【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及精液冷冻技术，特别涉及一种犬用精液冷冻稀释液的制备方法及其使用方法。
技术介绍
1、伴随着宠物犬行业的兴起，犬类人工授精技术发挥着越来越重要的作用，而犬精液保存技术大大提高了人工授精技术的效率。与精液常温和低温保存技术相比，精液冷冻保存技术不仅能将精液长期保存，还能实现优良的公犬精液长距离运输，提高公犬生产性能，加快品种改良。因此提高犬精液冷冻保存技术对犬业的发展意义重大。
2、尽管精液冷冻保存技术越来越普及，但解冻后的犬精液的授精效果仍不是很稳定。主要原因之一是在正常情况下，精液自身具有完善的抗氧化系统，但经过冷冻处理的精液，抗氧化平衡被打破，解冻后的精子细胞内存在高浓度的ros，会与精子质膜发生脂质过氧化反应，降低精子的运动性能及受精能力，甚至导致精子死亡。除此之外，相比于牛、羊等动物的精子，犬精子细胞膜中的胆固醇：卵磷脂比例更高，更多的不饱和脂肪酸会使精子对脂质过氧化反应更加敏感，抗冻能力更差。为此本专利技术提出一种犬用精液冷冻稀释液的制备方法及其使用方法，可以有效提高解冻后犬精子活率、活力、运动性能、膜完整性等，改善犬精液冷冻保存效果，提高犬类人工授精技术的成功率。
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的在于克服现有精液冷冻稀释液存在的缺点和不足，提供一种犬用精液冷冻稀释液的制备方法及其使用方法。
2、本专利技术所采用的技术方案是：
3、一种犬用精液冷冻稀释液，由以下成分组成：tris 2.4g，柠檬酸1.4g，葡萄糖0.8
4、作为优选的，制备方法为：
5、s1、所述犬用精液冷冻稀释液配制时，采用磁力搅拌器、56℃下持续搅拌40min；
6、s2、所述犬用精液冷冻稀释液配制完成后，分装于5ml离心管中，-80℃冰箱中保存。
7、作为优选的，使用方法为：
8、(a)采集公犬精液后迅速进行精液品质检测，选用精子活率大于90％，活力大于80％，密度大于1.0x108个/ml的精液冷冻保存；
9、(b)将配制好的犬用精液冷冻稀释液从-80℃冰箱取出，放入37℃水浴锅中解冻后待用；
10、(c)将精液离心，去除精浆，加入犬用精液冷冻稀释液使精液密度保持在1.0x108个/ml，摇晃均匀；
11、(d)分装到0.5ml精液冷冻细管中，置于4℃冰箱中平衡2h，将精液细管悬浮于液氮面6cm处液氮熏蒸10min，然后快速没入液氮中保存即可。
12、作为优选的，对精液离心时，温度设定为37℃，离心力800g，时间10min。
13、本专利技术的有益效果为：
14、本专利技术犬用精液冷冻稀释液，在基础稀释液的内添加了二甲双胍、bsa和丝胶蛋白等成分，降低了精子在冷冻解冻过程中的氧化损伤，有效保持了冻融过程中精子膜内外渗透压，使精子维持较高的线粒体膜点位，提高了解冻后犬精子活率、活力、运动性能、膜完整性，改善了犬精液冷冻保存效果。
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1.一种犬用精液冷冻稀释液，其特征在于，由以下成分组成：Tris 2.4g，柠檬酸1.4g，葡萄糖0.8g，链霉素0.1g，青霉素0.06g，甘油7mL，卵黄20mL，二甲双胍40μmol/L，BSA 2.5g，丝胶蛋白0.3g，加双蒸水定容至100mL。
2.根据权利要求1所述的一种犬用精液冷冻稀释液，其特征在于，制备方法为：
3.根据权利要求2所述的一种犬用精液冷冻稀释液，其特征在于，使用方法为：
4.根据权利要求3所述的一种犬用精液冷冻稀释液，其特征在于，对精液离心时，温度设定为37℃，离心力800g，时间10min。
【技术特征摘要】
1.一种犬用精液冷冻稀释液，其特征在于，由以下成分组成：tris 2.4g，柠檬酸1.4g，葡萄糖0.8g，链霉素0.1g，青霉素0.06g，甘油7ml，卵黄20ml，二甲双胍40μmol/l，bsa 2.5g，丝胶蛋白0.3g，加双蒸水定容至100ml。
2.根据权利要...
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