【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物科学，尤其涉及一种pcr检测试剂及方法和应用。
技术介绍
1、组织聚合酶链反应（polymerase chain reaction，pcr）是一种常用的分子生物学技术，近年来用于检测和放大组织样本中的特定dna或rna序列，方法操作方便、实验室污染风险低。在中枢神经系统感染性疾病的临床诊断中，pcr被广泛用于检测脑脊液等样本的病原学检测。但是对于颅内占位病变（bml）来说，pcr目前尚未用于常规检测，尤其是hiv感染相关的诊断。
2、艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，简称aids）是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，简称hiv）引起的一种严重的免疫系统疾病。艾滋病患者由于免疫系统受损，容易发生感染性病变，在中枢神经系统（central nervous system，cns）中可能形成多种颅内占位病变（brain mass lesions，bml）；感染炎症刺激或占位效应导致患者颅内压力增加，可能造成头痛、癫痫发作、意识障碍或昏迷等，容易造成较高的病死率和不良预后，早期诊断和及时治疗对于改善患者颅内感染性占位病变的预后至关重要。常规的影像学，如电子计算机断层扫描（ct）、核磁共振成像（mri）和实验室检查（如血液及脑脊液的生化、病原检测）对于识别病变位置、评估周围组织受累和炎症反应程度具有辅助意义，立体定向颅内病变活检病理诊断为进一步明确病变的性质和病因提供了支持。但是根据以往临床经验，aids相关的颅内占位病变病
3、现有研究成果证明pcr技术可显著提高hiv感染者中枢神经系统（cns）感染性疾病的诊断效率，初步得出组织标本的pcr检测技术对于此类疾病诊断有着较高的特异性和灵敏性。 pcr 技术可用于多种病原微生物的同时检测或鉴定、某些遗传病及癌基因的分型鉴定等，具有高效性、系统性、经济简便性的特点。但是就hiv感染者中枢神经系统（cns）感染性疾病的诊断而言，目前的实验室pcr技术针对单一病原检测，费时费力，延误治疗进度，因此，亟需将pcr技术应用于hiv感染者中枢神经系统（cns）的颅内占位病变（bml），提高hiv感染者中枢神经系统（cns）感染性疾病的检测效率，以快速区分hiv感染者中枢神经系统（cns）是否发生了颅内病原感染，能够尽早对疑似病例做出正确的实验室诊断，对改善患者颅内感染性占位病变的预后工作具有极其重要的意义。
技术实现思路
1、鉴于上述的分析，本专利技术实施例旨在提供一种pcr检测试剂及方法和应用，用以解决现有的实验室pcr技术仅针对单一病原进行检测，费时费力，延误治疗进度，艾滋病中枢神经系统感染病原体的检测效率低的问题。
2、本专利技术的目的主要是通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术提供了一种pcr检测试剂，所述检测试剂包括ebv dna扩增试剂、hcmv dna扩增试剂、hsv dna扩增试剂、tb dna扩增试剂、jcv dna扩增试剂和tg dna扩增试剂中的一种或几种；
4、所述ebv dna扩增试剂包括ebv正向引物、ebv反向引物；ebv正向引物的序列为：cagctttgacgatggagtag；ebv反向引物的序列为：cayctccdtcatctccgtcat；
5、所述hcmv dna扩增试剂包括hcmv的正向引物、hcmv反向引物；hcmv正向引物的序列为：cttcttatcaccatcagcg；hcmv反向引物的序列为：gacgctggtgggggtcggc；
6、所述hsv dna扩增试剂包括hsv的正向引物、hsv反向引物；hsv正向引物的序列为：ggyctgycccatccgaacg；hsv反向引物的序列为：caggtacgtrccsgcggtct；
7、所述tb dna扩增试剂包括tb正向引物、tb反向引物；tb正向引物的序列为：ctccgtacccggagcgccaa；tb反向引物的序列为：gaatcggtctggacgtcaagg；
8、所述jcv dna扩增试剂包括jcv正向引物、jcv反向引物；jcv正向引物的序列为：gctcatacctagggagcc；jcv反向引物的序列为：aggggtttcactataactg；
9、所述tg dna扩增试剂包括tg的正向引物、tg反向引物；tg正向引物的序列为：gagcacgcaaccctggacc；tg反向引物的序列为：cacctcagtctcttgcctgc。
10、进一步地，所述ebv dna扩增试剂还包括ebv荧光探针，ebv荧光探针的序列为：fam-cggcagccccttccaccatagg-bhq1；和/或，
11、所述hcmv dna扩增试剂还包括hcmv荧光探针，hcmv荧光探针的序列为：fam-ccacgctgacaacccactctt-bhq1；和/或，
12、所述hsv dna扩增试剂还包括hsv荧光探针，hsv荧光探针的序列为：agcgccgtcagcgaggat；和/或，
13、所述tb dna扩增试剂还包括tb荧光探针，tb荧光探针的序列为：fam-tctccttcgctaagctgcgc-bhq1；和/或，
14、所述jcv dna扩增试剂还包括jcv荧光探针，jcv荧光探针的序列为：fam-cagccagagggagccct-bhq1；和/或，
15、所述tg dna扩增试剂还包括tg荧光探针，tg荧光探针的序列为fam-tagcggaatgagcaattgtgc-bhq1。
16、本专利技术还提供了上述pcr检测试剂的应用，所述应用包括以下任一项：
17、检测引发艾滋病中枢神经系统感染病原体；
18、制备用于检测引发艾滋病中枢神经系统感染病原体的试剂盒；
19、检测待测样本是否含有引发艾滋病中枢神经系统感染病原体；
20、制备用于检测待测样本是否含有引发艾滋病中枢神经系统感染病原体的试剂盒。
21、本专利技术还提供了一种艾滋病中枢神经系统感染的pcr检测试剂盒，所述试剂盒包括上述pcr检测试剂中的六种扩增试剂。
22、进一步地，上述pcr检测试剂盒中，所述ebv正向引物的原始浓度为50μm，在25μl反应体系中的终浓度为300nm；所述ebv反向引物的原始浓度为50μm，在25μl反应体系中的终浓度为300nm；所述ebv荧光探针的原始浓度为50μm，在25μl反应体系中的终浓度为150nm。
23、进一步地，所述ebv dna扩增试剂、hcmv dna扩增试剂、hsv dna扩增试剂、tb dna扩增试剂、jcv dna扩增试剂和tg dna扩增试剂中还分别包括taq dna 聚合酶，氯化镁溶液，氯化钾溶液，dntps，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括EBV DNA扩增试剂、HCMV DNA扩增试剂、HSV DNA扩增试剂、TB DNA扩增试剂、JCV DNA扩增试剂和TG DNA扩增试剂中的一种或几种；
2.根据权利要求1所述的一种PCR检测试剂，其特征在于，
3.权利要求1-2任一项所述的PCR检测试剂的应用，其特征在于，所述应用包括以下任一项：
4.一种艾滋病中枢神经系统感染的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-2任一项所述的PCR检测试剂中的六种扩增试剂。
5.根据权利要求4所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述EBV正向引物的原始浓度为50μM，在25μL反应体系中的终浓度为300nM；所述EBV反向引物的原始浓度为50μM，在25μL反应体系中的终浓度为300nM；所述EBV荧光探针的原始浓度为50μM，在25μL反应体系中的终浓度为150nM。
6. 根据权利要求4所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述EBV DNA扩增试剂、HCMVDNA扩增试剂、HSV DNA扩增试剂、TB
7.根据权利要求6所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，
8.根据权利要求4-7任一项所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为6孔以上，每孔中包含一种扩增试剂。
9.一种艾滋病中枢神经系统感染病原体的PCR检测方法，其特征在于，使用权利要求8所述PCR检测试剂盒进行检测，包括以下步骤：
10. 根据权利要求9所述的PCR检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述PCR扩增反应的条件为：预变性温度：95℃；预变性时间：5min；然后95℃ 15s，60℃ 35s，在60℃进行荧光检测，交替进行 50个循环。
...【技术特征摘要】
1.一种pcr检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括ebv dna扩增试剂、hcmv dna扩增试剂、hsv dna扩增试剂、tb dna扩增试剂、jcv dna扩增试剂和tg dna扩增试剂中的一种或几种；
2.根据权利要求1所述的一种pcr检测试剂，其特征在于，
3.权利要求1-2任一项所述的pcr检测试剂的应用，其特征在于，所述应用包括以下任一项：
4.一种艾滋病中枢神经系统感染的pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-2任一项所述的pcr检测试剂中的六种扩增试剂。
5.根据权利要求4所述的pcr检测试剂盒，其特征在于，所述ebv正向引物的原始浓度为50μm，在25μl反应体系中的终浓度为300nm；所述ebv反向引物的原始浓度为50μm，在25μl反应体系中的终浓度为300nm；所述ebv荧光探针的原始浓度为50μm，在25μl反应体系中的终浓度为150nm。
6. 根据权利要求4所...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁博，梁庭毓，冯恩山，刘红杏，周新刚，丁兴欢，杨思源，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京地坛医院，
类型：发明
国别省市：
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