【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
总体而言，本专利技术的特征在于眼治疗剂以及用于向眼细胞施用治疗剂的装置和方法。
技术介绍
1、视力障碍和失明是全球主要的健康问题，影响着数百万患有各种眼疾病的患者。例如，视网膜营养不良是视觉功能的慢性和进行性障碍，其由于视网膜细胞结构(例如，光感受器和/或视网膜上皮细胞)和视觉循环途径(例如，促进光能转化为可感知的神经元信号所需的光传导和视觉循环途径)的遗传异常而发生。视网膜营养不良引起的视力障碍表现为周边视力或夜视力差到完全失明不等，严重程度通常随着年龄的增长而增加。部分地由于复杂的生物机制和进入视网膜的限制，针对许多视网膜营养不良的安全有效的治疗方法仍然稀缺。
2、基因疗法的最新进展显示出治疗视网膜营养不良的潜力。然而，当前的递送方式通常依赖于病毒粒子，例如腺相关病毒(aav)载体的向性。这种递送方式的成功取决于多种因素，例如靶组织位置、载体的施用途径和宿主应答。此外，aav载体受到要递送的治疗性基因的大小限制，使得这种方式不适合递送许多视网膜基因。因此，有效靶向眼细胞仍然是一项具有挑战性的工作，需要改进的方法将治疗剂有效递送至视网膜细胞。
技术实现思路
1、本专利技术提供了将治疗剂(例如，编码治疗性替代蛋白的核酸载体)递送至眼细胞(例如，视网膜细胞)的方法。在一些情况下，本文描述的方法涉及电转移，所述电转移过程中使用眼内电极(例如，位于玻璃体或视网膜中)将电场发射到眼组织(例如，视网膜)中促进治疗剂(例如，核酸载体，例如，非病毒核酸载体，例如，裸核酸载体，例如，合
2、一方面，本专利技术提供了将治疗剂(例如核酸载体，例如非病毒核酸载体，例如裸核酸载体，例如合成的环状dna载体)递送至个体的靶视网膜细胞的方法，所述方法包括：(a)使电极接触眼的内部区域，其中眼的视网膜中的细胞外空间包含所述治疗剂；以及(b)当所述电极接触眼的内部区域时，在适于将治疗剂电转移到靶视网膜细胞中的条件下，通过电极发射一个或多个(例如，4-12或6-10个)电能脉冲(例如电流)。在一些实施例中，电极是单极电极(例如，位于玻璃体中的单极正电极，或位于视网膜、视网膜下腔或通过视网膜下注射治疗剂产生的泡中的单极负电极)。在一些实施例中，电极是双极电极(例如，双极电极被定位成使得负电极接触视网膜、视网膜下腔或通过视网膜下注射治疗剂产生的泡，并且正电极位于玻璃体中)。在其他实施例中，通过视网膜下注射将治疗剂递送至细胞外空间(例如，治疗剂已经在视网膜下施用并且处于用于电转移至靶视网膜细胞的位置)。在其他实施例中，通过玻璃体内注射将治疗剂递送至细胞外空间。在一些实施例中，将治疗剂递送至视网膜的细胞外空间也被包括作为上述方法的一部分。在一些实施例中，治疗剂(例如，核酸载体，例如，非病毒核酸载体，例如，裸核酸载体，例如，合成的环状dna载体)的递送是通过视网膜下注射。在其他实施例中，治疗剂的递送是通过玻璃体内注射进行的。在其中治疗剂是核酸载体(例如，非病毒核酸载体，例如裸核酸载体，例如合成的环状dna载体)的一些实施例中，核酸由靶细胞(例如，视网膜细胞，例如视网膜色素上皮(rpe)细胞和/或光感受器细胞)表达。因此，本文所述的递送方法可能是表达目的序列(例如，治疗性序列)的方法。
3、在一些实施例中，接触电极的眼的内部区域包括玻璃体液(例如，电极完全在玻璃体液内)。在一些实施例中，在发射一个或多个电能脉冲后，电极在距视网膜10mm以内(例如，距视网膜10mm、5mm或1mm以内，但不直接接触视网膜)。在电极位于玻璃体液中的一些实施例中，电极是正电极并且施加的电压是正电压(例如，电极位于玻璃体液中，电极是单极正电极并且治疗剂是核酸载体(例如dna载体或rna载体)，例如非病毒核酸载体，例如裸核酸载体。
4、在一些实施例中，在发射一个或多个电能脉冲后，电极直接接触视网膜(和/或视网膜下泡)。在一些实施例中，在发射一个或多个电能脉冲后，电极距视网膜0.1mm至10mm。在一些实施例中，在发射一个或多个电能脉冲后，电极距视网膜0.5mm至10mm。
5、在一些实施例中，接触电极的眼的内部区域包括视网膜。例如，电极可以完全位于视网膜下腔内，或者其可以部分位于视网膜下腔内(例如，接触视网膜下泡)。在电极与视网膜、视网膜下腔或视网膜下泡接触的一些实施例中，电极是负电极(例如，阴极)并且施加的电压是负电压(例如，电极与视网膜、视网膜下腔或视网膜下泡接触，电极是单极负电极(例如，阴极)，并且治疗剂是核酸载体(例如，本文描述的任何dna载体或rna载体)，例如，非病毒核酸载体，例如裸核酸载体。
6、在一些实施例中，适于将治疗剂(例如核酸载体，例如非病毒核酸载体，例如裸核酸载体，例如合成环状dna载体)电转移到靶视网膜细胞中的条件包括靶视网膜细胞处的场强为1v/cm至1,500v/cm(1v/cm至10v/cm(例如约1v/cm、约2v/cm、约3v/cm、约4v/cm、约5v/cm、约6v/cm、约7v/cm、约8v/cm、约9v/cm或约10v/cm)、约10v/cm至约100v/cm(例如约10v/cm、约20v/cm、约30v/cm、约40v/cm、约50v/cm、约60v/cm、约70v/cm、约80v/cm、约90v/cm或约100v/cm)、约100v/cm至约1,000v/cm(例如约200v/cm、约300v/cm、约400v/cm、约500v/cm、约600v/cm、约700v/cm、约800v/cm、约900v/cm或约1,000v/cm)或1,000v/cm至1,500v/cm(例如约1,000v/cm、约1,100v/cm、约1,200v/cm、约1,300v/cm、约1,400v/cm或约1,500v/cm))。在一些实施例中，靶细胞处的场强为50v/cm至300v/cm。在一些实施例中，靶细胞处的场强为约100v/cm。
7、在一些实施例中，适于将治疗剂(例如核酸载体，例如非病毒核酸载体，例如裸核酸载体，例如合成环状dna载体)电转移到靶视网膜细胞中的条件包括由脉冲电场产生的电流10a至1a(例如10μa至500ma、10μa至200ma、10μa至100ma、10μa至50ma或10μa至25ma；例如，50μa至500ma、100μa至200ma、或1ma至100ma；例如10μa至20μa、20μa至30μa、30μa至50μa、50μa至100μa、100μa至150μa、150μa至200μa、200μa至300μa、300μa至400μa、400μa至500μa、500μa至600μa、600μa至800μa、800μa至1ma、1ma至10ma、10ma至20ma、20ma至30ma、30ma至40ma、40ma至50ma、50ma至60ma、60ma至70ma、70ma至80ma、80ma至90ma、90ma至100ma、100ma至200ma、20本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种将治疗剂递送至个体的靶视网膜细胞中的方法，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗剂的递送是通过视网膜下注射进行的。
4.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗剂的递送是通过玻璃体内注射进行的。
5.如权利要求1所述的方法，其中通过视网膜下注射将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
6.如权利要求1所述的方法，其中通过玻璃体内注射将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含玻璃体液。
8.如权利要求7所述的方法，其中在发射所述一个或多个电能脉冲后，所述电极在所述视网膜的10mm内。
9.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜。
10.如权利要求9所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜下腔。
11.如权利要求1-10中任
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中发射1-12个电能脉冲。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中在1-20秒内发射电能脉冲的总数。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲是方波形。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲具有5V至250V的幅度。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲中的每个的持续时间是10至200毫秒。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是视网膜上皮细胞。
18.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是光感受器。
19.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是核酸载体。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述核酸载体是非病毒核酸载体。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述非病毒核酸载体是环状DNA载体。
22.如权利要求19-21中任一项所述的方法，其中所述非病毒核酸载体编码治疗性替代蛋白，所述治疗性替代蛋白替代在健康视网膜细胞中内源表达的蛋白。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白替代在所述个体的靶细胞中不内源表达或在所述个体的靶细胞中无功能的蛋白。
24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白由大于4.5kb的编码序列编码。
25.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是MYO7A。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述方法是治疗所述个体的乌谢尔综合征1B的方法。
27.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是BEST1。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述方法是治疗与BEST1显性突变或BEST1隐性突变相关的嗜酸细胞病的方法。
29.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是CFH。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述方法是治疗年龄相关性黄斑变性的方法。
31.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是ABCA4。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述方法是治疗ABCA4相关性视网膜营养不良的方法。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述ABCA4相关性视网膜营养不良是斯塔格特病。
34.一种将治疗剂递送至个体的靶视网膜细胞中的方法，所述方法包括：
35.如权利要求34所述的方法，其进一步包括将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述治疗剂的递送是通过脉络膜上注射进行的。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含玻璃体液。
38.如权利要求37所述的方法，其中在发射所述一个或多个电能脉冲后，所述电极在所述视网膜的10mm内。
39.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜。
40.如权利要求39所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种将治疗剂递送至个体的靶视网膜细胞中的方法，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗剂的递送是通过视网膜下注射进行的。
4.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗剂的递送是通过玻璃体内注射进行的。
5.如权利要求1所述的方法，其中通过视网膜下注射将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
6.如权利要求1所述的方法，其中通过玻璃体内注射将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含玻璃体液。
8.如权利要求7所述的方法，其中在发射所述一个或多个电能脉冲后，所述电极在所述视网膜的10mm内。
9.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜。
10.如权利要求9所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜下腔。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中适合于将所述治疗剂电转移至所述靶视网膜细胞中的条件包括所述靶视网膜细胞处的场强为10v/cm至1,500v/cm。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中发射1-12个电能脉冲。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中在1-20秒内发射电能脉冲的总数。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲是方波形。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲具有5v至250v的幅度。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲中的每个的持续时间是10至200毫秒。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是视网膜上皮细胞。
18.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是光感受器。
19.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是核酸载体。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述核酸载体是非病毒核酸载体。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述非病毒核酸载体是环状dna载体。
22.如权利要求19-21中任一项所述的方法，其中所述非病毒核酸载体编码治疗性替代蛋白，所述治疗性替代蛋白替代在健康视网膜细胞中内源表达的蛋白。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白替代在所述个体的靶细胞中不内源表达或在所述个体的靶细胞中无功能的蛋白。
24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白由大于4.5kb的编码序列编码。
25.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是myo7a。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述方法是治疗所述个体的乌谢尔综合征1b的方法。
27.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是best1。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述方法是治疗与best1显性突变或best1隐性突变相关的嗜酸细胞病的方法。
29.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是cfh。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述方法是治疗年龄相关性黄斑变性的方法。
31.如权利要求22或23所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是abca4。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述方法是治疗abca4相关性视网膜营养不良的方法。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述abca4相关性视网膜营养不良是斯塔格特病。
34.一种将治疗剂递送至个体的靶视网膜细胞中的方法，所述方法包括：
35.如权利要求34所述的方法，其进一步包括将所述治疗剂递送至所述视网膜的细胞外空间。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述治疗剂的递送是通过脉络膜上注射进行的。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含玻璃体液。
38.如权利要求37所述的方法，其中在发射所述一个或多个电能脉冲后，所述电极在所述视网膜的10mm内。
39.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜。
40.如权利要求39所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜下腔。
41.如权利要求34-40中任一项所述的方法，其中适合于将所述治疗剂电转移至所述靶视网膜细胞中的条件包括所述靶视网膜细胞处的场强为10v/cm至1,500v/cm。
42.如权利要求34-41中任一项所述的方法，其中发射1-12个电能脉冲。
43.如权利要求34-42中任一项所述的方法，其中在1-20秒内发射电能脉冲的总数。
44.如权利要求34-43中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲是方波形。
45.如权利要求34-44中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲具有5v至250v的幅度。
46.如权利要求34-45中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲中的每个的持续时间是10至200毫秒。
47.如权利要求34-46中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是视网膜上皮细胞。
48.如权利要求34-47中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是光感受器。
49.如权利要求34-48中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是核酸载体。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述核酸载体是非病毒核酸载体。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述非病毒核酸载体是环状dna载体。
52.如权利要求49-51中任一项所述的方法，其中所述非病毒核酸载体编码治疗性替代蛋白，所述治疗性替代蛋白替代在健康视网膜细胞中内源表达的蛋白。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白替代在所述个体的靶细胞中不内源表达或在所述个体的靶细胞中无功能的蛋白。
54.如权利要求52或53所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白由大于4.5kb的编码序列编码。
55.如权利要求52-54中任一项所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是myo7a。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述方法是治疗所述个体的乌谢尔综合征1b的方法。
57.如权利要求52或53所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是best1。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述方法是治疗与best1显性突变或best1隐性突变相关的嗜酸细胞病的方法。
59.如权利要求52或53所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是cfh。
60.如权利要求59所述的方法，其中所述方法是治疗年龄相关性黄斑变性的方法。
61.一种治疗视网膜营养不良的方法，所述方法包括将环状dna载体经脉络膜上注射至患有视网膜营养不良的个体的眼中，其中所述视网膜营养不良的特征在于缺乏视网膜蛋白的表达，其中所述环状dna载体包含一个或多个治疗性基因，所述一个或多个治疗性基因编码治疗性替代蛋白以替代所述视网膜蛋白。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述环状dna载体是裸环状dna载体。
63.如权利要求61或62所述的方法，其中所述环状dna载体缺乏细菌起点或复制和/或药物抗性基因。
64.如权利要求61-63中任一项所述的方法，其中所述环状dna载体缺乏重组位点。
65.如权利要求61-64中任一项所述的方法，其进一步包括：
66.如权利要求65所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含玻璃体液。
67.如权利要求66所述的方法，其中在发射所述一个或多个电能脉冲后，所述电极距所述视网膜0.5mm至10mm。
68.如权利要求65-67中任一项所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜。
69.如权利要求68所述的方法，其中接触所述电极的眼的所述内部区域包含视网膜下腔。
70.如权利要求65-69中任一项所述的方法，其中适合于将所述治疗剂电转移至所述靶视网膜细胞中的条件包括所述靶视网膜细胞处的场强为10v/cm至1,500v/cm。
71.如权利要求65-70中任一项所述的方法，其中发射4-12个电能脉冲。
72.如权利要求65-71中任一项所述的方法，其中在1-20秒内发射电能脉冲的总数。
73.如权利要求65-72中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲是方波形。
74.如权利要求65-73中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲具有5v至250v的幅度。
75.如权利要求65-74中任一项所述的方法，其中所述电能脉冲中的每个的持续时间是10至200毫秒。
76.如权利要求65-75中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是视网膜上皮细胞。
77.如权利要求65-76中任一项所述的方法，其中所述靶视网膜细胞是光感受器。
78.如权利要求61-77中任一项所述的方法，其中所述一个或多个治疗性基因大于4.5kb。
79.如权利要求61-78中任一项所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是myo7a。
80.如权利要求61-79中任一项所述的方法，其中所述视网膜营养不良是乌谢尔综合征1b。
81.如权利要求61-80中任一项所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是best1。
82.如权利要求61-78或81中任一项所述的方法，其中所述视网膜营养不良是与best1显性突变或best1隐性突变相关的嗜酸细胞病。
83.如权利要求61-78中任一项所述的方法，其中所述治疗性替代蛋白是cfh。
84.如权利要求61-78或83中任一项所述的方法，其中所述视网膜营养不良是年龄相关性黄斑变性。
85.一种装置，其包括：
86.如权利要求85所述的装置，其中所述预形成的角度基本上是直角。
87.如权利要求85或86所述的装置，其中所述预形成的角度是约70度或约110度。
88.如权利要求85所述的装置，其中所述预形成的角度是约45度至约135度。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·法拉，查卡·卡马扎尔，盖亚思里·拉马斯瓦米，凯瑟琳·冈萨雷斯，罗萨里奥·费尔南德斯戈迪诺，
申请(专利权)人：星际治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：
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