蛋白酶识别酶、慢病毒重组载体、细胞系及其应用制造技术

技术编号:40189857 阅读:23 留言:0更新日期:2024-01-26 23:52
本发明专利技术涉及生物技术领域,尤其涉及蛋白酶识别酶、慢病毒重组载体、细胞系及其应用。本发明专利技术提供了蛋白酶识别酶,其具有:如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明专利技术构建了检测细胞内蛋白酶体活性的A549‑EGFPc和Hela‑EGFPc细胞系。相较于现有蛋白酶识别酶,本发明专利技术检测灵敏度提高30~40%,可通过细胞系中绿色荧光积累情况定量判断蛋白酶体损伤程度;本发明专利技术对病毒感染造成的蛋白酶体损伤也具有显著的定量检测效率,弥补了无法定量检测病毒感染对蛋白酶体损伤的不足;本发明专利技术构建的细胞系传代50代后依然具有稳定性。因此,本发明专利技术在检测灵敏度、稳定性、应用范围方面显著提高,具有广阔的应用前景和工业使用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物,尤其涉及蛋白酶识别酶、慢病毒重组载体、细胞系及其应用


技术介绍

1、蛋白酶体降解系统是细胞体内依赖atp活性的非溶酶体蛋白降解系统,该系统可以通过泛素化、磷酸化等多种机制高效、选择性地降解蛋白,体内大多数蛋白的降解都是通过蛋白酶体系统降解的,蛋白酶体活性的高低直接决定着细胞内蛋白降解的速率。蛋白酶体活性在调控细胞周期、调控细胞死亡和细胞应激反应等方面具有重要作用,目前研究也发现,蛋白酶体系统的活性降低会引起充血性心力衰竭等心血管疾病的发生,在心血管病研究中具有广阔的应用前景。

2、蛋白酶体活性直接决定着宿主细胞正常分解蛋白的速率,对细胞的正常代谢起着非常重要的作用。病毒感染,尤其是流感等感染可能会损坏蛋白酶体活性,损伤机体细胞,但是,目前缺乏直接量化蛋白酶体活性的指标和系统,现有的泛素化检测系统存在一定的缺陷,其无法直接检测病毒感染对蛋白酶体活性的损伤,也无法检测由病毒等感染对蛋白酶体系统造成的损伤。因此,急需能够直接量化细胞中蛋白酶体活性的系统和细胞系,检测系统在检测灵敏度、检测稳定性、检测范围等方面也急需改善提高。...

【技术保护点】

1.蛋白酶识别酶,其特征在于,其具有:

2.编码如权利要求1所述蛋白酶识别酶的核酸分子,其特征在于,其具有:

3.慢病毒重组载体,其特征在于,包括如权利要求2所述的核酸分子、荧光蛋白基因和慢病毒载体。

4.如权利要求3所述的慢病毒重组载体,其特征在于,所述荧光蛋白基因包括:EGFPc基因。

5.如权利要求3或4所述的慢病毒重组载体的制备方法,其特征在于,取酶切后的所述慢病毒载体与所述核酸分子和所述荧光蛋白基因连接,获得所述慢病毒重组载体。

6.慢病毒,其特征在于,转化和/或转染如权利要求3或4所述的慢病毒重组载体和/或如权利要求...

【技术特征摘要】

1.蛋白酶识别酶,其特征在于,其具有:

2.编码如权利要求1所述蛋白酶识别酶的核酸分子,其特征在于,其具有:

3.慢病毒重组载体,其特征在于,包括如权利要求2所述的核酸分子、荧光蛋白基因和慢病毒载体。

4.如权利要求3所述的慢病毒重组载体,其特征在于,所述荧光蛋白基因包括:egfpc基因。

5.如权利要求3或4所述的慢病毒重组载体的制备方法,其特征在于,取酶切后的所述慢病毒载体与所述核酸分子和所述荧光蛋白基因连接,获得所述慢病毒重组载体。

6.慢病毒,其特征在于,转化和/或转染如权利要求3或4所述的慢病毒重组载体和/或如权利要求5所述制备方法获得的慢病毒重组载体。<...

【专利技术属性】
技术研发人员:马骁李红霞任乐豪蒋廷波张悦谭铭月蒋彬钱晓东贺永明宣勤考
申请(专利权)人:苏州大学附属第一医院
类型:发明
国别省市:

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