【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种副猪嗜血杆菌的抗原组合物、多组分亚单位疫苗和应用。
技术介绍
1、副猪嗜血杆菌病，又称格拉泽氏病(disease，gd)，是由副猪嗜血杆菌(haemophilusparasuis，hps)感染引起的一种以引起纤维性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等为特征的猪细菌性疾病。以前副猪嗜血杆菌病偶有发生，且多是由应激因素引起。然而，近年来随着规模化养殖和免疫抑制性疾病的出现导致该病的发病率有所上升，且在无明显应激条件下，hps与多种病毒、细菌、支原体如猪蓝耳、猪瘟、圆环病毒、伪狂犬病毒等病原混合感染，导致该病的流行率增加，给全球养猪业造成巨大的经济损失。hps是一类细小多形态的革兰氏阴性细菌群，其结构复杂多样，体外分离培养条件较为苛刻且血清型众多，不同血清型之间交叉保护力弱。
2、hps感染通常使用抗生素治疗，然而在目前“禁抗”大背景下，疫苗接种配合优化的养殖管理措施和生物安全防护成为防控副猪嗜血杆菌病最有效的措施。迄今为止，已有副猪嗜血杆菌灭活疫苗、亚单位疫苗、dna疫苗和减毒疫苗的报道。由于保护效力低或交叉保护差等原因，传统疫苗的效果具有一定的局限性，需要更为高效广谱的疫苗开发策略。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种副猪嗜血杆菌的抗原组合物、多组分亚单位疫苗和应用，所述多组分亚单位疫苗免疫效果良好。
2、本专利技术提供了一种副猪嗜血杆菌的抗原组合物，包括利用生物信息学筛选到的副猪嗜血杆菌的抗原蛋白和在副猪嗜
3、所述抗原蛋白筛选自以下至少一种：wp_160414405.1、wp_035493594.1、wp_160414389.1和wp_005713149.1。
4、优选的，所述在副猪嗜血杆菌生长代谢中发挥重要作用的蛋白包括铁离子abc转运底物结合蛋白afua、abc结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶oppa和多胺转运蛋白potd中的至少一种。
5、本专利技术还提供了一种副猪嗜血杆菌的混合蛋白抗原，包含wp_035493594.1、铁离子abc转运底物结合蛋白afua、abc结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶oppa和多胺转运蛋白potd。
6、本专利技术还提供了用于防治副猪嗜血杆菌的生物材料，所述生物材料包括下述任一种：
7、1)核酸分子组合物，所述核酸分子组合物包括编码上述抗原组合物中任一项抗原蛋白和在副猪嗜血杆菌生长代谢中发挥重要作用的蛋白的核酸分子；
8、2)表达上述混合蛋白抗原的重组载体组合物；
9、3)表达上述混合蛋白抗原的重组微生物组合物；
10、4)表达上述混合蛋白抗原的重组细胞组合物。
11、优选的，所述重组载体组合物的基础载体包括原核表达载体。
12、优选的，所述原核表达载体包括pet-32a和/或pet-30a。
13、本专利技术还提供了上述抗原组合物或上述混合蛋白抗原或上述生物材料的下述任一种应用：
14、1)在制备用于预防和/或治疗副猪嗜血杆菌感染所引起的疾病的产品中的应用；
15、2)在制备用于诱导副猪嗜血杆菌抗原的免疫反应的药剂中的应用；
16、3)在制备预防副猪嗜血杆菌感染所引起的疾病的疫苗中的应用；
17、4)在制备抗副猪嗜血杆菌药物中的应用。
18、本专利技术还提供了一种副猪嗜血杆菌多组分基因工程亚单位疫苗，包括上述抗原组合物或上述混合蛋白抗原或上述生物材料，还包括佐剂。
19、优选的，所述佐剂的类型包括弗氏佐剂或油包水佐剂。
20、优选的，所述wp_035493594.1、铁离子abc转运底物结合蛋白afua、abc结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶oppa和多胺转运蛋白potd的质量比为1:1:1:1。
21、有益效果：本专利技术通过生物信息学方法筛选获得4个候选抗原蛋白(ncbi登录号分别为：wp_160414405.1、wp_035493594.1、wp_160414389.1和wp_005713149.1)。实施例中选择wp_035493594.1(蛋白命名为：hem-sap)和在hps生长代谢中发挥重要作用的3种蛋白(分别是铁离子abc转运底物结合蛋白afua、abc结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶oppa和多胺转运蛋白potd)作为多组分亚单位疫苗的候选抗原蛋白。通过原核表达系统制备重组抗原蛋白免疫小鼠进行免疫原性评价。在此基础上，将上述筛选后的hem-sap、afua、oppa和potd四种重组抗原蛋白按照比例混合后配合佐剂制备多组分疫苗免疫小鼠，利用hps ysk01毒株进行攻毒后观察并记录小鼠的发病和死亡情况，从而评价本专利技术所制备的多组分亚单位疫苗的免疫保护效果，由hem-sap、afua、oppa和potd 4种重组抗原蛋白组成的副猪嗜血杆菌多组分亚单位疫苗，对于hps ysk01株的感染可以提供一定的免疫保护效力，可以作为一种疫苗使用。
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1.一种副猪嗜血杆菌的抗原组合物，其特征在于，包括利用生物信息学技术筛选到的副猪嗜血杆菌的抗原蛋白和在副猪嗜血杆菌生长代谢中发挥重要作用的蛋白；
2.根据权利要求1所述抗原组合物，其特征在于，所述在副猪嗜血杆菌生长代谢中发挥重要作用的蛋白包括铁离子ABC转运底物结合蛋白AfuA、ABC结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶OppA和多胺转运蛋白PotD中的至少一种。
3.一种副猪嗜血杆菌的混合蛋白抗原，其特征在于，包含WP_035493594.1、铁离子ABC转运底物结合蛋白AfuA、ABC结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶OppA和多胺转运蛋白PotD。
4.用于防治副猪嗜血杆菌的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括下述任一种：
5.根据权利要求4所述生物材料，其特征在于，所述重组载体组合物的基础载体包括原核表达载体。
6.根据权利要求5所述生物材料，其特征在于，所述原核表达载体包括pET-32a和/或pET-30a。
7.权利要求1或2所述抗原组合物或权利要求3所述混合蛋白抗原或权利要求4～6任一项所述生物材料的下
8.一种副猪嗜血杆菌多组分基因工程亚单位疫苗，其特征在于，包括权利要求1或2所述抗原组合物或权利要求3所述混合蛋白抗原或权利要求4～6任一项所述生物材料，还包括佐剂。
9.根据权利要求8所述多组分基因工程亚单位疫苗，其特征在于，所述佐剂的类型包括弗氏佐剂或油包水型佐剂。
10.根据权利要求8所述多组分基因工程亚单位疫苗，其特征在于，所述WP_035493594.1、铁离子ABC转运底物结合蛋白AfuA、ABC结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶OppA和多胺转运蛋白PotD的质量比为1:1:1:1。
...【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌的抗原组合物，其特征在于，包括利用生物信息学技术筛选到的副猪嗜血杆菌的抗原蛋白和在副猪嗜血杆菌生长代谢中发挥重要作用的蛋白；
2.根据权利要求1所述抗原组合物，其特征在于，所述在副猪嗜血杆菌生长代谢中发挥重要作用的蛋白包括铁离子abc转运底物结合蛋白afua、abc结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶oppa和多胺转运蛋白potd中的至少一种。
3.一种副猪嗜血杆菌的混合蛋白抗原，其特征在于，包含wp_035493594.1、铁离子abc转运底物结合蛋白afua、abc结合盒转运蛋白家族的寡肽透过酶oppa和多胺转运蛋白potd。
4.用于防治副猪嗜血杆菌的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括下述任一种：
5.根据权利要求4所述生物材料，其特征在于，所述重组载体组合物的基础载体包括原核表达载体。
【专利技术属性】
技术研发人员：何玉龙，郝越，舒建洪，段誉，柴文琴，冯华朋，吴超，
申请(专利权)人：杭州依思康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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