一种糖基转移酶UGT91C1突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种糖基转移酶UGT91C1突变体，为(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的蛋白质；或者(b)在如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸序列、并且具有催化莱鲍迪苷A为莱鲍迪苷D的酶活性的由(a)衍生的蛋白质。本发明专利技术还公开了编码权利要求1所述的糖基转移酶UGT91C1突变体的基因序列等。本发明专利技术通过定点突变显著提高了糖基转移酶UGT91C1的酶活，与野生型糖基转移酶UGT91C1相比，最优突变体酶活提高达4.42倍，因而能够显著降低酶的使用量。本发明专利技术将糖基转移酶UGT91C1突变体与蔗糖合酶SUS分别于毕赤酵母中进行异源表达，不需纯化，利用粗酶液构建“UDP‑UDPG”的循环再生体系，避免了额外添加UDPG作为糖基供体，因而可以显著降低成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物酶工程，具体地说，是一种糖基转移酶ugt91c1突变体及其应用。

技术介绍

1、近年来，全世界范围内龋齿、肥胖症、糖尿病、高血压、心血管疾病的患病风险不断增加，因此，消费者对低热量或无热量甜味剂的需求不断增加。从甜叶菊中提取得到的甜菊糖苷因其高甜度(是蔗糖的50-450倍)、无热量、安全，被认为是目前最具吸引力的甜味剂。此外，甜菊糖苷还被发现具有重要的药理活性，如降糖、降压、利尿、抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用。如今已从甜叶菊中发现六十余种甜菊糖苷，其中甜菊糖(占叶子干重的5-10％)和莱鲍迪苷a(reb a，占叶子干重的2-4％)是含量最丰富的两种成分，也是目前市面上商用的甜菊糖苷类添加剂的主要成分。但甜菊糖和莱鲍迪苷a均存在较为明显的后苦味，相比之下，莱鲍迪苷d(reb d)具有更好的口感特性，是甜菊糖苷类甜味剂开发的新方向，甜菊糖苷相关的结构物质的毒性研究也证实了reb d食用安全，可用于食品药品等领域。2017年，美国食品药品监督管理局fda也认证reb d为“gras(generally recognized as safe，总体认本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种糖基转移酶UGT91C1突变体，其特征在于，所述突变体为：

2.编码权利要求1所述的糖基转移酶UGT91C1突变体的基因序列。

3.根据权利要求1所述的糖基转移酶UGT91C1突变体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述的密码子优化的UGT91C1基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体克隆有编码权利要求1所述的糖基转移酶UGT91C1突变体的基因序列。

6.一种毕赤酵母重组菌株，其特征在于，所述重组菌株克隆有...

【技术特征摘要】

1.一种糖基转移酶ugt91c1突变体，其特征在于，所述突变体为：

2.编码权利要求1所述的糖基转移酶ugt91c1突变体的基因序列。

3.根据权利要求1所述的糖基转移酶ugt91c1突变体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中所述的密码子优化的ugt91c1基因的序列如seq id no.1所示。

5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体克隆有编码权利要求1所述的糖基转移酶ugt91c1突变体的基因序列。

6.一种毕赤酵母重组菌株，其特征在于，所述重组菌株克隆有权利要求5所述的重组表达载体。

7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明义，窦培冲，平千，柳清霞，陈煜乾，仝金皖，李慧婷，朱梦丹，张莲莲，
申请(专利权)人：铭诚惠众江苏药物研究有限公司，
类型：发明
国别省市：