【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，更具体地说，它涉及一种促进免疫细胞荧光染色实验抗原暴露的方法。
技术介绍
1、细胞免疫荧光染色方法中的细胞对象可以是贴壁的细胞，也可以是悬浮培养的细胞。对于贴壁细胞，可以直接在培养皿或者细胞爬片中进行直接固定并进行免疫荧光染色。而对于悬浮生长的细胞或细胞团，可采用细胞爬片或者离心收集细胞后在离心管里进行固定并进行染色。目前已报道的免疫荧光细胞染色方法(专利cn101329230b,cn102288471b)，都包括固定、通透、封闭、染色(表面和核内染色)和洗涤这5个标准步骤。相较于传统的细胞培养，3d细胞培养主要以细胞外机制为支架，模拟细胞体内的微环境，重现上皮细胞与基底膜或间质等细胞相互作用的关系。3d培养的细胞通常是形成球体，或者细胞多层重叠生长，细胞与细胞外基质间结合紧密。常见的免疫荧光染色方法中通透的作用就是去除蛋白间的交联，保证抗体能够到达抗原部位。然而传统的通透方式不能够有效促进抗体进入3d球体或者多层重叠培养的细胞。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种促进免疫细胞荧光染色实验抗原暴露的方法，以解决上述技术问题。
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种促进免疫细胞荧光染色实验抗原暴露的方法，包括如下步骤，s1：染色前固定：使用4％多聚甲醛固定5分钟，pbs清洗3次，每次2分钟；
3、s2：抗原暴露：a、胃蛋白溶液配制：称取10mg胃蛋白酶粉末溶于10ml 0.01n hcl溶液，浓度为1m
4、s3：破膜：加入0.01％triton-100溶液室温下孵育5分钟，pbs洗3次，每次5分钟；
5、s4：封闭：使用1％bsa溶液，室温下孵育30分钟；
6、s5：一抗：稀释过的一抗4℃孵育，过夜；pbs洗3次，每次5分钟；
7、s6：二抗：荧光标记的二抗进行37℃孵育30分钟；pbs洗3次，每次5分钟；
8、s7：加入即用型dapi封片剂。
9、综上所述，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术主要争对的是3d培养条件下贴壁细胞的免疫荧光染色方法，通过胃蛋白酶的处理，可以有效解决重叠生长细胞或包埋在表层细胞下细胞的抗原未完全暴露而导致染色效果差的问题。此技术方法对于三维贴壁细胞具有很好的染色效果，有效暴露3d培养细胞内部的抗原，促进抗体到达细胞内抗原部位。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种促进免疫细胞荧光染色实验抗原暴露的方法，其特征是：包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种促进免疫细胞荧光染色实验抗原...
【专利技术属性】
技术研发人员：王敏君，陈费，徐守佳，金宜强，
申请(专利权)人：上海拜羡生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。