【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子诊断领域，特别是涉及一种二氧化硅微球复合物及其制备方法和用途。
技术介绍
1、当代标记免疫检测技术是在抗原抗体特异性反应的基础上，通过标记不同的检测标记物，并配以相适宜的检测仪器进行检测，从而将特异性反应的信号放大，达到对低丰度样品进行定性定量检测目标物质的技术。随着当代标记免疫检测技术的发展，技术手段不断向着灵敏度高、特异性强、操作便利以及造价便宜的方向更新。在一些癌症、神经系统疾病、疾病感染的早期阶段，生物标志物往往处于极低的浓度，因此开发更高灵敏度的免疫检测技术，对疾病的早期诊断以及预后随访具有重要意义。
2、免疫pcr(immuno-pcr,im-pcr)是利用抗原抗体反应的特异性和pcr扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原的检测技术。该项技术在抗原抗体特异性反应的基础上，连接dna与检测抗体，将信号通过pcr呈指数放大，从而提高检测的灵敏度和检测范围。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种二氧化硅微球复合物及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种二氧化硅微球复合物，所述二氧化硅微球复合物为二氧化硅微球表面直接或间接附着有多肽和多核苷酸。
3、优选地，所述二氧化硅微球复合物的表面还直接或间接附着有第一交联剂和第二交联剂；其中，所述第一交联剂与所述第二交联剂所述多核苷酸或所述多肽通过化学键连接；或，所述第二交联剂与所述多肽
4、本专利技术还提供前述二氧化硅微球复合物的制备方法，所述制备方法包含如下步骤：
5、1)将第一交联剂和二氧化硅微球混合，使二氧化硅微球活化；
6、2)将多核苷酸和步骤1)中活化后的二氧化硅微球混合，获得负载多核苷酸的二氧化硅微球；
7、3)将第二交联剂和步骤2)中负载多核苷酸的二氧化硅微球混合；
8、4)将多肽和步骤3)中负载多核苷酸的二氧化硅微球混合，与封闭液混合封闭，获得所述二氧化硅微球复合物。
9、本专利技术还提供前述二氧化硅微球复合物在制备免疫pcr产品中的用途。
10、本专利技术还一种检测试剂盒，所述检测试剂盒包含前述二氧化硅微球复合物。
11、本专利技术还提供一种免疫pcr检测蛋白的方法，所述免疫pcr检测蛋白的方法包含如下步骤：
12、i)将样品与偶联有和样品特异性结合的抗体的磁珠混合，分离磁珠；
13、ii)将如权利要求1-6任一所述的二氧化硅微球复合物与步骤i)中分离的磁珠混合，分离磁珠；
14、iii)对步骤ii)中分离的磁珠，进行荧光定量pcr扩增，通过荧光信号检测样品的含量。
15、如上所述，本专利技术的一种二氧化硅微球复合物及其制备方法和用途，具有以下有益效果：
16、本专利技术可稳定可控的将dna共价标记在二氧化硅微球上，标记效率高，可达90％以上；特异性标记dna达到非特异性吸附dna的几千倍，从标记方法上降低了系统误差，提高了检测的准确性；本专利技术ab标记具有可控性的同时，不影响单克隆抗体自身活性，保证了检测系统的抗原抗体特异性结合能力；本方法的检测灵敏度达到fg/ml级别，可为临床早期诊断提供技术支持，也为其他试剂盒的开发提供一种高灵敏度、高特异性的检测技术手段。
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1.一种二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物为二氧化硅微球表面直接或间接附着有多肽和多核苷酸。
2.根据权利要求1所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物的表面还直接或间接附着有第一交联剂和第二交联剂；其中，所述第一交联剂与所述第二交联剂、所述多核苷酸和/或所述多肽通过化学键连接；或，所述第二交联剂与所述多肽通过化学键连接。
3.根据权利要求2所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述第一交联剂选自EDC、DMTMM或CDI；和/或，所述第二交联剂选自SMCC、Sulfo-EMCS、Sulfo-NHS、Sulfo-SMCC、碘乙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯或琥珀酰亚胺基4-叠氮基苯甲酸酯。
4.根据权利要求2所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物中第一交联剂和第二交联剂的质量比为0.1：1-10：1。
5.根据权利要求1所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物还包含如下特征中的一种或多种：
6.根据权利要求5所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所
7.如权利要求1-6任一所述二氧化硅微球复合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含如下步骤：
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包含如下特征中一种或多种：
9.如权利要求1-6任一所述二氧化硅微球复合物在制备免疫PCR产品中的用途。
10.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含如权利要求1-6任一所述的二氧化硅微球复合物。
11.一种免疫PCR检测蛋白的方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法还包含如下特征的中一种或多种：
...【技术特征摘要】
1.一种二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物为二氧化硅微球表面直接或间接附着有多肽和多核苷酸。
2.根据权利要求1所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物的表面还直接或间接附着有第一交联剂和第二交联剂；其中，所述第一交联剂与所述第二交联剂、所述多核苷酸和/或所述多肽通过化学键连接；或，所述第二交联剂与所述多肽通过化学键连接。
3.根据权利要求2所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述第一交联剂选自edc、dmtmm或cdi；和/或，所述第二交联剂选自smcc、sulfo-emcs、sulfo-nhs、sulfo-smcc、碘乙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯或琥珀酰亚胺基4-叠氮基苯甲酸酯。
4.根据权利要求2所述的二氧化硅微球复合物，其特征在于，所述二氧化硅微球复合物中第一交联剂和第二交联剂的质量比为0.1：1-10：1。
5.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶永辉，刘袁杰，屠蔷，王牧，
申请(专利权)人：上海领检科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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