【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种用于鉴定日本医蛭的特异性引物对及方法。
技术介绍
1、水蛭在我国用药历史悠久，常用于治疗多种淤血所致心脑血管疾病。2020年版《中国药典》(一部)(简称药典)规定，药用水蛭为水蛭科动物蚂蝗(宽体金线蛭，whitmaniapigra whitman)、水蛭(日本医蛭，hirudo nipponica whitman)或柳叶蚂蝗(尖细金线蛭，whitmania acranulata whitman)的干燥全体。其中日本医蛭属无吻蛭目医蛭型亚目医蛭科医蛭属，是药典收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材种类，也是国内现有药用水蛭中公认的抗凝效果最好的品种之一，对于心脑血管疾病具有良好的疗效，临床应用广泛。
2、近年来水蛭市场需求不断扩大，一方面野生水蛭资源大幅减产，另一方面人工养殖技术尚未成熟，导致水蛭市场供需缺口扩大，因此存在非药用品种的水蛭药材混淆入药、以次充好等问题。现药典规定的水蛭鉴别方法是通过性状和薄层鉴别，但蛭纲动物种类多，形态特征相似度高，且药材的产地和人工养殖、药材的加工处理方法等都会导致药材的典型性状消失，使用传统的鉴别方法不能满足实际工作需求。使用动物通用dna条形码coi序列可快速进行物种鉴定，通过标准化实验获得样品序列，采用序列比对、建树分析等确认鉴定结果，可作为传统鉴定方法之外的补充方法。但该方法对仪器设备要求高，并要求检验者专业和相关软件使用经验丰富，不适用于基层检验机构快速、高通量的检测应用。因此，需要设计基于扩增小片段基因的引物对，能够快速、准确的鉴定日本医蛭，
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种用于鉴定日本医蛭的特异性引物对。
2、本专利技术的目的之二在于提供上述特异性引物对的应用。
3、本专利技术的目的之三在于提供一种鉴别日本医蛭的方法。
4、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案概述如下：
5、一种用于鉴定日本医蛭的特异性引物对，所述引物对的序列如下：
6、正向引物rb-1：5’-gcatccatgctaggatcctca-3’；
7、反向引物rb-4：5’-ggaaggaatcaattaccaaagcc-3’。
8、上述引物对在鉴定日本医蛭中的应用。所述应用包括：
9、(1)采用权利要求1中所述的引物对鉴别待测样品是否为日本医蛭；
10、(2)采用权利要求1中所述的引物对鉴别待测样品是否含有日本医蛭成份。
11、通过试验验证，本专利技术所选用的引物能够鉴别出其中的日本医蛭样品。
12、本专利技术的优点：
13、本专利技术找到了一对用于日本医蛭鉴别的特异性引物，具有特异性强、灵敏度高等优点。采用本专利技术的引物及方法进行鉴别试验，不受样品性状完整性影响，操作简单易行，只需提取样品基因组dna，采用rb 1-4引物对进行pcr反应，通过琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物条带大小，即可判断出样品是否为日本医蛭或含有日本医蛭成分。
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1.一种用于鉴定日本医蛭的特异性引物对，其特征在于，所述引物对的序列如下：
2.权利要求1所述的引物对在鉴定日本医蛭中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括：
4.一种用于鉴定日本医蛭的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
5.一种检测待测样品是否含有日本医蛭的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：提取待测样品的总DNA并以其为模板，采用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的大小，当待测样品出现176bp条带时，即可判断该待测样品含有日本医蛭成份，如果不能扩增出176bp条带，则所述待测样品不含日本医蛭成分。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当PCR反应体系为50μL时，其中Premix Taq25μL，上游引物：5μmol，2μL；下游引物：5μmol，2μL；DNA模板：25ng/μL，4μL，ddH2O 17μL。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，进行所述PCR扩增时，采用的扩增程序具体为：94℃预变
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定日本医蛭的特异性引物对，其特征在于，所述引物对的序列如下：
2.权利要求1所述的引物对在鉴定日本医蛭中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括：
4.一种用于鉴定日本医蛭的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。
5.一种检测待测样品是否含有日本医蛭的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：提取待测样品的总dna并以其为模板，采用权利要求1所述的引物对进行pcr扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物的大小，当待测样品出现176bp条带时，...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘爽，刘金花，张莹，孙巧巧，张羽，李鹏举，刘子超，
申请(专利权)人：济宁市食品药品检验检测研究院济宁市药品不良反应监测中心，
类型：发明
国别省市：
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