【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品检测领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒及方法。
技术介绍
1、核苷酸是生物体内重要的低分子化合物，具有许多特殊的生理功能。胞苷酸(cmp)、尿苷酸(ump)、鸟苷酸(gmp)、肌苷酸(imp)、腺苷酸(amp)、次黄嘌呤(hx)、肌苷(hxr)、二磷酸腺苷(adp)和三磷酸腺苷(atp)均具有强烈的呈鲜味作用，是已知能产生鲜美可口味道的重要化合物，能增强肉质鲜味。肌苷酸(inosine-5′-monophosphate，imp)是一种单核苷酸，作为atp代谢中产物，天然存在于肌肉中。在食品中又是一种风味物质，能增强肉质鲜味，其增加鲜味的能力比谷氨酸钠强40倍。肌苷酸作为鲜味物质，主要是由于肌苷酸与谷氨酸钠之间有强烈的正相关，肌苷酸和谷氨酸钠以1：5至1：20的比例混合谷氨酸钠的鲜味可增至数倍，并且对酸、苦味有控制作用，即有味觉缓冲作用。其作用机理是由于核苷酸把金属离子从鲜味感觉部位上除去，而使谷氨酸钠在味觉神经上有效的作用。
2、畜禽产品中肌苷酸含量不仅受到其品种、年龄、部位等自身因素的影响，还受屠宰日龄、屠宰方法、肌肉贮藏时间等外界条件的影响。此外，饲养密度、光照等因素也对肌苷酸含量也有不同程度影响。目前，作为肉质评定的重要指标，肌肉组织中肌苷酸含量的测定已广泛应用于各种动物类肉制品的品质评定，已经成为衡量肉质品质的一项重要指标。因此，建立一种准确、快速、高效测定畜禽肌肉中肌苷酸含量的检测方法，对畜禽产品的品质评定具有重要意义。
3、作为畜禽肉
4、目前，关于畜禽肉中核苷酸含量测定国内外标准主要有jecfa标准ins no.630《5'-inosinic acid》、gb 1886.97—2015《食品安全国家标准食品添加剂5‘-肌苷酸二钠》附录a和qb/t 4261—2011《食品添加剂5′-肌苷酸二钠》，这3份标准均采用紫外分光光度法。近两年，山东省市场监督管理局颁布地方标准db 37/t 3816—2019《畜禽肌肉中肌苷酸含量测定高效液相色谱法》和宁夏化学分析测试协会颁布t/naia 003—2020《肌肉中肌苷酸的测定高效液相色谱法》，同时，国标gb 5413.40—2016《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》提供了针对婴幼儿食品和乳品种5种核苷酸的测定，未对畜禽肉产品制定相关标准。
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述技术问题，本专利技术提供了一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒及其方法，所述的这种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒及其方法要解决现有技术中检测畜禽产品中胞苷酸(cmp)、尿苷酸(ump)、鸟苷酸(gmp)、肌苷酸(imp)、腺苷酸(amp)、次黄嘌呤(hx)、肌苷(hxr)、二磷酸腺苷(adp)和三磷酸腺苷(atp)含量的方法复杂的技术问题。
2、本专利技术提供了一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，所述的呈味核苷酸为胞苷酸(cmp)、尿苷酸(ump)、鸟苷酸(gmp)、肌苷酸(imp)、腺苷酸(amp)、次黄嘌呤(hx)、肌苷(hxr)、二磷酸腺苷(adp)和三磷酸腺苷(atp)，包括：高浓度提取试剂、标准曲线溶液、高浓度磷酸盐缓冲溶液、ph调节溶液a、ph调节溶液b；
3、所述高浓度提取试剂为高氯酸；所述标准曲线溶液为九种呈味核苷酸的混合溶液；所述高浓度磷酸盐缓冲溶液为磷酸二氢钾和磷酸氢二钾溶液；所述ph调节液a为氢氧化钠，所述的氢氧化钠的浓度为0.8mol/l～1mol/l；所述ph调节液b为磷酸，所述的磷酸的浓度为4mol/l～5mol/l。
4、进一步的，所述高浓度提取试剂中高氯酸的浓度为5％～6％(v/v)；所述高浓度磷酸盐缓冲溶液中磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的浓度分别为8mol/l。
5、进一步的所述的九种呈味核苷酸混合溶液分别制作八个批次，第一次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为0.2μg/ml，第二次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为0.5μg/ml，第三次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为1.0μg/ml，第四次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为5.0μg/ml，第五次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为10.0μg/ml，第六次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为20.0μg/ml，第七次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为50.0μg/ml和第八次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为100.0μg/ml。
6、本专利技术的一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸含量的方法，用于同时检测胞苷酸(cmp)、尿苷酸(ump)、鸟苷酸(gmp)、肌苷酸(imp)、腺苷酸(amp)、次黄嘌呤(hx)、肌苷(hxr)、二磷酸腺苷(adp)和三磷酸腺苷(atp)的含量，包括如下步骤：
7、(1)在畜禽产品中加入高浓度提取试剂，用均质仪混匀，得到第一提取液；用高浓度提取试剂清洗均质仪刀头得到第二提取液；混合第一提取液和第二提取液，离心后取上清液过膜，得到样品溶液，然后进行高效液相色谱(配备紫外检测器)检测；
8、(2)准确吸取5ml高浓度磷酸缓冲溶液，加入900ml超纯水，用ph调节液a和ph调节液b调节ph至4.6，定容至1000ml，配制成0.04mol/l的磷酸盐缓冲液作为流动相；
9、(3)根据胞苷酸(cmp)、尿苷酸(ump)、鸟苷酸(gmp)、肌苷酸(imp)、腺苷酸(amp)、次黄嘌呤(hx)、肌苷(hxr)、二磷酸腺苷(adp)和三磷酸腺苷(atp)混合标准工作溶液进行高效液相色谱检测，并以质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，将样品溶液中胞苷酸(cmp)、尿苷酸(ump)、鸟苷酸(gmp)、肌苷酸(imp)、腺苷酸(amp)、次黄嘌呤(hx)、肌苷(hxr)、二磷酸腺苷(adp)和三磷酸腺苷(atp)的色谱峰面积代入到标准工作曲线中，计算得到各物质的含量。
10、上述制备方法的优选方式如下：
11、所述步骤(1)中高浓度提取试剂为5％～6％(v/v)高氯酸溶液。
12、所述步骤(2)中高浓度磷酸盐缓冲溶液中磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的浓度分别为8mol/l。
13、所述步骤(1)、(3)中高效液相色谱(配备紫外检测器)参数均为：
14、色谱柱：c18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)或相当者；进样体积：5μl～10μ本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，其特征在于：所述的呈味核苷酸为胞苷酸、尿苷酸、鸟苷酸、肌苷酸、腺苷酸、次黄嘌呤、肌苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，所述的试剂盒中含有高浓度提取试剂、标准曲线溶液、高浓度磷酸盐缓冲溶液、pH调节溶液A、pH调节溶液B；
2.根据权利要求1所述的一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，其特征在于：所述高浓度提取试剂中高氯酸的浓度为5％～6％(V/V)；所述高浓度磷酸盐缓冲溶液中磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的浓度分别为8mol/L。
3.根据权利要求1所述的一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，其特征在于：所述的九种呈味核苷酸混合溶液分别制作八个批次，第一次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为0.2μg/mL，第二次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为0.5μg/mL，第三次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为1.0μg/mL，第四次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为5.0μg/mL，第五次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为10.0μg/mL，第六次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为20.0μg/mL，第七次批次中
4.采用权利要求1所述的试剂盒同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸含量的方法，九种呈味核苷酸分别为胞苷酸、尿苷酸、鸟苷酸、肌苷酸、腺苷酸、次黄嘌呤、肌苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷的含量，其特征在于包括如下步骤：
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中高浓度提取试剂为5％～6％(V/V)高氯酸溶液；所述步骤(2)中高浓度磷酸盐缓冲溶液中磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的浓度分别为8mol/L。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)、(3)中高效液相色谱的参数均为：
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中畜禽产品和高浓度提取试剂的质量体积比为5g：10mL。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中离心速率为8000r/min，离心时间为5min。
...【技术特征摘要】
1.一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，其特征在于：所述的呈味核苷酸为胞苷酸、尿苷酸、鸟苷酸、肌苷酸、腺苷酸、次黄嘌呤、肌苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，所述的试剂盒中含有高浓度提取试剂、标准曲线溶液、高浓度磷酸盐缓冲溶液、ph调节溶液a、ph调节溶液b；
2.根据权利要求1所述的一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，其特征在于：所述高浓度提取试剂中高氯酸的浓度为5％～6％(v/v)；所述高浓度磷酸盐缓冲溶液中磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的浓度分别为8mol/l。
3.根据权利要求1所述的一种同时检测畜禽产品中九种呈味核苷酸的试剂盒，其特征在于：所述的九种呈味核苷酸混合溶液分别制作八个批次，第一次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为0.2μg/ml，第二次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为0.5μg/ml，第三次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为1.0μg/ml，第四次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为5.0μg/ml，第五次批次中的任意一种呈味核苷酸的浓度为10.0μg/ml，第六次批次中的任意...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈柔含，张维谊，邓波，马颖清，杨晓君，王霞，宋宇迎，杨静，王晓旭，
申请(专利权)人：上海市农产品质量安全中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。