【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于具有免疫功能的药物载体的制备及应用，具体涉及一种酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备及应用。
技术介绍
1、免疫系统是人类抵御微生物入侵的天然防御系统。在每次感染后，人体都会建立一段时间的记忆效应以快速应对类似的感染。疫苗通过模拟感染过程或者使人们接受可控的感染，从而使人们获取了预防疾病的能力。除了预防疾病，疫苗也不断的被尝试用于治疗疾病。用于乙肝、丙肝、艾滋、肿瘤等的治疗性疫苗逐渐进入临床试验并取得了积极进展。
2、可控的微生物感染是产生免疫记忆效应的有效手段，然而微生物繁殖所带来的安全风险仍然困扰着这类疫苗的发展。因此，包含微生物特征而不具繁殖能力的灭活疫苗、蛋白疫苗、dna疫苗、sirna疫苗等被提出以实现记忆效应并降低安全风险。但是繁殖能力丧失伴随而来的是较低的免疫原性，通常会在疫苗制作的过程中加入一些佐剂以增强免疫原性。当疫苗被用来治疗肿瘤时，发展于自体正常细胞的肿瘤细胞不像外源微生物能引起强大的免疫反应，免疫原性进一步降低。微生物感染是刺激免疫力的最有效方法之一。一个世纪前，由于微生物感染导致的肿瘤消退，使人们认识到免疫疗法在肿瘤治疗方面的潜力。通过微生物感染增加自体肿瘤抗原的免疫原性是提高基于自体肿瘤抗原的癌症治疗效果的有效方法。然而，与感染相关的安全问题可能比肿瘤本身更危险。
3、为了降低安全风险，同时利用微生物的免疫激活能力，诸多研究使用不可复制的微生物成分（如细菌细胞、细菌外泌体、酵母细胞壁）来实现可控的免疫激活。在众多的微生物成分中，酵母细胞壁（yc，非致病性真菌酵母
4、多种多样的免疫特性本应使yc成为一种优秀的免疫载体。然而，yc有限的装载能力限制了它结合抗原进行抗原呈递或进一步结合强大的佐剂实现多途径免疫激活。如何提高yc对抗原和佐剂的负载能力，是实现模拟酵母感染途径高性能疫苗的关键。
技术实现思路
1、为了解决酵母细胞壁的对佐剂和蛋白抗原的负载，本专利技术提供了一种酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备及应用，开发了一系列在酵母细胞壁内生长介孔二氧化硅从而提高酵母细胞壁对药物、蛋白抗原和佐剂负载能力的方法。合成的复合粒子粒径约2-4μm，介孔二氧化硅嵌于酵母细胞壁内。介孔二氧化硅的引入成功的提高了酵母细胞壁对药物的负载能力，且未覆盖酵母细胞壁表面，使其免疫特性得以保留。经过对介孔二氧化硅的的粒径、疏水性进行调节，可以拓展负载物的种类，使得酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合载体可以实现药物、蛋白抗原、肿瘤裂解物、佐剂等的负载。
2、本专利技术为实现上述目的采用如下技术方案，一种酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子，其特征在于：该酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子中介孔二氧化硅分布于酵母细胞壁内，实现该复合粒子同时具备介孔二氧化硅的高负载能力和酵母细胞壁的免疫靶向、激活能力；该复合粒子能够实现对药物分子的负载，复合粒子经扩孔改性后能够实现对蛋白抗原、肿瘤裂解物的负载，复合粒子经疏水改性后能够实现对佐剂雷西莫特（r848）的负载，复合粒子经扩孔、疏水改性后能够同时实现对蛋白抗原、肿瘤裂解物和佐剂雷西莫特的负载。
3、本专利技术所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于具体过程为：将酵母细胞壁在碱性条件下吸附阳离子胶束后，加入硅酸酯在酵母细胞壁内原位聚合介孔二氧化硅从而形成酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子；所述阳离子胶束为阳离子表面活性剂或阳离子表面活性剂修饰的纳米粒子，其中阳离子表面活性剂为c1-20烷基三甲基氯化铵、c1-20烷基三甲基溴化铵或聚乙烯亚胺中的一种或多种，阳离子表面活性剂修饰的纳米粒子中纳米粒子为四氧化三铁、氧化铥或二氧化硅中的一种；所述硅酸酯为硅酸四乙酯、硅酸四甲酯、三乙氧基苯基硅烷或硅烷偶联剂中的一种或多种。
4、本专利技术所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于具体步骤为：
5、步骤s1，将酵母分散在水中，加入氢氧化钠搅拌溶解，于80℃加热，通过离心收集样品，用水洗涤三次，将清洗和离心得到的沉淀物加入水中，用盐酸调节混合体系的ph=4，并于60℃加热，再将样品用水洗两次，用异丙醇洗三次，用丙酮洗两次，并真空干燥得到酵母细胞壁；
6、步骤s2，将步骤s1得到的酵母细胞壁超声分散在水中，搅拌混合均匀，加入十六烷基三甲基溴化铵（ctab）和三乙醇胺，于80℃搅拌，将硅酸四乙酯（teos）溶解在乙醇中并用蠕动泵滴加，滴加完成后于80℃继续搅拌，将样品离心后用甲醇洗涤三次，然后在5wt%的硝酸铵甲醇溶液中回流，重复洗涤和回流三次得到酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子。
7、进一步优选，所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子扩孔改性的具体步骤为：
8、步骤s1，将酵母分散在水中，加入氢氧化钠搅拌溶解，于80℃加热，通过离心收集样品，用水洗涤三次，将清洗和离心得到的沉淀物加入水中，用盐酸调节混合体系的ph=4，并于60℃加热，再将样品用水洗两次，用异丙醇洗三次，用丙酮洗两次，并真空干燥得到酵母细胞壁；
9、步骤s2，将氯化铁（fecl3·6h2o）和油酸钠溶解于乙醇、蒸馏水和己烷的混合溶剂中，将所得溶液加热至70℃进行反应，反应完成后在分离漏斗中用蒸馏水将含有油酸铁复合物的上层有机层洗涤三次，清洗完后蒸发掉正己烷得到蜡状固体形式的油酸铁复合物，再于室温将油酸铁复合物和油酸溶解于1-十八烯中，将反应混合物加热到320℃，加热速率为3.3℃/min-1，并于该温度下保持30min，然后将得到的含有纳米晶体的溶液冷却到室温，通过丙酮沉淀fe3o4纳米颗粒，并真空干燥得到油酸改性四氧化三铁纳米颗粒；
10、步骤s3，将步骤s2得到的油酸改性四氧化三铁纳米颗粒分散于正己烷中形成溶液a，将十六烷基三甲基溴化铵溶解于水中形成溶液b，将溶液a与溶液b混合搅拌以形成乳状液，再加热至75℃挥发掉乳液中的正己烷形成透明的棕色溶液c；
11、步骤s4，在步骤s3得到的溶液c中加入步骤s1得到的酵母细胞壁，充分分散后加入三乙醇胺并于80℃搅拌混合均匀，再通过蠕动泵滴加硅酸四乙酯的乙醇溶液，并继续反应得到酵母细胞壁-四氧化三铁-介孔二氧化硅复合粒子；
12、步骤s5，将步骤s4得到的酵母细胞壁-四氧化三铁-介孔二氧化硅复合粒子分散于甲醇和盐酸的混合溶液中，加热至60℃以去除fe3o4纳米颗粒并形成大孔，然后在5wt%的硝酸铵甲醇溶液中回流以去除十六烷基三甲基溴化铵形成小孔，最终得到扩孔改性的酵本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子，其特征在于：该酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子中介孔二氧化硅分布于酵母细胞壁内，实现该复合粒子同时具备介孔二氧化硅的高负载能力和酵母细胞壁的免疫靶向、激活能力，该复合粒子能够实现对药物分子的负载，复合粒子经扩孔改性后能够实现对蛋白抗原、肿瘤裂解物的负载，复合粒子经疏水改性后能够实现对佐剂雷西莫特的负载，复合粒子经扩孔、疏水改性后能够同时实现对蛋白抗原、肿瘤裂解物和佐剂雷西莫特的负载。
2.一种权利要求1所述的酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于具体过程为：将酵母细胞壁在碱性条件下吸附阳离子胶束后，加入硅酸酯在酵母细胞壁内原位聚合介孔二氧化硅从而形成酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子；所述阳离子胶束为阳离子表面活性剂或阳离子表面活性剂修饰的纳米粒子，其中阳离子表面活性剂为C1-20烷基三甲基氯化铵、C1-20烷基三甲基溴化铵或聚乙烯亚胺中的一种或多种，阳离子表面活性剂修饰的纳米粒子中纳米粒子为四氧化三铁、氧化铥或二氧化硅中的一种；所述硅酸酯为硅酸四乙酯、硅酸四甲酯、三乙氧基苯基硅烷或硅烷偶联剂中的一种或多种。p>
3.根据权利要求2所述的酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于具体步骤为：
4.根据权利要求2所述的酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子扩孔改性的具体步骤为：
5.根据权利要求2所述的酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子疏水改性的具体步骤为：
6.根据权利要求2所述的酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子扩孔、疏水改性的具体步骤为：
7.权利要求1所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子作为口服药物载体的应用。
8.权利要求1所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子在制备蛋白抗原、肿瘤裂解物载体中的应用。
9.权利要求1所述酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子在制备佐剂蕾西模特载体中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子，其特征在于：该酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子中介孔二氧化硅分布于酵母细胞壁内，实现该复合粒子同时具备介孔二氧化硅的高负载能力和酵母细胞壁的免疫靶向、激活能力，该复合粒子能够实现对药物分子的负载，复合粒子经扩孔改性后能够实现对蛋白抗原、肿瘤裂解物的负载，复合粒子经疏水改性后能够实现对佐剂雷西莫特的负载，复合粒子经扩孔、疏水改性后能够同时实现对蛋白抗原、肿瘤裂解物和佐剂雷西莫特的负载。
2.一种权利要求1所述的酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子的制备方法，其特征在于具体过程为：将酵母细胞壁在碱性条件下吸附阳离子胶束后，加入硅酸酯在酵母细胞壁内原位聚合介孔二氧化硅从而形成酵母细胞壁-介孔二氧化硅复合粒子；所述阳离子胶束为阳离子表面活性剂或阳离子表面活性剂修饰的纳米粒子，其中阳离子表面活性剂为c1-20烷基三甲基氯化铵、c1-20烷基三甲基溴化铵或聚乙烯亚胺中的一种或多种，阳离子表面活性剂修饰的纳米粒子中纳米粒子为四氧化三铁、氧化铥或二氧化硅中的一种；所述硅酸酯...
【专利技术属性】
技术研发人员：马广磊，李青，马晓明，胡志国，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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