示序列，或与seq id no.4所示序列的同源性在80％-99％及其以上的序列，或以上cdna序列的互补序列。
8、第三方面，本专利技术还提供了一种编码cdna制备的表达盒，表达盒包括重组表达载体、重组表达菌或重组表达细胞。
9、第四方面，本专利技术还提供了重组抗原聚合物、抗原、编码cdna序列、表达盒、重组表达载体、重组表达菌或重组表达细胞在制备牛lsdv检测产品中的应用。
10、第五方面，本专利技术提供了一种特异性检测牛lsdv抗体的elisa试剂盒，包括包被抗原，所述包被抗原为抗原1和抗原2共价聚合形成的重组抗原聚合物，试剂盒中，包被抗原1的包被浓度为为0.5-4.5μg/ml，包被抗原2的包被浓度为1.5-10μg/ml；上述试剂盒中，还包括用于固定包被抗原聚合物的固相载体，固相载体包括聚苯乙烯材质或聚氯乙烯材质的elisa酶标板，化学发放反应的pvc白板、和/或hrp标记抗体(所述标记抗体是葡萄球菌a蛋白或纯化的igg免疫球蛋白，所述免疫球蛋白可以是山羊抗牛igg、兔抗牛igg、鼠抗牛igg或马抗牛igg，所述催化酶可为辣根过氧化物每)、和/或碳酸盐包被缓冲液(ph9.6)、和/或碳酸盐包被缓冲液、和/或样品稀释液、和/或elisa封闭液、和/或阳性血清对照、和/或阴性血清对照、和/或tmb显色液、和/或化学发光底物液，和/或终止液。
11、优选的，包被抗原1的包被浓度为为1.2-3.6μg/ml，优选为1.2-3.6μg/ml，更优选为2.0μg/ml，包被抗原2的包被浓度为5.0-10.0μg/ml，优选为5.0-10.0μg/ml，更优选为8.0μg/ml。
12、第六方面，本专利技术提供了重组抗原聚合物、抗原、编码cdna序列、表达盒、重组表达载体、重组表达菌或重组表达细胞、或所述试剂盒在检测特异性牛lsdv抗体中的应用，检测特异性牛lsdv抗体的方法为elisa法，包括tmb底物显色法和化学发光法；检测特异性牛lsdv抗体的靶标为牛lsdv特异性抗体，牛lsdv抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体，多克隆抗体来自动物的血清，奶汁，唾液。
13、与现有技术相比，本专利技术的有益之处为：
14、(1)本专利技术在研究国内外牛lsdv基因序列、针对编码蛋白及其结构与功能特点的基础上，通过计算机软件预测与分析，筛选获得2个具有完整主要抗原表位区域的p32新水性膜外蛋白编码区基因，通过生物信息技术对编码氨基酸的多核苷酸序列进行了密码子优化，改变了cdna的g+c含量水平，实现了重组蛋白的在重组表达菌或重组细胞的高效、可溶性表达，有效提高了抗原免疫学活性。
15、(2)本专利技术通过免疫学技术鉴定与分析了表达的重组抗原的生物学活性，按照质量比，通过共价聚合，形成了高活性的重组抗原聚合物，有效提高了包被抗原的免疫特异性和反应敏感性，满足其作为诊断抗原的技术要求。
16、(3)以本专利技术的重组抗原聚合物为包被抗原建立的elisa试剂盒，对国内lsdv流行毒株抗体检出率明显高于现有的商品化试剂盒。本专利技术还提供了基于重组抗原聚合物为包被抗原的elisa试剂盒及其在检测牛lsdv的应用及其方法，为临床上lsdv的综合防控提供了技术支撑。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于特异性检测牛LSDV抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，包括抗原1和抗原2，所述抗原1的氨基酸序列包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示序列，或与SEQ ID No.1所示序列的氨基酸同源性在85％-99％及其以上，其空间结构和功能与SEQ IDNo.1所示序列相同或相近的序列；所述抗原2的氨基酸序列包括SEQ ID No.2所示序列，或与SEQ ID No.2所示序列的氨基酸同源性在85％-99％及其以上，其空间结构和功能与SEQ ID No.2所示序列相同或相近的序列。
2.根据权利要求1所述的一种用于特异性检测牛LSDV抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，重组抗原聚合物由抗原1和抗原2按质量比进行配组、共价聚合形成，抗原1和抗原2的质量比为1∶1-20。
3.根据权利要求2所述的一种用于特异性检测牛LSDV抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，抗原1和抗原2的质量比为1∶1-10。
4.根据权利要求2所述的一种用于特异性检测牛LSDV抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，抗原1和抗原2的质量比为1∶4-6。
5.一种用于特
6.一种利用权利要求5所述的编码cDNA制备的表达盒，其特征在于，表达盒包括重组表达载体、重组表达菌或重组表达细胞。
7.如权利要求1-6任一项所述重组抗原聚合物、抗原、编码cDNA序列、表达盒、重组表达载体、重组表达菌或重组表达细胞在制备牛LSDV检测产品中的应用。
8.一种特异性检测牛LSDV抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被抗原，所述包被抗原为抗原1和抗原2共价聚合形成的重组抗原聚合物，试剂盒中，包被抗原1的包被浓度为为0.5-4.5μg/mL，包被抗原2的包被浓度为1.5-10μg/mL；上述试剂盒中，还包括用于固定包被抗原聚合物的固相载体，固相载体包括聚苯乙烯材质或聚氯乙烯材质的ELISA酶标板，化学发放反应的PVC白板、和/或HRP标记抗体、和/或碳酸盐包被缓冲液、和/或样品稀释液、和/或ELISA封闭液、和/或阳性血清对照、和/或阴性血清对照、和/或TMB显色液、和/或化学发光底物液，和/或终止液。
9.如权利要求8所述的ELISA试剂盒，其特征在于，包被抗原1的包被浓度为为1.2-3.6μg/mL，包被抗原2的包被浓度为5.0-10.0μg/mL。
10.如权利要求1-8任一项所述重组抗原聚合物、抗原、编码cDNA序列、表达盒、重组表达载体、重组表达菌或重组表达细胞、或所述试剂盒在检测特异性牛LSDV抗体中的应用，检测特异性牛LSDV抗体的方法为ELISA法，包括TMB底物显色法和化学发光法；检测特异性牛LSDV抗体的靶标为牛LSDV特异性抗体，牛LSDV抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体，多克隆抗体来自动物的血清，奶汁，唾液。
...【技术特征摘要】
1.一种用于特异性检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，包括抗原1和抗原2，所述抗原1的氨基酸序列包括氨基酸序列如seq id no.1所示序列，或与seq id no.1所示序列的氨基酸同源性在85％-99％及其以上，其空间结构和功能与seq idno.1所示序列相同或相近的序列；所述抗原2的氨基酸序列包括seq id no.2所示序列，或与seq id no.2所示序列的氨基酸同源性在85％-99％及其以上，其空间结构和功能与seq id no.2所示序列相同或相近的序列。
2.根据权利要求1所述的一种用于特异性检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，重组抗原聚合物由抗原1和抗原2按质量比进行配组、共价聚合形成，抗原1和抗原2的质量比为1∶1-20。
3.根据权利要求2所述的一种用于特异性检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，抗原1和抗原2的质量比为1∶1-10。
4.根据权利要求2所述的一种用于特异性检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，抗原1和抗原2的质量比为1∶4-6。
5.一种用于特异性检测牛lsdv抗体的重组抗原聚合物，其特征在于，能够编码抗原1的多核苷酸序列包括seq id no.3所示序列，或与seq id no.3所示序列的同源性在80％-99％及其以上的序列，或以上cdna序列的互补序列；能够编码抗原2的多核苷酸序列包括seq id no.4所示序列，或与seq id no.4所示序列的同源性在80％-99％及其以上的序列，或以上cdna序列的互补序列。
6.一种利用...
【专利技术属性】
技术研发人员：董林，刘吉山，王艳萍，周春凤，王云军，唐娜，赵一龙，井长华，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。