【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药，具体地，涉及一种支持cho细胞高密度增殖的无血清培养基及其应用。
技术介绍
1、多种哺乳动物宿主细胞已用于生产治疗性蛋白质，包括cho细胞、bhk细胞、hek-293细胞等。其中，cho细胞具有良好的基因组背景特征，并且在悬浮培养中具有相对较快的生长速度和较高的蛋白表达量，因此cho细胞是生物制品行业常用的细胞系。目前市场上进口和国产的生物公司均有cho细胞无血清培养基，但价格较为昂贵，使用成本高，因此开发一种能够满足支持cho细胞增殖生长和蛋白表达，且成本低廉的无血清培养基成为市场上亟需要解决的技术问题。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的技术问题，本专利技术的目的在于提供了一种不添加动物血清、制备成本低廉、且能支持cho细胞高密度增殖及细胞中目的蛋白高表达的无血清培养基。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
3、本专利技术的第一方面提供了一种支持cho细胞高密度增殖的无血清培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括的各组分在无血清培养基中的浓度如下：微量元素0.27-2.16μg/l、激素类物质0.01-0.05mg/l、嘌呤和嘧啶类物质为10-20mg/l、蛋白水解物3-5g/l、维生素c10-20mg/l、脂质混合物0.1wt％、itse 1wt％、β-巯基乙醇10-20μm、谷胱甘肽0.5-1mg/l、大豆卵磷脂20-30mg/l、谷氨酰胺4-5mm、吐温80 10-20mg/l、4-羟乙基哌嗪乙磺酸
4、优选地，所述基础培养基为dmem/f12。
5、优选地，所述微量元素包括以下浓度的各组分：四水硫酸锰0.08-0.3μg/l、六水氯化铝0.01-0.1μg/l、四水钼酸铵0.001-0.01mg/l、偏钒酸钠0.1-0.9μg/l、硫酸钡0.01-0.1μg/l、氯化镍0.05-0.5μg/l和氯化锡0.02-0.25μg/l。
6、优选地，所述嘌呤和嘧啶类物质包括以下浓度的各组分：次黄嘌呤4-10mg/l、胸腺嘧啶0.3-1.2mg/l、鸟嘌呤6-9mg/l。
7、优选地，所述激素类添加物包括以下浓度的各组分：地塞米松0.01-0.05mg/l、氢化可的松0.001-0.003mg/l。
8、优选地，所述蛋白水解物为酵母水解物。
9、本专利技术的第二方面提供了上述无血清培养基在悬浮培养cho细胞中的应用。
10、优选地，所述无血清培养基悬浮培养cho细胞的方法，包括以下步骤：
11、s1、向dmem/f12中加入微量元素、激素类物质、嘌呤和嘧啶类物质为、蛋白水解物、维生素c、脂质混合物、itse、β-巯基乙醇、谷胱甘肽、大豆卵磷脂、谷氨酰胺、吐温80、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、金精三羧酸、γ-氨基丁酸，待全部物质完全溶解后再加1g/l碳酸氢钠后充分混匀，定容，调节ph值至7.0-7.4，过滤除菌，得到无血清培养基，在2-8℃保存备用；
12、s2、将cho细胞接种到上述无血清培养基中，不添加血清，置于32-37℃，120-180rpm，5％co2的培养箱中培养。
13、优选地，步骤s2中，所述接种时的接种量为8-10×105/ml。
14、优选地，所述cho细胞为cho-k1、cho-s、cho-dg44或者cho-gs细胞。
15、本专利技术的有益效果：
16、1、本专利技术技术方案中，制备的无血清培养基易于制备，成本低廉，适用于cho细胞的高密度增殖培养；
17、2、本专利技术技术方案中，制备的无血清培养基中通过添加γ-氨基丁酸，能够明显提高多种目的蛋白的表达量：通过培养cho-k1细胞，能够高表达非洲猪瘟蛋白、抗禽流感病毒抗体、vegf单克隆抗体、scfv-fc融合抗体；通过培养cho-s细胞，能够高表达人源化抗rsv病毒抗体；通过培养cho-gs细胞，能高表达pd-l1单克隆抗体；通过培养cho/dg44细胞，能够高表达il35-igg4(fc)融合抗体和ctla-4/ig融合抗体。适用于cho细胞的大规模培养和应用。
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1.一种支持CHO细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加剂，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括的各组分在无血清培养基中的浓度如下：微量元素0.27-2.16μg/L、激素类物质0.01-0.05mg/L、嘌呤和嘧啶类物质为10-20mg/L、蛋白水解物3-5g/L、维生素C10-20mg/L、脂质混合物0.1wt％、ITSE 1wt％、β-巯基乙醇10-20μM、谷胱甘肽0.5-1mg/L、大豆卵磷脂20-30mg/L、谷氨酰胺4-5mM、吐温80 10-20mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸10-15mM、金精三羧酸5-15mg/L、γ-氨基丁酸10-15mM。
2.根据权利要求1所述的支持CHO细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12。
3.根据权利要求1所述的支持CHO细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述微量元素包括以下浓度的各组分：四水硫酸锰0.08-0.3μg/L、六水氯化铝0.01-0.1μg/L、四水钼酸铵0.001-0.01mg/L、偏钒酸钠0.1-0.9μg/L、硫酸钡0
4.根据权利要求3所述的支持CHO细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述嘌呤和嘧啶类物质包括以下浓度的各组分：次黄嘌呤4-10mg/L、胸腺嘧啶0.3-1.2mg/L、鸟嘌呤6-9mg/L。
5.根据权利要求1所述的支持CHO细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述激素类添加物包括以下浓度的各组分：地塞米松0.01-0.05mg/L、氢化可的松0.001-0.003mg/L。
6.根据权利要求1所述的支持CHO细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述蛋白水解物为酵母水解物。
7.如权利要求1-6中任一项所述的无血清培养基在悬浮培养CHO细胞中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述无血清培养基悬浮培养CHO细胞的方法，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤S2中，所述接种时的接种量为8-10×105/mL。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述CHO细胞为CHO-K1、CHO-S、CHO-DG44或者CHO-GS细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种支持cho细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加剂，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括的各组分在无血清培养基中的浓度如下：微量元素0.27-2.16μg/l、激素类物质0.01-0.05mg/l、嘌呤和嘧啶类物质为10-20mg/l、蛋白水解物3-5g/l、维生素c10-20mg/l、脂质混合物0.1wt％、itse 1wt％、β-巯基乙醇10-20μm、谷胱甘肽0.5-1mg/l、大豆卵磷脂20-30mg/l、谷氨酰胺4-5mm、吐温80 10-20mg/l、4-羟乙基哌嗪乙磺酸10-15mm、金精三羧酸5-15mg/l、γ-氨基丁酸10-15mm。
2.根据权利要求1所述的支持cho细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基为dmem/f12。
3.根据权利要求1所述的支持cho细胞高密度增殖的无血清培养基，其特征在于，所述微量元素包括以下浓度的各组分：四水硫酸锰0.08-0.3μg/l、六水氯化铝0.01-0.1μg/l、四水钼酸铵0.001-0.01mg/l、偏钒酸钠0.1-0.9μg/l、硫酸钡0.01-0.1μg/l、氯化镍0.05-0...
【专利技术属性】
技术研发人员：王进产，张兰兰，康笃利，
申请(专利权)人：洛阳赛奥生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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