【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，更具体地，涉及一种用于检测乳腺癌的核酸试剂、试剂盒及应用。
技术介绍
1、目前乳腺癌影像筛查手段主要包括乳腺钼靶x射线检查、乳腺彩超和核磁共振等影像学检查。但乳腺钼靶x射线检查对于致密型乳腺病灶诊断敏感性较低；乳腺彩超阳性预测值较低；核磁共振(mri)对微小钙化灶不敏感。而且影像学检查通常对检查人员的操作水平和经验依赖程度大。这些影像学检查难以作为大规模筛查手段。
2、cfdna(cell-free dna)是外周血中游离的核酸小片段dna，源自正常细胞或肿瘤细胞代谢与凋亡，包含体细胞突变和dna甲基化等遗传信息。通过检测疾病特异性cfdna片段，掌握疾病的发生、发展的技术，称为液体活检(liquid biopsy)，与传统的组织活检相比，其有着迅速、便捷、损伤性小等众多优点。
3、现有技术公开的一些乳腺癌液体活检的试剂盒，通过检测血液样本中生物标志物的甲基化水平诊断乳腺癌的灵敏度、特异性有待提高，尤其是尚缺乏能够用于早期乳腺癌的试剂盒。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供了一种用于检测乳腺癌的核酸试剂、试剂盒及应用，以改善现有技术对乳腺癌检测灵敏度和检测特异性欠佳，缺乏能够用于早期乳腺癌检测的试剂盒等技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种用于检测乳腺癌的核酸试剂，所述核酸试剂包括用于检测第一靶区域和/或第二靶区域中dna甲基化水平的引物对，以grch38.p14为参考基因组，所述
3、优选地，所述第一靶区域包括seq id no.1和seq id no.2中至少一者；所述第二靶区域包括seq id no.3和seq id no.4中至少一者。
4、优选地，所述引物对检测所述第一靶区域和所述第二靶区域。
5、优选地，所述引物对选自如下(a)-(d)组引物对中的至少一组：
6、(a)用于检测seq id no.1区域内甲基化水平的如seq id no.9～10所示的第一引物对；
7、(b)用于检测seq id no.2区域内甲基化水平的如seq id no.12～13所示的第二引物对；
8、(c)用于检测seq id no.3区域内甲基化水平的如seq id no.15～16所示的第三引物对；
9、(d)用于检测seq id no.4区域内甲基化水平的如seq id no.18～19所示的第四引物对。
10、优选地，所述核酸试剂还包括taqman探针。
11、优选地，所述引物对和所述taqman探针选自如下组合中的至少一组：
12、seq id no.9～10所示的第一引物对和seq id no.11所示的第一探针；
13、seq id no.12～13所示的第二引物对和seq id no.14所示的第二探针；
14、seq id no.15～16所示的第三引物对和seq id no.17所示的第三探针；
15、seq id no.18～19所示的第四引物对和seq id no.20所示的第四探针。
16、优选地，所述taqman探针的5’端包含有荧光报告基团，所述taqman探针的3’端包含有荧光淬灭基团。
17、本专利技术还提供了一种用于检测乳腺癌的试剂盒，其包括所述核酸试剂，还包括其他试剂，所述其他试剂包括内参基因的检测引物对和探针、核酸提取试剂、核酸纯化试剂、亚硫酸氢盐转化试剂、pcr反应试剂、阳性对照品和阴性对照品中的一种或多种。
18、本专利技术还提供了所述核酸试剂或所述试剂盒在制备乳腺癌诊断产品中的用途，所述乳腺癌诊断产品包括体外血液甲基化检测试剂盒、芯片和测序文库中的一种或多种。
19、优选地，所述乳腺癌包括早期乳腺癌，所述早期乳腺癌包括ia期乳腺癌、ib期乳腺癌、iia期乳腺癌和iib-t2期乳腺癌中的至少一种。
20、总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
21、本专利技术提供的一种用于检测乳腺癌的核酸试剂和试剂盒，对乳腺癌组织样本、血液样本均具有优异的检测效果，能够有效区分乳腺癌患者和非癌受试者。相较于现有技术，该试剂盒通过检测乳腺癌生物标志物的甲基化水平检测早期乳腺癌血液样本的灵敏度可达90.48％，检测局部晚期、晚期乳腺癌血液样本的灵敏度分别可达93.33％和100.00％，检测乳腺良性肿瘤血液样本的特异性可达99.45％，检测健康人血液样本的特异性可达96.55％，检测准确度高，不易出现假阴性结果，对不同病理分期的乳腺癌均具有优异的检测效果，适用于早期乳腺癌的筛查和诊断。
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1.一种用于检测乳腺癌的核酸试剂，其特征在于，所述核酸试剂包括用于检测第一靶区域和/或第二靶区域中DNA甲基化水平的引物对，以GRCh38.p14为参考基因组，所述第一靶区域为Chr20:38674564-38674765的全长区域或部分区域，所述第二靶区域为Chr10:101284144-101284430的全长区域或部分区域。
2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其特征在于，所述第一靶区域包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2中至少一者；所述第二靶区域包括SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4中至少一者。
3.根据权利要求2所述的核酸试剂，其特征在于，所述引物对检测所述第一靶区域和所述第二靶区域。
4.根据权利要求2或3所述的核酸试剂，其特征在于，所述引物对选自如下(a)-(d)组引物对中的至少一组：
5.根据权利要求1至3任一项所述的核酸试剂，其特征在于，还包括TaqMan探针。
6.根据权利要求5所述的核酸试剂，其特征在于，所述引物对和所述TaqMan探针选自如下组合中的至少一组：
8.一种用于检测乳腺癌的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1至7任一项所述的核酸试剂，还包括其他试剂；
9.权利要求1至7任一项所述的核酸试剂或权利要求8所述的试剂盒在制备乳腺癌诊断产品中的用途，其特征在于，所述乳腺癌诊断产品包括体外血液甲基化检测试剂盒、芯片和测序文库中的一种或多种。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述乳腺癌包括早期乳腺癌，所述早期乳腺癌包括IA期乳腺癌、IB期乳腺癌、IIA期乳腺癌和IIB-T2期乳腺癌中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测乳腺癌的核酸试剂，其特征在于，所述核酸试剂包括用于检测第一靶区域和/或第二靶区域中dna甲基化水平的引物对，以grch38.p14为参考基因组，所述第一靶区域为chr20:38674564-38674765的全长区域或部分区域，所述第二靶区域为chr10:101284144-101284430的全长区域或部分区域。
2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其特征在于，所述第一靶区域包括seq id no.1和seq id no.2中至少一者；所述第二靶区域包括seq id no.3和seq id no.4中至少一者。
3.根据权利要求2所述的核酸试剂，其特征在于，所述引物对检测所述第一靶区域和所述第二靶区域。
4.根据权利要求2或3所述的核酸试剂，其特征在于，所述引物对选自如下(a)-(d)组引物对中的至少一组：
5.根据权利要求1至3任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：周俊，万慧，蔡迪，阮彥添，董兰兰，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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