一种口蹄疫疫苗中146S抗原的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种口蹄疫疫苗中146S抗原的检测方法，通过向口蹄疫疫苗水相样品中加入核酸染料并在一定条件下进行荧光检测，利用核酸染料与释放出的核酸结合后激发产生荧光信号且荧光强度与结合的核酸量成正比，通过测定荧光强度的变化实现完整病毒的含量测定；又利用不同血清型衣壳蛋白序列存在差异，会在不同的温度下发生裂解，实现同时检测不同血清型病毒的核酸释放过程。本发明专利技术可用于单价、双价甚至三价以上口蹄疫疫苗中不同血清型的146S定量检测，且不需要对样品进行特别的分离过程，操作简单，成本低、重复性好、灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测，具体涉及一种口蹄疫疫苗中146s抗原的检测方法。

技术介绍

1、口蹄疫(foot-and-mouth disease，fmd)作为一类烈性传染病，传播速度快、范围广、危害大，主要危害猪、牛、羊等偶蹄动物，发病率极高，给我国畜牧产业带来巨大的经济损失。尽管目前已有口蹄疫重组亚单位疫苗、合成肽疫苗等，但目前我国对口蹄疫依然采取以灭活病毒疫苗免疫为主的防控策略，相比其他类型的疫苗表现出更优的免疫保护效果。

2、在口蹄疫疫苗中起到最主要的保护作用的有效抗原是其完整病毒146s。口蹄疫病毒146s是无囊膜的rna病毒，呈二十面体对称，直径为28～30nm，包含a型、o型、c型、南非1型(sat 1型)、南非2型(sat 2型)、南非3型(sat 3型)和亚洲1型(asia1型)等七种血清型。不同血清型之间无交叉保护，同一血清型的各亚型之间仅有部分交叉免疫。146s较差的稳定性是口蹄疫疫苗的挑战。在生产和运输过程中146s极易裂解成无免疫活性的五聚体12s并释放出内部的病毒rna而影响免疫效果。因此为了保证疫苗产品质量，避免免疫失败导致本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种口蹄疫疫苗中146S抗原的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，口蹄疫样品与核酸染料的体积比为500~5000：1；优选地，所述口蹄疫样品与核酸染料的体积比为2000：1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述染料为SYBR Green II、SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR Safe、溴化乙锭、GelRed、GelGreen、Gold View I、GoldView II、RiboGreen中的任意一种，优选地，所述染料为SYBR Green II或Ri...

【技术特征摘要】

1.一种口蹄疫疫苗中146s抗原的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，口蹄疫样品与核酸染料的体积比为500~5000：1；优选地，所述口蹄疫样品与核酸染料的体积比为2000：1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述染料为sybr green ii、sybr green i、sybr gold、sybr safe、溴化乙锭、gelred、gelgreen、gold view i、goldview ii、ribogreen中的任意一种，优选地，所述染料为sybr green ii或ribogreen。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述升温速率为60~120℃/h，所述升温范围为20~90℃；优选地，所述升温速率为60~90℃/h，所述升温范围为25~85℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，取样加入pcr管中时，所述取样体积为25~100 μl；...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，杨延丽，陈晓洁，黎明，辛菲，蔡清波，
申请(专利权)人：天康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：