【技术实现步骤摘要】
本专利技术实施例涉及医学组织切片，具体涉及一种冰冻包埋剂及其制备方法。
技术介绍
1、外科病理学是疾病诊断和医学研究的重要学科，尤其是在肿瘤性病变的诊断中具有决定性作用，被称为诊断的“金标准”。但是，在很多种情况下，经常会有病例并不能在手术前通过常规组织病理学检查获得明确诊断。因而，常常需要在手术过程中对病变进行病理学诊断。总所周知，由于人体组织的生物物理学特征，常温状态下无法制备出组织切片用于病理学诊断。因而，通常需要先将拟在手术过程中对病变进行病理学诊断的组织样本进行规范化的病理取材，并经快速冰冻成块，才能制作出组织切片进行病理学诊断。由于这一制片方法需要在手术进行过程中对组织块进行快速冰冻才完成，因而被称为“手术中快速冰冻病理检查”，简称“术中冰冻”。
2、目前，术中冰冻已经成为在手术中快速确定病变性质的常规病理学诊断技术，对于明确病变性质、协助外科医生确定手术方式和手术切除范围具有决定性作用。因而，备受外科医生推崇。然而，尽管快速冷冻能将组织冻结成块，并便于使用冰冻切片机切出冰冻切片后，经苏木素-尹红(he)染色后用于病理学诊断。但是，由于快速冰冻组织切片通常厚5μm左右，明显厚于常规石蜡切片。同时，由于经快速冰冻还使组织脆性明显增加，常常会造成切片不连续、皱折及碎裂。而且，由于人体组织细胞内水分含量丰富，在快速冰冻过程不可避免会形成大小不一的冰晶，而冰晶的形成会在组织切片上形成大小不一的空泡、裂隙，进而破坏组织细胞的形态结构。因此，快速冰冻切片的质量一般均差于常规石蜡包埋组织切片，这在很大程度上直接影响或制
3、再者，快速冰冻引起组织内冰晶的形成对组织细胞结构的破坏，还会直接破坏组织细胞内分子的精准定位，并造成相应分子的丢失、弥散，继而影响免疫组织化学染色等后续检测结果的精准性，甚至导致检测失败及漏诊、误诊的发生。可见，减少冰晶的形成是提升术中冰冻切片质量的关键。为此，通常建议用干纱布吸干组织表面水分，使用冰冻包埋剂，应用冰冻速率高的冰冻切片机，或用液氮来完成组织块的速冻等措施以减少冰晶的形成。但是，实际效果并不明显。
4、目前，临床广泛使用的oct(optimum cutting temperature compound)冰冻包埋剂的作用仅仅是在快速冰冻切片过程中为小的组织样本提供一个软质底座，增加组织样本与冰冻样本托表面之间的垂直距离，减少切片难度，防止刀片与冰冻样本托的直接碰撞，以免造成刀片或冰冻样本托的损伤。同时，oct冰冻包埋剂并不具备有效减少冰冻过程中组织细胞内冰晶形成，减轻组织细胞损伤的作用。因而，并不能有效改善快速冰冻切片的质量。此外，oct冷冻包埋剂是一种含有聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，其中的聚乙烯醇是一种有机化合物，化学式为[c2h4o]n，外观呈白色片状、絮状或粉末状固体。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单已将聚乙烯醇列为3类致癌物。聚乙烯醇对眼睛有刺激作用，吸入、摄入会对身体造成一定伤害。再者，虽然oct混合物中的聚乙烯醇可溶于水，但完全溶解仍需加热到65℃～75℃，而在实际工作中，快速冰冻组织切片制备过程是在室温条件下(25℃)进行的。因而，使用oct冰冻包埋剂后的组织样本中必然会有不等量的聚乙烯醇残留，这不仅可能会对后续检测造成不良影响，还有可能通过接触而影响操作人员的身体健康。
5、由此可见，现有技术方案仍旧难以从根本上减少组织样本在快速冰冻过程中组织细胞内的冰晶形成，因而并不能有效提升术中冰冻切片质量，保障术中冰冻病理诊断的准确性。因此，亟需探索新的术中冰冻的组织样本处理技术，研发一种既能效减少快速冰冻过程中组织细胞内的冰晶形成、降低组织细胞损伤，增加组织在切片过程中组织切片的连续性，并减少组织切片的皱折及碎裂，提高冰冻切片的质量和后续免疫组化检测的精准性，又能为小块组织样本提供一个软质支持底座，且安全无毒的新型冰冻包埋剂，无疑具有重要的临床价值，且具有一定迫切性。
技术实现思路
1、为此，本专利技术实施例提供一种冰冻包埋剂及其制备方法，该冰冻包埋剂不仅能为小块组织冰冻切片提供一个软质底座，还能有效减少快速冰冻过程中组织细胞内的冰晶形成、降低组织细胞损伤，增加组织的连续性，减少组织在切片过程中皱折及碎裂的发生率，提高冰冻切片质量和后续免疫组化检测结果的精准性，同时，还具有配制简单、成本低廉、使用方便、无毒无生物安全风险等优点。
2、为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：
3、根据本专利技术实施例的第一方面，本专利技术提供一种冰冻包埋剂，所述冰冻包埋剂由如下重量份数的原料组成：二甲基亚砜5.5-16.5份、水性增稠剂0.1-1.0份和水100份，其中，所述水性增稠剂为黄原胶或瓜尔豆胶。
4、本专利技术对快速冰冻过程过程中组织和细胞内冰晶形成机制进行了深入分析，认为组织和细胞内水分含量高是形成冰晶的主要原因，因此能否快速吸附组织细胞内的水分是有效减少组织和细胞内冰晶形成的关键。
5、为此，本专利技术对具有吸水性的水性增稠剂进行了研究。膨润土、凹凸棒土、硅酸铝等无机增稠剂是一类具有吸水膨胀而形成触变性特征的凝胶矿物，但其缺乏粘附性，冷冻后无法切片。聚丙烯酸酯和缔合型聚氨酯增稠剂类有机增稠剂呈酸性，须用碱或氨水中和至ph8～9才能具有增稠作用，因而也不适用配制术中冰冻包埋剂。纤维素类增稠剂主要包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等，其可通过疏水主链与周围分子的氢键缔合，提高体系粘度，但是，纤维素类增稠剂具有较高的韧性和弹性，会直接影响增稠剂水溶液与冰冻组织之间的结合。由此可见，以上物质均不适用于制备冰冻包埋剂。
6、本专利技术还发现，天然增稠剂，如植物多糖物质(包括果胶、阿拉伯胶、瓜尔胶、槐豆胶等)；海藻多糖物质(包括琼脂、海藻酸类、卡拉胶等)；微生物多糖类(包括黄原胶、茁霉多糖等)；动物类物质(包括多糖、甲壳、蛋白、明胶等)等不仅具有良好的水溶性和增稠作用，而且对酸碱、温度高度稳定。其中，来自于微生物的黄原胶和来源于植物的瓜尔豆胶具有较好的水溶性，能在低质量分数下呈现很高的粘度，因此，本申请的水性增稠剂优选黄原胶和瓜尔豆胶。
7、进一步地，本专利技术发现，向上述水性增稠剂的水溶液体系中加入一定量的二甲基亚砜，由于二甲基亚砜具有很好的组织细胞渗透性，有助于渗透入组织细胞间隙和细胞内，与水分子结合，从而减少组织细胞内外的冰晶形成，且并不影响组织组织的冷冻效果，对样本的后续处理和分子靶标的检测也无任何不良影响。同时，黄原胶或瓜尔豆胶属于大分子多糖类物质，除了能形成很好的包埋基质为待冰冻的组织块提供一个软质支持底座之外，还能有效吸附组织块表面和切面的水分。因而，联合使用二甲基亚砜和黄原胶或瓜尔豆胶，二者即可发挥增效协同作用，共同减少组织细胞内的冰晶形成，从而有效提升冰冻切片的质量。
8、进一步地，所述冰冻包埋剂由如下重本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种冰冻包埋剂，其特征在于，所述冰冻包埋剂由如下重量份数的原料组成：二甲基亚砜5.5-16.5份、水性增稠剂0.1-1.0份和水100份，其中，所述水性增稠剂为黄原胶或瓜尔豆胶。
2.根据权利要求1所述的冰冻包埋剂，其特征在于，所述冰冻包埋剂由如下重量份数的原料组成：二甲基亚砜11份、水性增稠剂1.0份和水100份。
3.权利要求1或2所述的冰冻包埋剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将二甲基亚砜和水性增稠剂加入水中混匀。
4.权利要求1或2所述的冰冻包埋剂在手术中快速冰冻病理检查中的应用。
5.一种快速冰冻组织切片的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的快速冰冻组织切片的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，快速冷冻的温度为-45℃～-16℃，时间为5-10分钟。
【技术特征摘要】
1.一种冰冻包埋剂，其特征在于，所述冰冻包埋剂由如下重量份数的原料组成：二甲基亚砜5.5-16.5份、水性增稠剂0.1-1.0份和水100份，其中，所述水性增稠剂为黄原胶或瓜尔豆胶。
2.根据权利要求1所述的冰冻包埋剂，其特征在于，所述冰冻包埋剂由如下重量份数的原料组成：二甲基亚砜11份、水性增稠剂1.0份和水100份。
3.权利要求1或2所述的冰冻包埋剂的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭睿，金雪媛，苏文秀，靳耀锋，李曼，杨军，
申请(专利权)人：西安交通大学医学院第二附属医院，
类型：发明
国别省市：
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